选修1《微生物的利用》

下列无菌操作中，错误的是( ) A.无菌操作的目的是防止杂菌污染 B.用酒精擦拭双手的方法对操作者进行消毒 C.实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行 D.玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭
3.细菌的培养和分离
二、大肠杆菌的培养和分离（阅读教材22和23页）
• • • • 1.大肠杆菌:革 兰氏 、 的 肠道杆菌。 大肠杆菌是 中被 广泛采用的工 具。 2.大肠杆菌的 分离操作技术: 最常用的方法 是 。
灭菌操作
灼烧灭菌 适用材料 或用具 接种环、 接种针或其 他金属用具 高压蒸汽灭菌 培养基，培养皿、试管等 玻璃器具等 LB 培养基: 火焰上充分 培养基: 灼烧,直至烧 ( 红,冷却后备 用 后放入 烘干 ℃(1 kg/cm2 ℃以上 压力)、30 min 玻璃器皿:高压蒸汽灭菌 中 过滤灭菌 尿素等 加热会分 解的物质
在60 ℃左右,将已灭菌的LB全营养固体培养基、尿素固 体培养基分别倒入两个培养皿中,摇匀、平放至 将1 g土样加到装有 mL无菌水的三角瓶中,振荡 10 min,得到10-2土壤稀释液,依次制备出10-3、10-4、10-5土 壤稀释液
倒平板
制备
取10-4和10-5土壤稀释液各0.1 mL,分别加到有LB培养基 将菌液涂布到整个 涂布分离 和尿素培养基的培养皿中,用 平面上,各涂布3个培养皿 培养和观察 将培养皿倒置,在37 ℃恒温箱中培养24~48 h,观察菌落 数
阅读教材19页
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• •
思考题：倒平板操作的讨论
• 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板。 你用什么办法来估计培养基的温度？
• 提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度 下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
• 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ • 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 • 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ • 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表 面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培 养基，造成污染。 • 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底 之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
阅读教材21页第2段
有关培养基及成分
LB液体 培养基； 1、若要扩增大肠杆菌，可用_________ 若要分离大肠杆菌，可用________ LB固体 培养基；若要 暂时保存菌种，可用__________ 培养 斜面 2、进行植物组织培养时，需用_________ MS 培养基。 该培养基含有_______ ______________、 琼脂 、水、大量元素与微量元素 生长素和细胞分裂素 蔗糖 及微量有机物 _______________、_______ 3、尿素固体培养基中用___________ 琼脂糖 代替琼脂， 酚红 作为指示剂。该培养基可用来 并加入_________ 分离________________ 。 含有脲酶的细菌
归纳：不同消毒灭菌方法的适用对象 不含高温易分解成分的培养基、各种器皿 1、高压蒸汽灭菌法_______________________________ 接种环、玻璃刮刀、镊子、解剖刀等 2、灼烧灭菌法___________________________________
空气、超净工作台的表面 3、紫外线消毒___________________________________ 不耐高温的溶液如尿素溶液、空气 4、滤过除菌_____________________________________
在酒精灯 压力)、 15 min 含葡萄糖的 灭菌条件 及时间 ________ ___过滤
超净工作台 提前 50 min 左右开启超净工作台,先 灭菌 30 min,然后关闭紫外灯开启 ,运行 20 min,之后超净 台可以开始使用。
写出下列器具或物品消毒灭菌的方法
高压蒸汽灭菌法 1、LB液体培养基________________ 灼烧灭菌法 2、接种环________________ 高压蒸汽灭菌法 3、无菌水________________ 灼烧灭菌法 4、玻璃刮刀_______________ 紫外线灭菌，滤过除菌 5、超净工作台_____________ 尿素溶液滤过除菌，其它成分高压蒸汽灭菌 6、尿素固体培养基_________________ 70%的酒精，5%次氯酸钠溶液，0.1%的升汞等消毒 7、外植体_________________, 90度 500g/cm2压力蒸汽灭菌30分钟 8、含葡萄糖培养基：_________________,
含义 微生物生存的环境和营养物质
①水、无机盐、 和 ,还需满足不同微生物生 长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求 成分 ②LB培养基:蛋白胨、 、 、水、 琼脂(固体培养基) 阅读教材21页最后1段
• 【补充】培养基的类型及其应用：
按不同微生物分,包括细菌培养基(pH源自文库中性偏碱, 添加有机物如蛋白胨、酵母提取物)、霉菌培养 基(pH呈中性 ,添加 )
第1讲 微生物的利用
• 在传统发酵技术的应用中，都利用了微 生物的发酵作用，其中的微生物来自于 制作过程中的自然感染。而在工业化生 产中，为了提高发酵的质量，需要获得 优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这 就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别 等基本技术。
微生物的名称及培养的最适条件
37℃ 1、大肠杆菌培养的最适温度_____________ 脲酶 2、有一些细菌含有_________ ，可通过降解尿素作为其生
• 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
• 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划 线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从 上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加 而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养 基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
思考题：划线分离法操作的讨论
• 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？ 在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生 物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后， 接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源 于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种 的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
判断下列操作是否需要在无菌环境下进行
1、外植体接种入培养基_________ 需要
需要 2、倒平板_____________
3、划线分离__________ 需要
4、炼苗__________ 不需要
5、制备固定化酶柱____________ 不需要
思考题——无菌操作
• 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物 被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
3.实验结果
LB 全营养培养基 结果 菌落数量 ________ 尿素培养基 菌落数量________，一段 时间内，菌落周围出现 ________色区域
课堂小结
实验1.大肠杆菌的培养和分离。（P19） 实验2.分离以尿素为氮源的微生物。（P25）
通过本专题的学习，掌握培养基、消毒灭 菌等有关微生物培养的基础知识，掌握培 养基的制备、高压蒸汽灭菌、划线分离法 和涂布分离法等基本操作技术，并可以运 用相关技术解决生产生活中有关微生物计 数、微生物的分离与培养等实际问题。
有哺乳动物排泄物 长的氮源。取土样时，从______________________ 的地方取。 苹果青霉、黑曲霉 3、有些微生物，如______________________ 等都可用于生 产果胶酶。 枯草杆菌 提取。其作用的最适pH为 4、α-淀粉酶可从______________ 5.5~7.5 ，最适温度为____________ 50~75℃ _________ 无氧 条件 酵母菌 5、制作果酒时，___________ （微生物）在_________ 乙醇和CO2 下进行酒精发酵，该过程会产生___________ 醋化醋杆菌 （微生物）在_________ 有氧 条件 6、制作果醋时，____________ 乙醇 氧化为___________ 乙酸 下，将_________ 。
三、分离以尿素为氮源的微生物 1．实验原理 脲或称尿素，是________降解的产物，有一些细菌含 脲酶，它们通过降解尿素作为其生长的氮源。 脲酶 (NH2)2C===O＋H2O――→ 2NH3＋CO2 在尿素固体培养基中加入________指示剂，如有含脲 酶的细菌存在，这些细菌会向外分泌脲酶，使其周围的培 养基中的尿素分解产生氨,导致培养基 pH 升高,颜色变红 , 呈现出围绕菌落的 。可用 固体培养基 作为对照。 培养基成分:葡萄糖、 NaCl、 K2HPO4、 尿素、 酚红、水、 琼脂糖。琼脂糖只含 C、H、O ,在分离以尿素为氮源的培 养基中充当凝固剂。
• 〖思考1〗在统计菌落数目时，常用来统计样品 中活菌数目的方法是 涂布分离法 。 • 〖思考2〗采用涂布分离法统计菌落数目时，培 养基表面生长的一个菌落，来源于 样品稀释液中 一个活菌 。通过统计 平板上的菌落数 ，就能推 测出样品中大约含有多少个活菌。为了保证结果 准确，一般选择菌落数在 30～300 的平板进行计 数。 • 〖思考3〗从平板上的菌落数推测出每克样品中 的菌落数的计算方法是 （平均菌落数÷涂布的稀 释液体积）×稀释倍数 。 • 〖思考4〗利用涂布分离法成功统计菌落数目的 关键是 恰当的稀释度 。
无氧 条件下________________ 假丝酵母和乳酸菌（微 7、腌制泡菜时，是在_______ 生物）利用菜中的糖和其他营养物质进行发酵，发酵产物 有机酸和醇类物质 亚硝酸 。 有____________________ 等，其中也有__________
一、微生物的实验室培养
• 培养微生物的要领，是为所需要的微生物提供良好 的生存环境，同时阻止或抑制其他微生物的生长。 1、培养基
2.无菌技术
• 知识要点：
• （1）无菌操作泛指在培养微生物的操
作中，所有防止杂菌污染的方法。
• （2）消毒与灭菌的区别；
• （3）常用的消毒与灭菌的方法。
消毒方法： （1）日常生活经常用到的是 煮沸 消毒法； （2）对接种室、接种箱或超净工作台使用 紫外线 进行物理消毒。 （3）实验操作者的双手使用 酒精 进行消毒
P26材料3
• 〖思考1〗在该培养基配方中，为微生物的 生长提供碳源的是 葡萄糖 ，提供氮源的的 是 尿素 ，琼脂糖的作用是 凝固剂 。 • 〖思考2〗该培养基对微生物 具有 （具有， 不具有）选择作用。如果具有，其选择机制 是 只有能够以尿素作为氮源的微生物才能 在该培养基上生长 。
2．实验步骤 是 分离以尿素为氮源的微生物:最常用的方法 。
答：无菌技术还能有效避免操作者 自身被微生物感染。
• 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒 或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 • （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 • （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 • （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
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