最新版中国药典无菌检查法ppt课件
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2005年版中国药典无 菌检查法
◆ 2005年版无菌检查法介绍 ◆ 2005年版药典无菌检查方法的验证
2006－07
2
2005年版无菌检查法介绍
2006－07
3
无菌检查培养基
一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配 制。
培养基的pH值应符合规定，分装好的培养基及时密封后必 须在配制当天（2小时内最佳）进行灭菌处理。
2006－07
12
培养基的灵敏度检查
硫乙醇酸盐12ml，9支，4株菌，各1ml，每种培养 基各接种2支（原3支），另1支培养基空白对照。 培养3d(原5天)。
改良马丁9ml，5支，2株菌，各1ml，每种培养 基各接种2支（原3支），另1支培养基空白对照。 培养5d。
结果判定
空白管培养基无菌生长，加菌的培养基管均生 长良好，判灵敏度检查合格。
⑤非水溶性供试品 取规定量，混合，加入适量的聚山梨酯
溶剂溶解，或按标签说明复溶后，取 规定量接种至培养基中。
2006－07
22
直接接种法9种供试品的处理和接种
④ß-内酰胺类或磺胺类供试品 取规定量，混合，加入适量的无菌ß-内
酰胺酶溶液或对氨基苯甲酸溶液使中和， 接种至培养基中。或接入含ß-内酰胺酶或 对氨基苯甲酸的培养基中。
2006－07
23
直接接种法9种供试品的处理和接种
接种前：培养基氧化层的高度不得超过培养基深度 的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失 （不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次， 并应防止被污染。 培养后：装量与容器高度的比例应符合培养结束 后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的 1/2。
2006－07
9
培养基的装量
直接接种法规定接种的供试品体积不得大 于培养基体积的10%,同时,硫乙醇酸盐流体 培养基每管装量不少于15ml,改良马丁培养 基每管装量不少于10ml;医用器械体积过大 时，培养基用量可在2000ml以上。
2006－07
18
上市抽验样品（液体制剂）的最少检验量
供试品装量V(ml)
≤1 1<V<5 5≤V<20 20≤V<50 50≤V<100 50≤V<100(静脉给药） 100≤V ≤ 500 V ＞ 500
每支样品接入每管培 养基的最少量（ml)
全量 半量
2 5 10 半量 半量
500
最少检验数量（瓶 或支）
2006－07
15
检验量
2006－07
16
供试品 注射剂
批产品出厂最少检验数量
批产量N（个）
每种培养基最少检验数量
≤100
10%或4个（取较多者）
100＜N≤500
10个
＞500
2%或20个（取较少者）
大体积注射剂（>100ml)
2%或10个（取较少者）
眼用及其他非注射产品
≤200
5%或2个（取较多者）
2006－07
14
菌液的制备
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢 杆菌、生孢梭菌30-35℃培养18-24小时的新鲜 培养物，白色念珠菌在23-28℃24-48小时的新 鲜培养物，黑曲霉23-28℃培养5-7天的培养物， 分别用0.9％无菌氯化钠溶液稀释制成每1ml含 菌数小于100cfu的菌悬液。。
薄膜过滤法为100ml/管或50 ml/管．
2006－07
10
无菌检查培养基
培养基的适用性检查 培养基的无菌性检查 培养基的灵敏度检查
符合规定的培养基方可供试品的无菌检 查试验。
2006－07
11
培养基的无菌性检查
每批培养基随机取不少于5支（瓶），培养14天， 应无菌生长。 本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的 无菌检查同时进行，但是，一旦所用培养基不 符合无菌要求，供试品的无菌检查结果应视为 无效。
配制时所用器具应采用洁净玻璃制品，避免增加培养基中 的金属离子及其他微量元素而影响微生物的生长，鉴别。
制备好的培养基应在 2-25℃保存，保存在非密闭容器中， 应在3周内使用；保存在密闭容器中，可在1年内使用。
2006－07
7
无菌检查培养基
1.常用培养基及用途 硫乙醇酸盐流体培养基：培养好氧菌、厌氧菌。 改良马丁琼脂培养基：培养真菌 2.选择性培养基及用途:按硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处
整个材料3
最少检验数量 （瓶或支）
20 10 10 10 10
20 10
整个器具3（切碎或拆
20
散开）
无菌检查方法
直接接种法 薄膜过滤法：只要供试品性状允许，应采用薄
膜过滤法。 优先采用封闭式薄膜过滤器。
2006－07
21
直接接种法9种供试品的处理和接种
①一般水溶性供试品 取规定量，直接接种至培养基中。 ②混悬液等非澄清水溶液供试品 取规定量接种至培养基中。 ③固体制剂供试品 取规定量直接接种，或加入适宜的
（原3支管有2管生长，合格。）
2006－07
13
灵敏度检查用菌种
金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26003】 铜绿假单胞菌【CMCC(B)10104】 枯草芽孢杆菌【CMCC(B)63501】 生孢梭菌【CMCC(B)64941】 白色念珠菌【CMCC(F)98001】
黑曲霉【CMCC(F)98003】
桶装固体原料＞200Fra bibliotek10个
≤4
每个容器
桶装固体原料
抗生素固体原料 药（≥5克） 医疗器具
续上
批产量N（个）
4＜N≤50
＞50
每种培养基最少检验数量 20%或4个容器（取较大者） 2%或10个容器（取较大者）
6个容器
≤100 100＜N≤500
＞500
10%或4件（取较大者） 10件
2%或20件（取较少者）
20 10 10 10 10 10 6 6
上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量
供试品装量M （mg/支或瓶） M<50 50≤M<300 300≤M<5g M≥5g 外科用敷料棉花及纱布
缝合线、一次性医用材料 带导管的一次性医疗器具
（输液袋） 其它医疗器具
每支样品接入每管培 养基的最小量（mg)
全量 半量 150 500 取100mg或 1cm×3cm
方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂或表面活性剂。 中和剂或表面活性剂的加入量应通过验证试验验证。如 对氨基苯甲酸：用于磺胺类供试品 聚山梨酯80：用于非水溶性供试品 β-内酰胺酶：用于β-内酰胺类供试品 0.5%葡萄糖肉汤培养基：用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查
2006－07
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硫乙醇酸盐流体培养基氧化层颜色的要求
◆ 2005年版无菌检查法介绍 ◆ 2005年版药典无菌检查方法的验证
2006－07
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2005年版无菌检查法介绍
2006－07
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无菌检查培养基
一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配 制。
培养基的pH值应符合规定，分装好的培养基及时密封后必 须在配制当天（2小时内最佳）进行灭菌处理。
2006－07
12
培养基的灵敏度检查
硫乙醇酸盐12ml，9支，4株菌，各1ml，每种培养 基各接种2支（原3支），另1支培养基空白对照。 培养3d(原5天)。
改良马丁9ml，5支，2株菌，各1ml，每种培养 基各接种2支（原3支），另1支培养基空白对照。 培养5d。
结果判定
空白管培养基无菌生长，加菌的培养基管均生 长良好，判灵敏度检查合格。
⑤非水溶性供试品 取规定量，混合，加入适量的聚山梨酯
溶剂溶解，或按标签说明复溶后，取 规定量接种至培养基中。
2006－07
22
直接接种法9种供试品的处理和接种
④ß-内酰胺类或磺胺类供试品 取规定量，混合，加入适量的无菌ß-内
酰胺酶溶液或对氨基苯甲酸溶液使中和， 接种至培养基中。或接入含ß-内酰胺酶或 对氨基苯甲酸的培养基中。
2006－07
23
直接接种法9种供试品的处理和接种
接种前：培养基氧化层的高度不得超过培养基深度 的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失 （不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次， 并应防止被污染。 培养后：装量与容器高度的比例应符合培养结束 后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的 1/2。
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培养基的装量
直接接种法规定接种的供试品体积不得大 于培养基体积的10%,同时,硫乙醇酸盐流体 培养基每管装量不少于15ml,改良马丁培养 基每管装量不少于10ml;医用器械体积过大 时，培养基用量可在2000ml以上。
2006－07
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上市抽验样品（液体制剂）的最少检验量
供试品装量V(ml)
≤1 1<V<5 5≤V<20 20≤V<50 50≤V<100 50≤V<100(静脉给药） 100≤V ≤ 500 V ＞ 500
每支样品接入每管培 养基的最少量（ml)
全量 半量
2 5 10 半量 半量
500
最少检验数量（瓶 或支）
2006－07
15
检验量
2006－07
16
供试品 注射剂
批产品出厂最少检验数量
批产量N（个）
每种培养基最少检验数量
≤100
10%或4个（取较多者）
100＜N≤500
10个
＞500
2%或20个（取较少者）
大体积注射剂（>100ml)
2%或10个（取较少者）
眼用及其他非注射产品
≤200
5%或2个（取较多者）
2006－07
14
菌液的制备
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢 杆菌、生孢梭菌30-35℃培养18-24小时的新鲜 培养物，白色念珠菌在23-28℃24-48小时的新 鲜培养物，黑曲霉23-28℃培养5-7天的培养物， 分别用0.9％无菌氯化钠溶液稀释制成每1ml含 菌数小于100cfu的菌悬液。。
薄膜过滤法为100ml/管或50 ml/管．
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无菌检查培养基
培养基的适用性检查 培养基的无菌性检查 培养基的灵敏度检查
符合规定的培养基方可供试品的无菌检 查试验。
2006－07
11
培养基的无菌性检查
每批培养基随机取不少于5支（瓶），培养14天， 应无菌生长。 本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的 无菌检查同时进行，但是，一旦所用培养基不 符合无菌要求，供试品的无菌检查结果应视为 无效。
配制时所用器具应采用洁净玻璃制品，避免增加培养基中 的金属离子及其他微量元素而影响微生物的生长，鉴别。
制备好的培养基应在 2-25℃保存，保存在非密闭容器中， 应在3周内使用；保存在密闭容器中，可在1年内使用。
2006－07
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无菌检查培养基
1.常用培养基及用途 硫乙醇酸盐流体培养基：培养好氧菌、厌氧菌。 改良马丁琼脂培养基：培养真菌 2.选择性培养基及用途:按硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处
整个材料3
最少检验数量 （瓶或支）
20 10 10 10 10
20 10
整个器具3（切碎或拆
20
散开）
无菌检查方法
直接接种法 薄膜过滤法：只要供试品性状允许，应采用薄
膜过滤法。 优先采用封闭式薄膜过滤器。
2006－07
21
直接接种法9种供试品的处理和接种
①一般水溶性供试品 取规定量，直接接种至培养基中。 ②混悬液等非澄清水溶液供试品 取规定量接种至培养基中。 ③固体制剂供试品 取规定量直接接种，或加入适宜的
（原3支管有2管生长，合格。）
2006－07
13
灵敏度检查用菌种
金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26003】 铜绿假单胞菌【CMCC(B)10104】 枯草芽孢杆菌【CMCC(B)63501】 生孢梭菌【CMCC(B)64941】 白色念珠菌【CMCC(F)98001】
黑曲霉【CMCC(F)98003】
桶装固体原料＞200Fra bibliotek10个
≤4
每个容器
桶装固体原料
抗生素固体原料 药（≥5克） 医疗器具
续上
批产量N（个）
4＜N≤50
＞50
每种培养基最少检验数量 20%或4个容器（取较大者） 2%或10个容器（取较大者）
6个容器
≤100 100＜N≤500
＞500
10%或4件（取较大者） 10件
2%或20件（取较少者）
20 10 10 10 10 10 6 6
上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量
供试品装量M （mg/支或瓶） M<50 50≤M<300 300≤M<5g M≥5g 外科用敷料棉花及纱布
缝合线、一次性医用材料 带导管的一次性医疗器具
（输液袋） 其它医疗器具
每支样品接入每管培 养基的最小量（mg)
全量 半量 150 500 取100mg或 1cm×3cm
方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂或表面活性剂。 中和剂或表面活性剂的加入量应通过验证试验验证。如 对氨基苯甲酸：用于磺胺类供试品 聚山梨酯80：用于非水溶性供试品 β-内酰胺酶：用于β-内酰胺类供试品 0.5%葡萄糖肉汤培养基：用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查
2006－07
8
硫乙醇酸盐流体培养基氧化层颜色的要求