生脉注射液对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

台，Ｏ 培养箱 ，Ｄ ５ 型低速 自动平衡离心机。 Ｃ： Ｌ Ｚ－ ２
１３ 乳 鼠心肌 细 胞 培 养 按 照 文献 Ｈ ． ｊ 的培养 方 法 ， 加 以改 良。选用 出生后 ２— 并 ３ｄ的 Ｗｉａ 大 鼠 ｓｒ ｔ
（ 乳鼠）无菌下取 出心脏 ， Ｐ Ｓ ， 用 Ｂ 充分洗涤后 ， 剪去 周围组织及心房 ， 心室用 Ｐ Ｓ冲洗 ４次， Ｂ 洗净残余 积血 ， 将心室组织剪成约 １ｍ ｍ 碎块 ， 加入 ０ ２ ％ ．５ 的胰蛋白酶 １ ｌ ０ｍ ， 在磁力搅拌器上 以３ ｍｎ ０ ／ ｉ 的速 ｒ
液可明显提高缺氧复氧损伤乳 鼠心肌细胞 的 Ｓ Ｄ Ｏ 、 Ａ Ｐ活性， Ｔ 降低 Ｌ Ｈ Ｍ Ａ水平 ， Ｄ 、Ｄ 从细胞水平表明生
山东 医药 ２１ ０ ０年第 ５ 第 １ ０卷 ４期
生 脉 注射 液 对乳 鼠心肌 细胞 缺 氧 复氧 损 伤 的保 护 作用
曹 艳花 。 刘珊珊 （ 东大学 附属 省 立 医院， 南 ２０２ ） 山 济 ５０２
摘要 ： 目的
探讨生脉注射液对纯化培养的乳 鼠心肌细胞缺血再灌注损伤 的保护作用 。方法
１ １ 实验 动 物 ．
缺氧复氧损伤 ＋ 生脉注射液组（ Ｄ组） 。将 Ｂ— Ｄ组 细胞先按照文献 ７ ．方法建立缺氧复氧损伤模 型，
Ｃ Ｄ组 分别在 细胞 缺 氧及 复 氧期 加 入相 应 药 物 ， 、 分 别为 ５ Ｉ 和 ５０ｍ ／ ｌ ｎ ｌ ０ ｇｍ 。 １５ 观察指标及检测方法 ① Ｌ Ｈ活性测定 ： ． Ｄ 缺 氧 ３ ｎ给 氧 ４ ｉ， 连续监 测法 （ — ） 定 ０ｍｉ， ０ｍｎ用 ＬＰ法 测 Ｌ Ｈ活性 。② Ｓ Ｄ活 性及 ＭＤ Ａ Ｐ水 平 测定 ： Ｄ Ｏ Ａ、 Ｔ 缺 氧 ６ ｉ， ０ｍｎ 给氧 ３ ｎ 用黄 嘌呤 氧化 酶法测定 Ｓ Ｄ ０ｍｉ， Ｏ 活性 ， 用硫代 巴 比妥 酸显 色法 测 定 ＭＤ Ａ水平 ， 荧 用 光素 酶法测定 Ａ Ｐ水平 。 Ｔ
采用纯化培养
的乳鼠心肌 细胞建立缺氧复氧损伤模 型 ， 随机分为 正常对照组 、 缺氧复氧损伤组 、 缺氧 复氧损伤 ＋ 维拉帕米 组 、 缺 氧复氧损伤 ＋ 生脉注射液组 ， 分别测定 其乳酸脱氢酶 （ Ｄ ） Ｌ Ｈ 活性 、 氧化 物歧化酶 （Ｏ ） 超 Ｓ Ｄ 活性 、 丙二醛 （ Ｄ ） Ｍ Ａ 及
较见表 ｌ 。
表 １ 各组细胞 Ｌ ＤＨ、ＯＤ活 性及 Ｍ Ｄ Ａ Ｐ Ｓ Ａ、 Ｔ
离心管中， 加入 ２ｍ 的含血清培养液终止消化。将 ｌ
沉 淀物 反复 消化 ７次 ， 收集 上清 液 １ ０ ｒｉ ０ｒａｎ离心 ０ ／ １ ｉ， ０ｒｎ 弃上 清 ， 留沉 淀 ， 沉 淀 中 加入 培 养 基 ５ ａ 保 在
疗口 ］ ２ ０ 年 ４月 ， ｑ 。 ０９ 我们从细胞水平探讨生脉注
射液对纯化培养乳 鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保
护作 用 。
１ 材 料与 方法
对照组即缺氧复氧损伤组（ Ｂ组 ） 阳性药对照组 即 、
缺氧复氧损伤 ＋ 盐酸维拉帕米注射液组 （ ｃ组 ） 和
新 生 Ｗｉａ 大 鼠， ｓｒ ｔ 鼠龄 ２— ， ３ｄ 由 生脉 注 射 液 （ 生 药０５８ 含 ．６
山东及仪 器 ．
ｇｍ ） 盐酸维拉帕米注射液 ， Ｅ 培养基 ， ／ １， ＭＭ 胎牛血 清， 乳酸脱 氢酶 （ Ｄ 、 氧化 物歧 化 酶 （ Ｏ 、 Ｌ Ｈ） 超 Ｓ Ｄ）丙
二醛 （ Ａ） Ａ Ｐ酶 检 测 试 剂 盒 。Ｊ ’ ＭＤ 、 Ｔ Ｊ－ 净 工作 １２超
ｍ， ｌ混悬后 离心 ， 重复 离心 ３次 ， 分洗去胰 蛋 白酶。 充
水平比较 （ －） ４￥
组别 Ｌ Ｈ Ｕ Ｌ Ｄ （／ ） Ｓ Ｄ Ｕ Ｈ ） ＭＤ ｎ ｏ ｍ ） Ｔ （ ｏ ） Ｏ （ ／ｄ Ａ（ｒ ｌ １ Ａ Ｐ ｍｍ ＶＬ ａ／
用 含 １％胎牛 血清 的培养 基将 心 肌 细胞 沉淀 ， 分 ５ 充 吹 打混匀 ， 用差速 贴 壁 法去 除 成 纤维 细胞 及 内皮 细
Ａ Ｐ水平 。结果 Ｔ 生脉注射液可明显提高 Ｌ Ｈ、Ｏ Ｄ Ｓ Ｄ活性 ， 降低 ＭＤ 、 Ａ 提高 Ａ Ｐ水平。结论 生 脉注射液 具有 明 Ｔ 显的抗缺氧复氧损伤 、 保护心肌的作用。
关键词 ：生脉注射液 ； 缺氧 复氧损伤 ； 心肌细胞 中图分类号 ：９ ５２ Ｂ ６ ． 文献标志码 ： Ｂ 文章编号 ： ０ － ６ （０ ０ １ － ３ －２ １ ２２ Ｘ ２ １ ）４０ ８０ ０ ６ ０
度 室温 下消 化 ７ｒｉ， ｎ 自然 沉淀 ， 集 上 清于 一无 菌 ａ 收
１６ 统计学方法 采用 Ｓ Ｓ １． ． ＰＳ００统计软件。数据 （ ｓ处理用单因素方差分析。Ｐ ．５ ± ） ≤００ 为差异有 统计 学意义 。
２ 结果
各 组细胞 Ｌ Ｈ、Ｏ Ｄ Ｓ Ｄ活性 及 ＭＤ Ａ Ｐ水 平 比 Ａ、 Ｔ
生脉注射液为《 内外伤辨感论》 中生脉散 的注 射剂 ， 已广泛 用于冠 心病 、 心力 衰竭 、 克 、 休 病毒性 心
肌炎 、 性 心 肌 梗 死 、 心 病 、 血 管 病 等 的 治 急 肺 脑
１０ｔ 接种到 ９ 板 中 ， 人 ３ Ｃ、％ Ｃ 培 养 ０ ｌ ｘ ６孔 放 ７ｏ ５ Ｏ 箱 内培 养 ３ｄ后行缺 氧实 验 。 １４ 细 胞分组 及缺 氧 复氧 损 伤模 型建 立 将培 养 ． ７ ２ｈ的心 肌细胞 分为正 常 细胞 培 养组 （ Ａ组 ）模 型 、
胞， 制成浓度为 ２ ５×１。ｍ 的心肌细胞悬液 ， ． ０／ ｌ 取
３ ８
注 ： Ａ组 比较 ， Ｐ＜ ． １ 与 Ｂ组 比较 ， 与 ‘ ０Ｏ ； Ｐ＜ ． ５ ｐ ０ Ｏ Ｏｏ ， ＜ ．１ Ｊ
山东医药 ２ １ 年第 ５ 卷第 ｌ 期 ００ ０ ４
３ 讨论
灌注损伤有保护作用。本实验结果表明， 生脉注射