食品安全国家标准食品中葡萄糖酸δ内酯的测定编制说明

《食品安全国家标准 食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定》

(征求意见稿)编制说明

一、 标准起草的基本情况

（一）任务来源、起草单位、起草人

本标准是依据国家卫生和计划生育委员会食品安全标准与监测评估司“2014食品安全国家标准整合工作会议”下达的《食品安全国家标准 食品中葡萄糖酸-δ-内酯的测定》国家标准任务而研究制定的，计划编号为ZHENGHE-2014-305。

项目参加单位：深圳市计量质量检测研究院,中国商业联合会。

该项目由郑彦婕负责，主要参加人员有：杨万颖、张协光、刘文丽、曾泳艇、黎永乐、罗伟、徐述、杨国武、张晨、曹德胜 （二）简要起草过程

本标准起草人在充分收集、认真研究了国内外相关标准及资料的基础上，分析对比了国内外标准技术内容方面的差异及原因，在遵循先进性、科学性、实用性的原则下，修改采用国家标准GB/T9695.17-2008《肉与肉制品 葡萄糖酸-δ-内酯含量测定》，增加第二法。 二、标准的重要内容及主要修改情况 2.1.1检出限、定量限的制定依据

依据国家标准GB/T5009.1-2003附录A.2，把3倍空白值的标准偏差（测定次数≥20）相对应的质量或浓度称为检出限。当称样量为10g 时，实验结果见表1，计算葡萄糖酸-δ-内酯含量空白测定的标准偏差为0.003，确定3倍空白测定的标准偏差代入公式

(%)X m

K ⨯⨯∆A

⨯

=2.02705.5所对应的浓度为本标准方法检出限：75 mg/kg ，,定量限为：250

mg/ kg 。

表1 分光光度法检出限与定量限（mg/kg ）

空白测定值（n=21）

标准

偏差

检出限

LOD

定量限

LOQ

0.0062 0.0010 0.0022 0.0026 0.0095 0.0035 0.0035 0.003

75

250

0.0103 0.0016 0.0026 0.0080 0.0048 0.0044 0.0054 0.0015

0.0025

0.0018

0.0016

0.0026

0.0048

0.0068

2.1.2 处理方法更改的依据

国家标准GB/T9695.17-2008中样品处理采用高氯酸沉淀蛋白质，而高氯酸具有强腐蚀性，强刺激性，对人体危害性较大。我们将样品处理的方法改为用石油醚除去肉制品等高脂肪样品中的脂肪，再用无水乙醇沉淀蛋白质、糖等大分子物质，最后煮沸使所有蛋白质都变性。

该两种处理方法我们对几种肉制品进行了比对，实验结果如表2所示，其实验数据符合实验室内精密度要求。

表2 几种肉制品两种不同处理方法的实验结果

样品名称

实验结果

（样品经高氯酸处理）

实验结果

（样品经石油醚、乙醇处理）

相对标准偏差

RSD（%）

蒜蓉香肠0.082% 0.083% 0.9

台湾香肠0.076% 0.075% 0.9

熏煮香肠0.080% 0.080% 0

中式香肠0.068% 0.069% 1.0

辣味香肠0.085% 0.084% 0.8

2.2高效液相色谱法

2.2.1 检出限、定量限、线性范围

依据国家标准GB/T5009.1-2003附录A.2.1，色谱法的检出限为3倍信噪比。定量限为10倍信噪比。所以确定该方法的检出限：当称样量为10 g时，样品检出限LOD为75 mg/L，定量限LOQ为250 mg/L。

以标准系列溶液浓度为横坐标（X），以相应的峰面积为纵坐标（Y）做线性回归方程Y=91.303X-467.25，相关系数r2为0.9999，线性范围为250 mg/kg~100 g/kg。

2.2.2 柱子和流动相的选择

实验比较了Agilent ZorbaxSB-C18（4.6 mm⨯250 mm，5 μm）、Agilent Carbohydrate（4.6 mm⨯250 mm，5 μm）、Grace prevail organic acid（4.6 mm⨯250 mm，5 μm）,见图1。其中C18柱三个峰虽然可以分开，但是葡萄糖酸与葡萄糖酸-δ-内酯分离度不如organic acid柱，Carbohydrate柱则葡萄糖酸-δ-内酯与葡萄糖酸-γ-内酯无法分开，最终选择了分离效果最好的色谱柱Grace prevail organic acid。

a

b

c

1、葡萄糖酸；

2、葡萄糖酸-δ-内酯；

3、葡萄糖酸-γ-内酯

a: C18; b:carbohydrate; c:organic acid

图1 不同柱子的色谱图

2.2.3 流速的选择

分别选择流动相流速0.5 mL/min、0.8 mL/min、1.0 mL/min做实验，由图2可发现0.5 mL/min分离效果最好，但分析时间过长，0.8 mL/min则时间刚好，交离效果完全能满足分析要求，而1.0 mL/min则分离效果不太满意，因此，确定流速为0.8 mL/min。

a

b

c

a: 0.5 mL/min; b: 0.8 mL/min; c: 1.0 mL/min

图2 不同流速的色谱图

2.2.4 样品处理条件的选择及优化

样品采用流动相溶液溶解，煮沸。煮沸可沉淀样品中蛋白质，此时葡萄糖酸-δ-内酯水

解生成葡萄糖酸和少量的葡萄糖酸-γ-内酯，形成3种物质的平衡混合物，放置2.0 h 后达到平衡。以75 mg/L 的标准溶液为例，见图3：

0.0

0.10.20.30.40.5

0.60.70.8C o n t e n t

Time/h

图3 各组份在不同时刻的测定值（75 mg/L 由归一法计算而得）

2.2.5 方法的精密度

对9份不同的样品重复测定6次，测方法的精密度，由表3可见方法相对标准偏差在2.0%以下，精密度满足分析方法要求。

表3 方法的精密度 (n=6)

豆腐花

1.90

1.91 1.89 1.90 1.92 1.90 0.5 1.68 1.60 1.65 1.62 1.60 1.62 1.9 1.49 1.45 1.46 1.42 1.48 1.45 1.7 蒜蓉香肠

0.083

0.084 0.082 0.082 0.083 0.083 1.0 0.092 0.090 0.095 0.094 0.092 0.093 1.9 0.064 0.063 0.065 0.062 0.064 0.062 1.9 鸡爪

0.071

0.073 0.075 0.072 0.073 0.074 1.9 0.064 0.062 0.063 0.063 0.065 0.062 1.9 0.042

0.042

0.044

0.042

0.043

0.043

1.9

2.2.7 方法的回收率

对3份不同的样品进行测定后，按样品中葡萄糖酸-δ-内酯含量进行回收率实验，样品测定值、加标量、回收率见表4。由表5得回收率在87%~95%之间，满足分析方法的要求。

表4 方法的回收率 (n=6)

样品名称 样品测定值/%

加标量/% 测得值/% 回收率/% 豆腐制品 0.25 0.25 0.44 88 1.25 1.38 92 2.50 2.60 95 运动饮料

0.084

0.084

0.15

89