固相萃取-HPLC法同时测定盐酸帕洛诺司琼注射液中6种杂质

高尧对环境有污染袁方法不能同时对样品中可能存 在的杂质 A尧B尧C尧D尧E 和对映异构体进行一次性检 测等[1-8]遥本文利用固相萃取小柱渊SPE冤袁通过调节盐 酸帕洛诺司琼注射液的 pH尧选择洗脱温度尧优化洗 脱溶剂等去除样品中辅料袁富集样品中待测杂质 A~ E尧对映异构体和主成分袁实现了在不使用大量有机 溶剂的情况下袁同时检测盐酸帕洛诺司琼注射液中 杂质 A~E 和对映异构体遥本方法显著提高了分析效 率和稳定性袁具有简捷尧经济尧绿色和高效的特点遥
关键词 盐酸帕洛诺司琼注射液曰高效液相色谱法曰固相萃取法曰有关物质 中图分类号 R927.1 文献标志码 A 文章编号 1673-7806渊2019冤04-253-04
盐酸帕洛诺司琼袁化学名称为渊3aS冤-2-[渊S冤-1氮 杂 双 环 [2.2.2] 辛 -3 - 基 ] -2袁3袁3a袁4袁5袁6 - 六 氢 -1 酮-1H 苯[并]异喹啉盐酸盐袁是一种亲和力较强的 5-HT3 受体选择性拮抗型止吐剂袁 美国综合癌症网 络的临床指南已推荐盐酸帕洛诺司琼注射液作为 首选药物袁 用于预防高度致吐化疗引起的急性恶 心尧呕吐及预防中度致吐化疗引起的恶心尧呕吐遥
253
2019 Aug;27(4) 固相萃取-HPLC 法同时测定盐酸帕洛诺司琼注射液中 6 种杂质
5 mL颐0.25 mg袁江苏奥赛康药业有限公司冤曰乙腈尧四 氢呋喃为色谱纯袁其他试剂为分析纯曰纯化水遥
图 1 盐酸帕洛诺Leabharlann Baidu琼及各杂质结构式
1.3 方法 1.3.1 高效液相色谱条件 分析柱院Astec CHIRO鄄 BIOTIC誖 V渊250 mm 伊4.6 mm袁5 滋m冤曰流动相院四氢 呋喃-20 mmol窑L-1 醋酸铵渊冰乙酸调 pH 6.0冤=10颐90曰 柱温院35 益曰流速院1.5 mL窑min-1曰检测波长院238 nm曰 进样量院100 滋L遥 1.3.2 样品前处理 取本品 6 瓶袁合并摇匀袁精密 量取 27 mL 置适当容器中袁精密加入 1 mol窑L-1 氢氧 化钠溶液 1 mL袁混匀袁取该溶液 15 mL袁置 Agilent Bond Elut C8渊200 mg袁3 mL冤固相萃取小柱上袁通过 重力使溶液经过小柱富集袁 再依次用 1.5 mL 纯水尧 1.0 mL 溶剂 A[乙腈-水-三氟乙酸渊280颐720颐0.67冤]对 萃取小柱进行洗脱袁弃除洗脱液遥最后用 1 mL 无水 乙醇洗脱小柱袁 收集无水乙醇洗脱液置 2 mL 量瓶 中袁用 0.02 mol窑L-1 醋酸铵溶液渊冰醋酸调节 pH 值 至 6.0冤稀释袁定容至刻度袁置 4 益冰箱中冷藏约 10 min袁过滤袁取此滤液作为供试品溶液袁上机检测遥
2 结果与讨论
2.1 富集溶液 pH 选择 盐酸帕洛诺司琼注射液 pH 约为 5袁 直接使用
SPE 小柱富集袁各杂质和主成分在富集时即损失遥参 考各组分结构袁可调节样品溶液 pH 至碱性袁改变各 组分在 SPE 柱上的保留袁实现辅料去除袁待测组分 保留遥 实验考察了样品在 pH 5~11.5 各组分的保留 情况遥结果表明袁样品溶液 pH 调节为 10.0~11.5袁滤 液中除辅料外袁均未检出待测各组分袁故最终样品 溶液 pH 设定为 11.0遥
目前盐酸帕洛诺司琼注射液有关物质特定杂 质检测方法主要包括液相色谱直接测定[1]尧有机溶 剂提取浓缩后液相色谱检测[2]尧干燥蒸发浓缩后液 相色谱检测[3]等遥
这些方法存在的问题包括大量的辅料影响色 谱柱寿命袁多次有机溶剂提取富集对人员操作要求
作者简介
* 通讯作者
收稿日期
杜有国袁男袁高级工程师 E-mail: duyouguo@ask-pharm.com 李飞袁男袁教授袁博导 E-mail: kldlf@njmu.edu.cn 2019-04-17 修回日期 2019-06-24
1 实验部分
1.1 仪器 Ultimate 3000 高效液相色谱仪曰CPA225D 电子
天平渊北京赛多利斯仪器有限公司冤曰Milli-Q 超纯水 机渊默克密理博公司冤遥 1.2 药品与试剂
对照品院 盐酸帕洛诺司琼 渊纯度 99.7%袁 批号 101030-201703袁中国食品药品检定研究院冤曰杂质 B 渊纯度 100%袁批号 F02770袁USP冤曰杂质 C渊纯度 96.4%袁 批号 S17042409-2袁江苏奥赛康药业有限公司冤曰杂质 D渊纯度 88%袁批号 F02790袁USP冤曰杂质 E渊纯度 100%袁 批号 F027A0袁USP冤曰对映异构体渊批号 F027B0袁纯 度 100%袁USP冤袁各结构式见图 1遥盐酸帕洛诺司琼 注射液渊批号 20180801尧20180802尧20180803袁规格
盐酸帕洛诺司琼注射液由瑞士 MgiPharma Inc. 及其合作伙伴 Hnelsinn Healthcare Sa 研制开发袁并 于 2003 年 7 月 25 日首先在美国获准上市袁规格为 5 mL颐0.25 mg遥盐酸帕洛诺司琼原料药已被叶美国药 典曳收载袁并对其杂质 A尧B尧C尧D尧E 和对映异构体进 行了控制遥盐酸帕洛诺司琼注射液及其他剂型均未 被国内外药典收载遥
药学与临床研究 药 学 研究
固相萃取-HPLC 法同时测定盐酸帕洛诺司琼 注射液中 6 种杂质
杜有国 1，2，王张权 2，孙 平 2，李 飞 1*
1 南京医科大学，南京 211116；2 江苏奥赛康药业有限公司，南京 211112
摘 要 目的院固相萃取要高效液相色谱法同时测定盐酸帕洛诺司琼注射液中差向异构体尧 对映异构体尧 氮氧杂质等 6 种杂质的含量遥 方法院 样品经 1 mol窑L-1 氢氧化钠溶液调节 pH袁经 Agilent Bond Elut C8 固相萃取柱渊200 mg袁3 mL冤去除大部分基质干扰袁实现净化与富集袁再用乙 醇洗脱得到富集物遥 采用 USP40 盐酸帕洛诺司琼原料药已知杂质测定方法袁 以 Astec CHIRO鄄 BIOTIC誖 V渊250 mm 伊 4.6 mm袁5 滋m冤为色谱柱对其进行分离检测遥 结果院6 种杂质在 0.2~4.3 滋g窑 mL-1 范围内线性良好袁相关系数 r逸0.999 5袁方法的检测限为 0.056~0.065 滋g窑mL-1袁低尧中尧高 3 个 浓度的加样回收率为 90.60%~105.7%遥 结论院本方法可用于同时检测盐酸帕洛诺司琼注射液中的 6 种杂质遥