不同来源诱导剂建立的卵巢早衰动物模型的比较

不同来源诱导剂建立的卵巢早衰动物模型的比较
目的比较不同来源的诱导剂建立的卵巢早衰动物模型。

方法选取97只雌性SD大鼠分别给予120 mg/kg的环磷酰胺、白消安、35%半乳糖食物丸，制备卵巢早衰动物模型。

通过观察体重变化，激素血清浓度水平，卵巢病理切片等分析数据。

结果单次给药环磷酰胺后，大鼠体重增加非常缓慢，卵巢受损；随着血清LH浓度上升趋势，血清E2浓度下降趋势和受损的卵巢，35%半乳糖食物颗粒饲喂的大鼠体重增加缓慢，其中白蛋白和总蛋白以及受损的卵巢的血清浓度显著升高（P＜0.05）。

结论不同诱导物可产生不同特征POF模型，为进一步研究提供有效的实验依据。

标签：大鼠；卵巢早衰；动物模型
卵巢早衰（POF）是指40岁以前卵巢早衰或卵巢功能衰退，主要发生在平均绝经年龄前两年的标准偏差人口，其原因可能与内源性基因，异常自身免疫，感染，医疗疗法等影响有关。

POF具有明显异质性及显着遗传性。

染色体异常被一直被认为是POF的常见原因。

基于POF基因组学致突变大鼠模型在探索，且不同模型之间存在较大差异，因此在探索POF治疗方法时很难选择合适的动物模型。

本文通过比较不同方法致大鼠卵巢早衰动物模型之间的差异，为POF治疗进一步研究提供实验依据。

1 材料和方法
1.1 一般材料
环磷酰胺由上海金穗生物有限公司提供。

35%半乳糖食品颗粒由南通营养饲料有限公司提供。

1.2 研究方法
雌性大鼠在室温（22±2）℃和相对湿度（50±10）%的标准实验室条件下培养12 h光暗周期，水和食物随意提供。

每只大鼠的平均食物消耗为28g。

所有手术均在戊巴比妥钠麻醉下进行。

将体重约为（180～200）g的56只SD大鼠分成A、B、C组，A组大鼠用120 mg/kg的溶于0.9%盐水溶液中的单次腹膜内注射环磷酰胺处理，B组大鼠用单一的用0.9%盐水溶液以12 mg/kg的剂量自发注射白消安注射液，C组大鼠为对照组，用0.9%盐水溶液腹膜内处理。

每周测量所有大鼠的体重。

在环磷酰胺和白消安的治疗后第30天，将所有大鼠称重并处死以供进一步研究。

41只体重180～200 g的SD大鼠分为两组，一组小鼠饲喂35%半乳糖食物丸，另一组饲喂标准食物。

每周称量所有大鼠，并在35%半乳糖食物颗粒或标准食物施用后第70天处死。

最后，通过腹膜内注射5 mg/kg戊巴比妥钠麻醉动物后，通过眼眶后穿刺收获1.0～1.2 ml全血样品。

然后将动物处死。

将样品在室
温下以5000 rpm/min离心5 min并收集上清液。

采用ELISA试剂盒测定血清FSH，LH，E2浓度作为评估动物模型性激素水平的指标。

对于35%半乳糖食品实验，通过测定半乳糖，总蛋白和白蛋白的血清浓度水平作为评价POF发生的补充参数。

1.3 病理检查
处死动物后收集卵巢并进行卵巢组织学分析。

收集的卵巢固定在10%甲醛中，制成5 mm厚石蜡切片并进行HE染色，观察切片中的卵泡数目变化。

1.4 统计学方法
数据分析包括组平均值和标准偏差的计算。

行t检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 环磷酰胺和白消安诱导POF模型
用120 mg/kg单剂量环磷酰胺腹腔内处理大鼠后，第一周SD大鼠的体重在较对照组非常缓慢地增加（P＜0.05），第二周时增加缓慢（P＜0.05），第3周迅速增加，第4周达到接近对照组的正常体重，表明环磷酰胺在初次给药时对大鼠产生明显毒性，且毒性作用随时间推移而减少。

白消安组与对照组体重无差异。

FSH，LH和E2血清浓度水平在激素试验中无显着差异，但对于环磷酰胺组，LH终浓度水平升高。

环磷酰胺组中，卵泡中特别是卵泡中颗粒细胞和卵母细胞中有轻度变性和坏死。

卵母细胞对窦卵泡的损害导致没有成熟
受精卵母细胞。

白消安组和对照组卵巢无明显病理改变。

2.2 35%半乳糖食物颗粒诱导POF模型
通过实验显示，35%半乳糖组大鼠的生长速率明显低于标准食物颗粒，随时间推移两组间的体重差异明显扩大，终止时体重存在显着差异（P＜0.05）。

血液检查显示35%半乳糖组的半乳糖，白蛋白和总蛋白血清浓度水平显着。

给药前，给药14天后1周和2周，处理组与对照组之间的体重无明显差异。

另外，FSH 和E2的血清浓度水平没有差异，但LH的血清浓度水平較对照组显著增加（P ＜0.05）。

3 讨论
近年来，POF模型研究越来越受到重视，尽管不同诱导剂引发POF的机制不尽相同，但最终都应包括相关激素变化和卵巢损伤。

目前常用的POF动物模型由环磷酰胺诱导。

此外35%半乳糖食物丸也可以产生大鼠明显的POF。

不同诱导物可产生不同特征的POF动物模型，可为POF进一步研究提共客观有效的
实验依据。

参考文献
[1] 马丽灵，阮祥燕.100例卵巢早衰相关因素的调查分析[J].中国实用妇产科杂志，2009，（04）.
[2] 张茜蒻，秦莹莹.卵巢早衰遗传学病因研究进展[J].中国实用妇科与产科杂志.2015，（08）.。