细菌非培养检测方法、医院内感染
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❖诊断血清
▪ 多价血清 ▪ 单价血清 ▪ 因子血清
5
一、链球菌感染
（一）化脓性链球菌 免疫学检查
生物学性状
是引起化脓性疾病的常见细
菌 A群链球菌有较强的侵袭力 可产生多种酶和外毒素
✓ 抗链球菌溶血素“O” ✓ 抗链激酶试验 ✓ 抗透明质酸酶（ADH） ✓ 抗DNA酶B（DNA-B） ✓ 抗链球菌多糖体（ASP）
疗效检验
32
医院内感染
医院内感染“西安事件”
事件经过
– 2008年8月28 日至9月16日期间,西安交通大学医学院第一附 属医院新生儿科收治的94名新生儿患者中,有8名新生儿从9月5 日至15日先后死亡 – 临床表现：自9月3 日起相继出现发热、心率加快、肝脾肿 大等临床症状，其中8名新生儿于9月5 日—15 日间发生弥漫性 血管内凝血相继死亡，1名新生儿经医院治疗好转。 –卫生部于9月23 日接到关于该事件的举报信息后，立即组织 专家调查组赶赴该院，与陕西省专家调查组共同开展实地调查。 –经专家组调查，认为该事件是一起严重医院内感染事件。
6
ASO的临床检测
胶乳凝集 试验
免疫散射 比浊法
7
ASO检测的临床意 义
ASO增高常见于： ➢ 急性咽炎等上呼吸道感染
➢ 风湿性心肌炎 ➢ 心包炎 ➢ 风湿性关节炎 ➢ 急性肾小球肾炎等 ➢ 免疫功能不全ASO可不增高
8
二、伤寒沙门氏菌感染
免疫学检测方法
肥达氏凝 集试验
凝集时抗体效 价≥1:80为阳性
29
鲎试验的发现
❖1956年Johns Hophins 大学动物学家 Frederik Bang发现革兰阴性细菌的粗制 品能使鲎的血细胞凝聚。
❖1963～1964年 Jack.Levin和Bang对细菌 引起鲎血凝聚进行研究，用内毒素和鲎 血细胞溶解物证明鲎血凝聚机制是一种 酶反应。
❖多位学者对鲎血细胞溶解物（LAL）进行 研究，阐释了凝聚机制
细菌非培养检测方法
广医一院检验科 陈定强
主要方法
❖免疫学检测 ❖分子生物学检测 ❖细菌毒素检测 ❖动物实验
2
免疫学检测
Ag+Ab
AgAb
用已知抗体或抗原来检测未知抗原抗体
3
抗原检测
❖凝集试验 ❖免疫荧光技术 ❖ELISA
4
抗体检测
❖临床常用于：TB、梅毒、肺炎支 原体、肺炎衣原体检测
❖已知抗原检测抗体的存在：效价 （或滴度）的升高
特点：高通量、高集成、微型化、平行化、 多样化和自动化
发展迅速，应用日益广泛
24
基因芯片的优点
❖短时间分析大量的核酸序列 ❖可同时对多个标本进行多个病原体检测 ❖具有极高的敏感性
25
蛋白质芯片技术
蛋白质芯片是指以蛋白质分子作为配基,将其固 定在固相载体的表面,形成的蛋白质微阵列
分类：生物化学型芯片、化学型芯片和缩微芯片
34
调查发现
❖儿科建筑布局和工作流程不合理，人流与物流相 互交叉;对部分新生儿使用的物品和器具采用了错误 的消毒方法;医务人员没有规范地进行手卫生; 用于 新生儿的肝素封管液无使用时间标识等。 ❖对部分医务人员的手、病房物体表面、新生儿使 用的奶瓶和奶嘴、新生儿暖箱注水口等进行检测， 发现细菌超标严重，有金黄色葡萄球菌、肺炎克雷 伯菌的明显污染。
酶联免疫吸附 试验 (ELISA）
检测伤寒杆菌 的抗原和抗体
9
三、结核分枝杆菌感染
生物学性状
分枝杆菌科分枝杆菌属 人型和牛型是人类的主要致病 菌 可诱导抗感染细胞免疫和体液 免疫反应
10
免疫学检测方法
✓ 分枝杆菌抗原检测 ✓ 结核特异性IgG的检 测 ✓ 特异性免疫复合物
11
梅毒螺旋体
17
核酸杂交在临床微生物检测中的应用
❖细菌分类鉴定 ❖细菌快速鉴定 ❖细菌耐药性的检测 ❖细菌毒素的检测 ❖细菌流行病学调查
18
聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）
19
PCR扩增产物的分析
❖凝胶电泳分析法 ❖斑点杂交法 ❖酶谱分析法 ❖序列分析法
21
PCR产物的分析
蛋白质芯片技术是继基因芯片之后，被称为横扫 生物科学和医学界的一次“迷你”革命
26
分子生物学检测应用发展
❖传统方法目前不可替代 ❖快速简便的分子诊断技术越来越普及
27
细菌毒素的检测
内毒素的检测：G-细菌感染（鲎试验）
外毒素的检测：待检菌的鉴定，并区分
产毒株与非产毒株
28
鲎试验
一种海洋无脊椎动物 蓝色的血液
一）类脂抗原试验 1、性病研究实验室试验（ venereal disease
research laboratory，VDRL） 2、不加热血清反应素试验（unheated serum
reagin，USR） 3、快速血浆反应素试验（ rapid plasma reagin，
RPR） （4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)
30
凝胶法鲎试剂与内毒素的反应机理
——复杂的酶促反应过程
内毒素 二价阳离子
C因子
活化的C因子
B因子
活化的B因子
（旁路反应）
β(1,3)-D-葡聚糖或LAL-RM
活化的G因子
G因子
凝固酶原
凝固酶
凝固蛋白（凝胶）
凝固蛋白原
Leabharlann Baidu31
动物实验
❖分离和鉴定病原微生物 ❖测定细菌的毒力 ❖制备免疫血清 ❖建立致病动物模型 ❖取动物的血清配制培养基 ❖用于生物制品或一些药物的安全、毒性、
12
二）密螺旋体抗体试验 1、荧光密螺旋体吸收试验（fluorenscent
treponemal antibody-absorption， FTAABStest） 2、梅毒螺旋体血凝试验（ treponemal pallidum hemagglutination test，TPHA) 3、ELISA：区分IgM和IgG，判断先天性梅毒 或活动性神经梅毒。
22
PCR在临床微生物检验中的应用
❖细菌的快速检测 ❖细菌毒素的检测 ❖细菌的耐药性的检测 ❖细菌流行病学调查
23
基因芯片技术
最早的生物芯片
概念源于计算机芯片
1998年度世界10大科技进展之一
基本原理：微阵列技术，核苷酸固定到固体支持物上， 将处理好的样品与其进行杂交，以实现对所测样品基 因的大规模检验。
13
细菌感染的分子生物学检测
14
分子诊断极大节约检验时间
15
细菌感染的分子生物学检测
❖核酸杂交 ❖聚合酶链反应（PCR） ❖生物芯片技术
16
核酸杂交
❖核酸探针：带有标记物、能与特定核酸序 列发生特异性互补的已知序列核酸片段。
❖核酸杂交方法：
1.斑点杂交 2.菌落原位杂交 3.Southern印迹 4.Northern印迹
▪ 多价血清 ▪ 单价血清 ▪ 因子血清
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一、链球菌感染
（一）化脓性链球菌 免疫学检查
生物学性状
是引起化脓性疾病的常见细
菌 A群链球菌有较强的侵袭力 可产生多种酶和外毒素
✓ 抗链球菌溶血素“O” ✓ 抗链激酶试验 ✓ 抗透明质酸酶（ADH） ✓ 抗DNA酶B（DNA-B） ✓ 抗链球菌多糖体（ASP）
疗效检验
32
医院内感染
医院内感染“西安事件”
事件经过
– 2008年8月28 日至9月16日期间,西安交通大学医学院第一附 属医院新生儿科收治的94名新生儿患者中,有8名新生儿从9月5 日至15日先后死亡 – 临床表现：自9月3 日起相继出现发热、心率加快、肝脾肿 大等临床症状，其中8名新生儿于9月5 日—15 日间发生弥漫性 血管内凝血相继死亡，1名新生儿经医院治疗好转。 –卫生部于9月23 日接到关于该事件的举报信息后，立即组织 专家调查组赶赴该院，与陕西省专家调查组共同开展实地调查。 –经专家组调查，认为该事件是一起严重医院内感染事件。
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ASO的临床检测
胶乳凝集 试验
免疫散射 比浊法
7
ASO检测的临床意 义
ASO增高常见于： ➢ 急性咽炎等上呼吸道感染
➢ 风湿性心肌炎 ➢ 心包炎 ➢ 风湿性关节炎 ➢ 急性肾小球肾炎等 ➢ 免疫功能不全ASO可不增高
8
二、伤寒沙门氏菌感染
免疫学检测方法
肥达氏凝 集试验
凝集时抗体效 价≥1:80为阳性
29
鲎试验的发现
❖1956年Johns Hophins 大学动物学家 Frederik Bang发现革兰阴性细菌的粗制 品能使鲎的血细胞凝聚。
❖1963～1964年 Jack.Levin和Bang对细菌 引起鲎血凝聚进行研究，用内毒素和鲎 血细胞溶解物证明鲎血凝聚机制是一种 酶反应。
❖多位学者对鲎血细胞溶解物（LAL）进行 研究，阐释了凝聚机制
细菌非培养检测方法
广医一院检验科 陈定强
主要方法
❖免疫学检测 ❖分子生物学检测 ❖细菌毒素检测 ❖动物实验
2
免疫学检测
Ag+Ab
AgAb
用已知抗体或抗原来检测未知抗原抗体
3
抗原检测
❖凝集试验 ❖免疫荧光技术 ❖ELISA
4
抗体检测
❖临床常用于：TB、梅毒、肺炎支 原体、肺炎衣原体检测
❖已知抗原检测抗体的存在：效价 （或滴度）的升高
特点：高通量、高集成、微型化、平行化、 多样化和自动化
发展迅速，应用日益广泛
24
基因芯片的优点
❖短时间分析大量的核酸序列 ❖可同时对多个标本进行多个病原体检测 ❖具有极高的敏感性
25
蛋白质芯片技术
蛋白质芯片是指以蛋白质分子作为配基,将其固 定在固相载体的表面,形成的蛋白质微阵列
分类：生物化学型芯片、化学型芯片和缩微芯片
34
调查发现
❖儿科建筑布局和工作流程不合理，人流与物流相 互交叉;对部分新生儿使用的物品和器具采用了错误 的消毒方法;医务人员没有规范地进行手卫生; 用于 新生儿的肝素封管液无使用时间标识等。 ❖对部分医务人员的手、病房物体表面、新生儿使 用的奶瓶和奶嘴、新生儿暖箱注水口等进行检测， 发现细菌超标严重，有金黄色葡萄球菌、肺炎克雷 伯菌的明显污染。
酶联免疫吸附 试验 (ELISA）
检测伤寒杆菌 的抗原和抗体
9
三、结核分枝杆菌感染
生物学性状
分枝杆菌科分枝杆菌属 人型和牛型是人类的主要致病 菌 可诱导抗感染细胞免疫和体液 免疫反应
10
免疫学检测方法
✓ 分枝杆菌抗原检测 ✓ 结核特异性IgG的检 测 ✓ 特异性免疫复合物
11
梅毒螺旋体
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核酸杂交在临床微生物检测中的应用
❖细菌分类鉴定 ❖细菌快速鉴定 ❖细菌耐药性的检测 ❖细菌毒素的检测 ❖细菌流行病学调查
18
聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）
19
PCR扩增产物的分析
❖凝胶电泳分析法 ❖斑点杂交法 ❖酶谱分析法 ❖序列分析法
21
PCR产物的分析
蛋白质芯片技术是继基因芯片之后，被称为横扫 生物科学和医学界的一次“迷你”革命
26
分子生物学检测应用发展
❖传统方法目前不可替代 ❖快速简便的分子诊断技术越来越普及
27
细菌毒素的检测
内毒素的检测：G-细菌感染（鲎试验）
外毒素的检测：待检菌的鉴定，并区分
产毒株与非产毒株
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鲎试验
一种海洋无脊椎动物 蓝色的血液
一）类脂抗原试验 1、性病研究实验室试验（ venereal disease
research laboratory，VDRL） 2、不加热血清反应素试验（unheated serum
reagin，USR） 3、快速血浆反应素试验（ rapid plasma reagin，
RPR） （4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)
30
凝胶法鲎试剂与内毒素的反应机理
——复杂的酶促反应过程
内毒素 二价阳离子
C因子
活化的C因子
B因子
活化的B因子
（旁路反应）
β(1,3)-D-葡聚糖或LAL-RM
活化的G因子
G因子
凝固酶原
凝固酶
凝固蛋白（凝胶）
凝固蛋白原
Leabharlann Baidu31
动物实验
❖分离和鉴定病原微生物 ❖测定细菌的毒力 ❖制备免疫血清 ❖建立致病动物模型 ❖取动物的血清配制培养基 ❖用于生物制品或一些药物的安全、毒性、
12
二）密螺旋体抗体试验 1、荧光密螺旋体吸收试验（fluorenscent
treponemal antibody-absorption， FTAABStest） 2、梅毒螺旋体血凝试验（ treponemal pallidum hemagglutination test，TPHA) 3、ELISA：区分IgM和IgG，判断先天性梅毒 或活动性神经梅毒。
22
PCR在临床微生物检验中的应用
❖细菌的快速检测 ❖细菌毒素的检测 ❖细菌的耐药性的检测 ❖细菌流行病学调查
23
基因芯片技术
最早的生物芯片
概念源于计算机芯片
1998年度世界10大科技进展之一
基本原理：微阵列技术，核苷酸固定到固体支持物上， 将处理好的样品与其进行杂交，以实现对所测样品基 因的大规模检验。
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细菌感染的分子生物学检测
14
分子诊断极大节约检验时间
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细菌感染的分子生物学检测
❖核酸杂交 ❖聚合酶链反应（PCR） ❖生物芯片技术
16
核酸杂交
❖核酸探针：带有标记物、能与特定核酸序 列发生特异性互补的已知序列核酸片段。
❖核酸杂交方法：
1.斑点杂交 2.菌落原位杂交 3.Southern印迹 4.Northern印迹