冷蒿生物碱的体外抗氧化性研究

冷蒿生物碱的体外抗氧化性研究

摘要：本文采用Fenton反应产生羟自由基体系、邻苯三酚自氧化体系、过氧化氢的反应体系对蒙药材冷蒿生物碱的抗氧化活性进行研究。

关键词：冷蒿生物碱抗氧化作用清除自由基

冷蒿又名小白蒿，菟毛蒿,蒙古名为阿给、汗巴、查干-阿给、汗扎[1]为菊科蒿属的小半灌木,具有蒿类的芳香气味，多生长在沙质沙砾质或石质土壤中[2]。本品味苦、性凉、钝、涩、燥；有止血、消肿止痛之功效。用于吐血、月经淋漓、内出血、创伤出血；陈久疮疡、肾脉损伤、关节强直等；在内蒙古地区冷蒿资源非常丰富,冷蒿草原的分布东界为西辽

河流域的森林草原带,往西广布于蒙古高原中、东部和鄂尔多斯高原的典型草原和荒漠草原地带,并沿草原地区延伸到蒙

古和哈萨克斯坦[3]。对冷蒿生物碱体外抗氧化性研究尚未见文献报道,为进一步开发我国丰富的冷蒿资源,本文对冷蒿生物碱进行了全面研究。

一、实验部分

1.仪器：721型分光光度计(上海第三分析仪器厂)；

KQ3200V型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；DZKW-8-4 型恒温水浴（北京永光明医疗仪器厂）；FA2104N

电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；PHS-25型精密酸度计（上海伟业仪器厂）。

2.实验材料与试剂：冷蒿产地：（内蒙古）；冷蒿生物碱提取液，自制；Tris(三羟甲基氨基甲烷)；上海三浦化工有限公司；邻二氮菲、硫酸亚铁铵、邻苯三酚、过氧化氢（天津化学试剂厂）。以上试剂均为分析纯。

3.实验方法

（1）冷蒿生物碱对羟自由基（?OH）清除作用

羟自由基是最活泼的，反应速率极快，它是对机体危害最大的自由基。利用Fenton反应产生羟自由基：H2O2+Fe2+ =?OH+OH-+Fe3+,通过Fe2+与邻二氮菲生成红色配合物，加入提取液后，减弱了?OH对Fe2+/邻二氮菲的氧化作用，引起吸光度变化来检测自由基的清除情况。

取3支10mL比色管，分别加入7.5mmol/L邻二氮菲溶液0.2mL，加入7.5mmol/L硫酸亚铁铵溶液0.2mL，加入PH=7.47Tris-HCl缓冲溶液1.0mL，在2、3号比色管中，分别加入7.5mmol/L H2O2 1.0mL，在３号比色管中加入适量的冷蒿生物碱的提取液，用二次水定容至刻度，在37℃水浴中反应１h，冷水冷却，以水为参比在508nm处测定吸光度，计算清除率（P）。

式中A样品、A未损、A损分别为加入提取液的羟自由基体系、不加H2O2及加入H2O2体系的吸光度值。

（2）冷蒿生物碱对超氧阴离子自由基清除作用

超氧阴离子自由基是生命代谢过程中产生的一种重要的自由基，具有很强的氧化能力，因此把对其的清除能力作为抗氧化物质活性的一个重要指标。

取3支10mL比色管，分别加入PH=8.3Tris-HCl缓冲溶液4.4mL,在25℃水浴中恒温20min，在1、2号比色管中加入适量的冷蒿生物碱的提取液，在2、3号比色管中加入0.2mmol/L 邻苯三酚溶液0.5mL，将3支比色管混匀，在25℃水浴中恒温4min，取出后在各管中加入8mol/L HCL 3滴，混均。以水为参比在320nm处测定吸光度，计算清除率（P）。

式中A0、A1、A2分别为不加入提取液体系、加入提取液不加邻苯三酚溶液体系与加入提取液和邻苯三酚溶液体系的吸光度值。

（3）冷蒿生物碱对过氧化氢（H2O2）的清除作用

取3支10mL比色管，在1、2号比色管中分别加入

10mmol/L过氧化氢－磷酸溶液（PH=7.4）5mL，在2、3号比色管中分别加入适量的冷蒿生物碱的提取液，在1、3号比色管中用水稀释至刻度，混均。以水为参比在200nm处测定吸光度，计算清除率（ｐ）。

式中A0、A1、A2分别为不加入提取液的过氧化氢溶液体系、加提取液和过氧化氢溶液体系的吸光度值。

二、结果与讨论

1.冷蒿生物碱对?OH清除作用

按（1）实验方法测得冷蒿生物碱对?OH清除效果见图1。冷蒿生物碱对羟自由基有较强的清除作用，在0.01～

0.022g/ml的浓度范围内，清除作用随着冷蒿生物碱浓度的提高呈现较好的量效关系。

2.冷蒿生物碱对O2-?清除作用

按（2）实验方法测得冷蒿生物碱对O2-?清除效果见图2。冷蒿生物碱对O2-?有较强的清除作用，在0.001～0.005g/ml 的浓度范围内，清除作用随着冷蒿生物碱浓度的提高呈现较好的量效关系。

3.冷蒿生物碱对H2O2的清除作用

按（3）实验方法测得冷蒿生物碱对H2O2清除效果见图3。冷蒿生物碱对H2O2有较强的清除作用，在0.001～

0.007g/ml的浓度范围内，清除作用随着冷蒿生物碱浓度的提高呈现较好的量效关系。

参考文献：

[1]蒙医学编辑委员会主编.中国医学百科全书(蒙医

学)(M).上海：上海科学技术出版社,1992

[2]马毓泉主编.内蒙古植物志(第六卷)(M).呼和浩特：内蒙古人民出版社,1982

[3]中国科学院内蒙古宁夏综合考察队.内蒙古植被(M).

北京:科学出版社,1985.