革兰氏染色

四.内容与方法
➢ 1 .涂片 ，2. 晾片， 3 .固定 ，4 .结晶紫染色： 加适量的结晶紫染色2min，5 .水洗：倾去染色 液，用水缓慢冲洗衣 ，6 .媒染：碘液，媒染 2min，7 .水洗，用水冲去碘液，8 .脱色：将玻 片倾斜，连续滴加班95%乙醇脱色30s，9 .复染： 滴加沙黄复染1min。10 .水洗，11. 晾干：将染 好的涂片用水吸干。12 .镜检时先用低倍，再用 高倍，最后用油镜观察，判断菌体的革兰氏染 色反应性。
➢ 3.涂片厚度。
五.实验结果
蓝紫色： G+ 红色： G-
六 思考
➢ 1.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的 正确性？其中关键的环节是哪些？
➢ 2.革兰氏染色原理。 ➢ 3.革兰氏染步骤。
七.作业
➢ 1.撰写试验报告，下次上实验课时交。 ➢ 2.考核：涂片老师看后，方可离去（5分） ➢ 3.卫生：包括实验后桌面桌面及地面卫生，显
微镜等实验仪器及试剂摆放是否标准（5分）。 ➢ 4.预习下次实训内容，美兰染色法，平板划线
，药敏实验。
染色液配制：
革兰氏染色步骤:
涂片
大肠杆菌
固定
葡 草酸铵结晶紫
革兰氏碘液
95%乙醇
沙黄
G-菌红色
镜检
G+菌蓝紫色
注意事项
➢ 1.革兰氏染色的关键是酒精脱色。如：脱色过 度，革兰氏阳性菌也可能被脱色而成阴性菌： 如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革 兰氏阳性。
➢ 2.菌菌，若菌龄太老，由于菌体死亡或自常溶 常使G+呈阴性反应。
➢ G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂 类，而且肽聚糖较薄，交联度低，故用乙醇脱 色时溶解了类脂类，增加了细胞壁的通透性， 使初染的结晶紫-碘的复合物易于渗出，细菌被 脱色，再经过沙黄复染后成为红色。
三 .实验仪器及材料
➢ 1 仪器：显微镜、酒精灯等 ➢ 2 实验材料：
菌种：大肠杆菌，葡萄球菌 染色剂：草酸铵结晶紫、沙黄 媒染物：碘液 脱色剂：95%的酒精
实训二革兰氏染色
一.实验目的与要求
1 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分 类鉴定中的生要性
2 学习并掌握革兰氏染色法
二．Baidu Nhomakorabea验原理
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学 家C.Gram所创立。革兰氏染色法可将所 有的细菌分为G+和G-，这是由两类细胞 壁结构和成分不同所决定。
➢ G+菌细胞壁中肽聚糖肥厚且交联度高， 类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽 聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细 菌仍保留初染时的颜色。