党参多糖、炔苷含量测定方法

附录A党参多糖含量测定方法

A.1 仪器

紫外可见分光光度计，具 1 cm比色皿；分析天平；电热恒温水浴锅；超声波清洗器。

A.2 试剂

D（＋）—无水葡萄糖标准品（纯度≥ 98%）；5%苯酚溶液；硫酸、乙醇等试剂均为分析纯。

A.3 分析步骤

A.3.1 试样处理

取本品粉末（过 4 号筛）0.2 g，精密称定，置于100ml圆底烧瓶中，加入80% 乙醇50 ml，水浴回流提取2 h，滤过，残渣用80% 的热醇洗涤，放置室温后用30 ml 蒸馏水洗涤残渣，残渣连同滤纸置烧瓶中，分别加入60 ml 沸水90 ℃水浴回流提取120 mi n，趁热过滤，残渣及烧瓶用热水洗涤，洗液并入滤液，上述步骤重复提取3 次，放冷后旋蒸，将滤液移入100 ml 容量瓶中，用蒸馏水定容至100 ml。

A.3.2 标准曲线的制备

取105 ℃干燥至恒重的D（＋）—无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml 含0.1 mg 葡萄糖的溶液。精密量取标准溶液0、0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml 置于具塞试管中，补足蒸馏水至2.0 ml，各精密加入5％苯酚溶液1 ml，快速摇匀，迅速精密加入硫酸5 ml，摇匀，待全部加完后，将全部试管同时放入100 ℃恒温水浴锅中，当温度重新升至100 ℃开始计时，准确保温15 min，取出，然后冷却至室温，以相应的试剂为空白，在490 nm 波长下测定吸光度A。以吸光度值为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。

A.3.3 测定

吸供试品溶液0.2 ml，加蒸馏水补足至2.0 ml，按A.3.2 方法进行测定，记录吸光度值，与标准曲线比较定量。

A.3.4 结果计算

试样中的党参多糖的含量（X）以质量分数（%）表示，按式（1）进行计算：

（1）

式（1）中：

A x ——样品溶液的吸光度；

A标——对照品溶液的吸光度；

C标——对照品中葡萄糖的浓度，单位为毫克每毫升(mg/ml)

m ——试样质量，质量为克(g)；

计算结果表示到小数点后两位。

A.3.5 重复性

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的的相对标准偏差应不大于5 %。

附 录 B

（规范性附录）

党参炔苷含量测定方法

B.1 仪器

高效液相色谱仪（包括在线真空脱气系统、四元泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器）；超声波清洗器；分析天平。

B.2 试剂

党参炔苷对照品（纯度 ＞ 98%）；乙腈、甲醇等试剂均为色谱纯。

B.3 分析步骤

B.3.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈–水（ 28 ∶ 72 ， v/v ）；流速为 1.0 ml/min ；柱温为 25 ℃；检测波长定为 267 nm 。理论塔板数按党参炔苷计应不低于 3000。

B.3.2 对照品溶液的制备

精密称取党参炔苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 ml 含 0.2 mg 的溶液，即得。

B.3.3 供试品溶液的制备

取本品粉末（过 4 号筛）约 0.5 g ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 ml ，称定重量。超声处理 30 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量。摇匀，静置 20 分钟，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

B.3.4 测定法

分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各 20 μl ，注入液相色谱仪，测定，即得。

B.4 结果计算

试样中党参炔苷含量（X ）以质量分数（%）表示，按式（2）进行

%100106

⨯⨯⨯⨯⨯=m d V f A X std （2）

式(2)中：

A ——所测样品中被测成分的峰面积；

f std ——所测成分的校正因子（浓度/峰面积，浓度单位μg/mL）；

V ——样品提取液的体积，单位为毫升（mL）；

d——稀释因子（如2 Ml 稀释成10 mL，则稀释因子为5）；

m ——样品称取量，单位为克（g）；

计算结果表示到小数点后三位。

B.5 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的的相对标准偏差应不大于5 %。