克伦特罗Elisa试剂盒说明

克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书

一、概要

克伦特罗（Clenbuterol）属于β-兴奋剂，因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。因此世界许多国家现已被明令禁止在饲料中添加克伦特罗来增加动物的瘦肉率。HPLC 或GC-MS一直用作检测β兴奋剂的方法，但是其前处理步骤费用昂贵；而使用酶联免疫检测试剂盒方法则可以经济、快速地检测尿，肌肉，肝脏及饲料中的CLE。

本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，操作时间短于45min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、试验原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被克伦特罗抗原，样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体,加入TMB底物显色，样本吸光值与其残留物克伦特罗负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中克伦特罗的含量。

三、适用范围

可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液等样本中克伦特罗的残留量。

四、交叉反应率

克伦特罗………………………………………………100%

特普他林……………………………………………小于1%

非诺特罗……………………………………………小于1%

马布特罗……………………………………………小于1%

西马特罗…………………………………………小于1% 溴布特罗……………………………………………小于1% 塞曼特罗……………………………………………小于1% 五、使用单位需自备的设备及试剂

设备：

┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm

┅┅振荡器

┅┅涡旋仪

┅┅离心机

┅┅水浴锅

┅┅天平：感量0.01g

┅┅刻度移液管：10ml

┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、50ml

┅┅玻璃离心管：10ml

┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、200ml～1000ml

多道 250ml

试剂：

┅┅甲醇(分析纯)

┅┅乙腈(分析纯)

┅┅氢氧化钠(分析纯)

┅┅正己烷(分析纯)

┅┅浓盐酸

┅┅磷酸二氢钾(分析纯)

----氯化钠(分析纯)

----去离子水

六、提供的材料与试剂

1、96孔酶标板×1块

2、标准液×6瓶： (1ml/瓶）

0ppb, 0.05ppb, 0.15ppb,0.45ppb, 1.35ppb,4.05ppb

3、高浓度标准品：（1ml/瓶） 100ppb

4、克伦特罗酶标物…………………………………………7ml

5、克伦特罗抗试剂………………………………………… 9ml

6、底物液 A液……………………………………… 7ml

7、底物液 B液………………………………………7ml

8、终止液…………………………………………7ml

9、浓缩洗涤液(10×) ……………………………………40ml

10、克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)…………………………40ml

七、溶液的配制

配液1: 样品稀释液

用去离子水将克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)按1:1体积比进行稀释，即：1份克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)+1份去离子水；用于提取样本的稀释，样品稀释液在4℃环境可保存一个月。

配液2: 洗涤工作液

用去离子水将浓缩洗涤液(10×)按1:9体积比进行稀释，即：1份浓缩洗涤液(10×)+9份去离子水；用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。

配液3: 1M 氢氧化钠溶液

称取4.0g 氢氧化钠加去离子水混匀溶解定容至100ml。

配液4: 0.1M 盐酸溶液

量取0.83ml浓盐酸加去离子水混匀定容至100ml

配液5：组织样本提取液

80ml 25%甲醇溶液加20ml 0.1M 盐酸

八、样本前处理步骤

样本处理前须知：

（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。

（c）未处理的样本冷冻保存。

（d）处理后的样本可在2-8℃避光保存24h。

（一）组织带有低脂肪的肉、肝等组织

----称取2.0±0.05g匀浆样本至50ml离心管中；

----加入6ml组织样本提取液，用振荡器振荡摇至均匀；

---- 3000g以上离心5分钟；

----取1ml上清液加入20μl 1M 氢氧化钠溶液混匀（混匀以后测定pH值，大约为8）；---- 3000g以上离心5分钟；

l用于分析。μ----取上清液20

（二）尿液

l清亮尿样直接测定（如尿样浑浊必须通过过滤或3000g以上，15℃离心10min直至清亮），暂不使用的样本应冷冻保存。μ----取20

（三）饲料前处理方法

----用均质器均质饲料样本；

----称取1±0.05g均质样本于50ml离心管中，加入10ml0.1MHCL，用振荡器剧烈振荡5min，3000g以上离心5min；

----取1ml上清液加入20μl 1M 氢氧化钠溶液混匀（混匀以后测定pH值，大约为8）；---- 3000g以上离心5分钟；

---将上清液用样品稀释液稀释五倍