诊断酶学和肝损伤

（二）测定方法
可在340nm波长下测定NADPH生 成速率，而计算CK活性浓度。
临床意义
• AMI时的总的CK活性显著升高。3-8h开始升高。
10-24h达峰，3-4d恢复。 • CK-MB：是目前公认的诊断急性心肌梗死最有 价值的生化指标，特异性可高达95%以上，此 外心肌梗死以外的心脏疾病也可有血清CKMB↑
（二）测定方法：
• 方法很多，但目前主要用连续监测法进行 测定。 • 原理：采用酶偶联反应，L-丙AA和α-酮戊 二酸在ALT作用下，生成丙酮酸。丙酮酸再 在LD作用下生成L-乳酸，同时NADH被氧 化为NAD+，可在340 nm处，连续监测 NADH的消耗量，从而计算出ALT活度（延 滞期待30S，连续检测60 min）
（三）CK及同工酶
• CK有四种同工酶，CK-MM、CK-MB、CK-BB、CK-Mt但 各组种分布不同 • CK-MB主要分布于心肌中，骨骼肌含量极少，故测CKMB在诊断AMI中特异性更好，CK和CK-MB的升高与发病 有关，故应于住院后，不同时间进行多次测定（3h,6h,9h） • 近年来少数高级医院开展CK-MB亚型测定，研究发现，当 CK-MB2>1.0 U/L，CK-MB2/CK-MB1超过1.5时，诊断特 异性达95%
（三）临床意义：
• 评价胰腺外分泌功能的一种辅助诊断指标
• 急性胰腺炎发病后，2-3 h，AMY开始升高，
多在12-24 h达峰值，2-5d下降，如持续性
升高达数周，常提示胰腺炎有反复。
九、胆碱酯酶
• • • • • CHE是一类催化酰基胆碱水解的酶类 人体主要有两种：即 （1）乙酰胆碱脂E（AchE） （2）丁酰胆碱酯酶（BuchE或PchE） 临床上常测的ChE是PchE
二、r-谷氨酰转移酶及其同工酶
• （一）生物化学特征： • r-GT（GGT）：肾含量最多，但血清中的rGT主要来自肝胆。 • 作用：催化r-谷氨酰基从谷胱甘肽转移到另 一肽或氨基酸分子上。 • 谷胱甘肽+氨基酸→r-GT→r-谷氨酰氨酸+半 胱氨酰甘氨酸
（二）测定方法： 原理：以L-谷氨酰-3-羟基-4-硝基苯胺为底物，以双 甘肽为谷氨酰基受体，在r-GT作用下，谷氨酰基转
二、传统的心肌酶谱
• （一）天门冬氨酸转氨酶（AST） • 心肌含量最高，其次为肝 • AST常于AMI 后，6-12h↑，24-48h达峰值， 持续到第5天-1W降低。 • 由于多种组织皆含AST，故此指标特异性不 好。
（二）LD及LD1
• LD及LD1于AMI后8-18h升高，48-144h达峰值，5-10d回 复正常 • 故对于就诊较迟的心梗病人有一定的参考价值。此αHBDH（α-羟丁酸脱氢酶）本质是反应以羟丁酸为底物时 的LD1和LD2 • 故意义同LD。 • 由于LD广泛分布于肌体多个组织，故测LD特异性不好， LD1主要分布于心肌，故测LD1的变化特异性更好。有学 者认为AMI时，LD1升高，但LD2相对降低，故同时测 LD1和LD2，并求LD1/LD2更敏和特异
5-硫代硝基苯甲酸在405nM处有强吸收峰
临床意义
• PchE经肝合成释放入血 ，慢性肝病，肝硬
化时，约50%患者CHE下降，由于有机磷
农药是AchE及PchE的强烈抑制剂，故中毒
时，活性明显下降，ChE测定是协助有机磷
中毒诊断及预后估计的重要手段。
急性心肌损伤生物化学标志物
• • 症状 心电图：仅81%心梗者心电图异常，其余 20%必须依实验室
安徽医科大学 教师备课笔记
课程：临床生物化学及生化检验 教师： 姚 余有
第六章 诊断酶学
• 第三节：血清酶 • 血清E的来源 • 根据酶的来源及其在血浆中发挥催化功能的情况， 可将血清酶分为： • 血浆特异酶： • 定义：作为血浆蛋白的固有成份，在血浆中发挥 特定的催化作用的酶。如：部分凝血因子，纤溶 酶原，此外还有ChE（胆碱脂酶）、铜氧化酶 （铜蓝蛋白CP）、LCAT和LPL
• • • •
非血浆特异酶 在血浆中浓度很低，且在血浆中很少发挥 作用。又可分为： （1）外分泌酶：来源于消化腺或其他外 分泌腺的酶，如胰淀粉酶，胰脂酶等，急 性胰腺炎升高（分泌腺疾病引起） （2）细胞酶：存在于各组织细胞中进行 代谢的酶，血液中浓度极低。此类酶，细 胞内外浓度差异悬殊，病理情况下极易升 高，常用于临床诊断。如ALT、AST、LD、 CK、α-羟丁酸脱氢酶。这些E的来源无器 官特异性。
第七节 临床常用血清酶、同工酶
• 转氨酶及其同工酶 • 转氨酶是一组催化氨基在AA与α- 酮酸间转 移的酶。 • ALT和AST是其中最主要的两种
• AST分布多个器官，多→少顺序为 心＞ 肝＞骨骼肌＞肾 肝细胞中的AST约70%存于线粒体中 细胞轻度损伤时，主要是胞质中AST入血， 严重损伤时，大量线粒体AST入血。 • ALT以肝组织含量最多，其次为肾，心 肝cell中ALT是血清的7000倍 故肝脏损伤时，血清ALT迅速升高，同样 ALT，也分布于胞质和线粒体中。
（三）临床意义
• 胆道疾病：如胆石症，胆道炎症
• 肝外梗阻：r-GT 升高明显
• 而单纯肝炎等r-GT仅中度升高
三、肌酸激酶及其同工酶
• • • • （一）生物化学特征 CK催化 肌酸+腺三磷酸→←磷酸肌酸+腺二磷 产生的磷酸肌酸含高能磷酸键，供肌肉能 量用。 • CK分布于全身，骨骼肌>心肌 • CK在cell质中存在4种同工酶，即CK-BB， CK-MB，CK-MM，CK-MT，其中CK-MB 主要存在于心肌细胞中。
三、血清酶变化的病理机制
• • • • • • • • （一）酶合成异常 1、合成减少：酶主要由肝脏合成 当肝严重损伤时，酶合成减少。 如肝病时，ChE(胆碱脂E)↓：注意与农药中毒区别 LCAT↓ 铜氧化酶↓ 豆状核变性 2 、合成增多： 骨骼疾病时，成骨细胞增生，合成更多的ALP（碱性磷酸 E） • 前列腺Ca产生大量ACP（酸性磷酸酶） • 巴比妥诱导 r-GT上升
•
酶释放增加：炎症，缺血/缺氧、能量供
应缺乏，坏死等是细胞释放大分子酶蛋 白的重要原因。
• 影响酶释放量的其它因素还有： • 1.细胞内外酶的浓度差异（差异越大，血液 酶↑↑↑） • 2. 酶的相对分子量：分子量越大，释放速 度越慢。 • 3. 酶的组织分布：同一个E可分布多于器官。 如AST，常分布于心，肝和骨骼肌。 • 4.含E高，且血流丰富的器官，其细胞内酶 进入血流的可能性较大。因E分布于多个组 织，故大部分E不能特异地反映某个特定组 织的病变。
• 5 酶在细胞中的定位和存在形式
凡存于线粒体中的E，如ASTm GLD
（谷氨酸脱氢E）不易释放出来 解释为什么急性肝炎时，ALT＞AST， 尽管AST总含量大于ALT
• （三）酶排出异常
• 24% AMY(淀粉酶)由肾脏排出，当肾损伤
时AMY也升高。此外胆道梗阻时ALP经胆 管的排泄障碍，逆流入血，引起ALP升高。
• L-丙AA+α-酮戊二酸 →ALT → α-丙酮酸+L-谷AA
• α-丙酮酸+NADH→LDH →乳酸 +NAD+
• 连续性测定NADH的消耗量，A值下降，从而算出
ALT活力
• ALT（U/L）=△A/min×1929（通过消光系数得
来）
B、AST测定
• 临床意义：ALT是反映肝损伤的一个很灵敏的指 标 • 急性肝炎时ALT高低与病情轻重相平行，且是肝 炎恢复期后降至正常的酶，是判断急性肝炎是否 恢复的一个很好的指标。 • AST主要存于心肌，肝脏中含量也多，因CK、 LDH、肌钙蛋白的出现，AST在诊断AMI渐渐失 去作用。 • 急性肝炎时AST升高不如ALT，而慢性肝炎时 AST升高程度高于ALT • 测定AST/ALT比值意义重大，急性肝炎＜1，肝硬 化≥2 肝Ca≥3
直接测定产物2-硝基-5氨基苯甲酸的特性
• 上述此法都提到延滞时间：
• 酶促反应开始阶段，由于各种因素的影响， 反应速度比较慢，此期为延滞期。随后反 应速度加快并达到一个反应速率稳定的阶 段，即酶促反应以恒定的速率进行，不受 底物浓度的影响，这段反应称为线性反应 期。随着时间的推移、底物耗尽、反应速 度变慢，此期产物量与t不是线性关系，称 非线性期。
四、血清酶的生理差异
• 因多种生理因素会影响酶的浓度，故在参考值制定和分析 结果时，应注意： • 1、性别：CK、ALP、r-GT 男＞女 男子肌肉发达，CK 男＞女 雌激素抑制r-GT的合成，男＞女 女性LD1＞老年女或男子 • 2、年龄：1-5y， ALP增至成人2-3倍；出生后24h后，CK 是成人的3倍 • 3、进食：酗酒可使r-GT 升高，禁食数天AMY下降 • 4、运动：激烈运动后 CK、LD、AST、ALD、ALT升高 • 5、妊娠：多种E发生变化，分娩时CK-BB升高
测定方法
临床意义
• AMI时，由于LD分子量较大，在心肌酶中升高最
迟，AMI后8-18h开始升高，48-144h达峰值，510d以后才恢复正常。 • 由于LD分布于多个器官，故特异性差。 • 因LD1主要分布于心肌，故测LD1更有意义，且 常呈现LD1/LD2>1
七、淀粉酶（AMY）
• • • • • （一）特征 将淀粉，水解成糊精，麦芽糖等一组酶 人和动物只含α-AMY （二）测定方法： α-淀粉酶催化对硝基苯麦芽庚糖苷水解 成游离寡糖和对-硝基苯寡糖苷，对-硝基苯 寡糖苷又在α-葡萄糖苷酶催化下，进一步水 解为对硝基酚，405nm测定（延滞时间： 3min ， 监测时间：3min）
三、肝cell损伤时代谢改变
• （一）蛋白质代谢变化：因血浆蛋白质量 由肝合成，故肝损伤势必导致蛋白质合成 障碍。 • A、由于肝脏的储备能力及蛋白质半衰期较 长，故急性肝损害时，多种血浆蛋白质浓 度变化不大，只要当肝脏持续受损时，血 清蛋白才降低，但此时r-球蛋白反而增高出 现 A/G比值降低，甚至倒置（提示问题： 急性肝炎、白蛋白变化不明显）
• 第九章 肝脏疾病的生物化学诊断
第一节 肝脏的解剖特点及生化功能
• 一、肝脏的解剖结构特点 解剖、组胚已上
二、肝脏生物化学代谢
• （1）接受来自消化道吸收的各种物质，并进行加 工和储存 • （2）合成除r-球蛋白几乎所有血浆蛋白质 • （3）加工处理体内产生和外界进入的非营养物质 • 如氨→尿素, 胆红素→结合胆红素排出体外 （经胆汁）,药物→首过效应,毒物→灭活 • （4）合成并分泌胆汁酸，调节胆固醇代谢 • 在肝cell以胆固醇为原料，合成胆汁酸（经7α-羟 化酶催化生成7α-羟胆固醇→初级胆汁酸→次级胆 汁酸）
四、乳酸脱氢酶及其同工酶
• （一）生化特征 • LDH催化乳酸氧化成丙酮酸，同时将氢转给辅酶 而成为NADH • L-乳酸+NAD+→ LD→ 丙酮酸+NADH+H • LDH广泛分布全身，以肝、心肌、肾含量最多 • LDH有5种结构不同的同工酶，即LD1、LD2、 LD3、LD4、LD5 • 其中LD1主要在心肌，可占总LD的50%以上。
二、血清酶的去路
• 1、半寿期：致原活性一半时所需时间称半寿期， 半寿期长的酶，在血清中持续时间长。 • 意义：某病必须在病后，多长时间内测定。如： 心肌梗死、CK在心梗后3-8h开始升高,10-24h达 峰， 3-4日恢复正常。如于心梗4天后测定，则无 任何临床意义。
• 2、血清E的失活和的排泄：在血管内经Pr酶分解 成小肽和AA,经小肠粘膜排至肠腔
三、心肌肌钙蛋白
• 由肌钙蛋白C,肌钙蛋白I和肌钙蛋白T组成， 目前主测总肌钙蛋白（4-8h升高，持续410d甚至3W） • 此指标的优点。 • 1）由于心肌中肌钙蛋白含量远多于CK，因 而敏感度高于CK，不仅检测出急性AMI， 而且心肌微小损伤也能测出。 • 2）有较长的窗口期7-14d，有利于迟到的 心肌梗死病人及心绞痛病人。
移在双甘肽上，同时释放出黄色的2-硝பைடு நூலகம்-5-氨基苯
甲酸
• 连续监测法测定血清r-GT活性,在405410nm测△A/min,延滞时间30s • 利用GGT(U/L)= △A/min×1159计算.
• 注意：此法用的是：连续监测法中的直接
法, 直接测定反应体系中底物或产物理化特
性（如吸光度、PH、荧光等）的改变。如