美洲型猪蓝耳病病毒高致病性变异株RT-LAMP检测方法的建立
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（ 圳 出 入 境 检验 检疫 局 动 植 中心 深 深 圳 市 外 来 有 害生 物 检测 技 术 研 发 重 点 实 验 室 ， 东 深 圳 ５ ８ ０ ） 广 １０ １
摘 要 ： 计 两套反 转 录一 介导 等 温 扩增 （ — ＡＭＰ 引物 ， 设 环 ＲＴ Ｌ ） 建立 了检 测 美洲 型猪 蓝 耳病 病 毒 及其 高 致 病性 变异株 的 ＲＴ Ｌ ～ ＡＭＰ方 法 。采 用 Ｒ — ＡＭＰ方 法与 实时荧光 Ｒ Ｐ Ｒ方 法检 测 ５ ＴＬ Ｔ— Ｃ ８份病 料 ， 果一 结 致 ， Ｒ — ＡＭＰ方 法的灵敏 度 大约 高 出 １ 但 ＴＬ ０倍 。Ｒ － ＡＭＰ方 法 特异 性 良好 ， 测猪 瘟 、 ＴＬ 检 伪狂 犬病 和 细 小
中 图 分 类 号 ： ８２ ６ ９ １ ￥ ５ ． ５ ． 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ７ ５ ３ （ ０ ０ １ — ０ ２０ １ ０ — ０ ８ ２ １ ） ２０ ２ — ６
猪繁 殖 与 呼 吸综 合 征 （ ｏｃ ｅｒｐｏ ｕｔ ｅａ ｄ Ｐ ｒｉ ｅｒｄ ｃ ｖ ｎ ｎ ｉ
ｖ Ｒ Ｖ— Ｄ和 ｖ Ｒ Ｓ ＹＮ是美 洲型猪 蓝 耳病病 Ｐ ＲＳ Ｇ Ｐ Ｒ Ｖ—
毒高致 病 性 变 异 株 ， Ｒ Ｓ １ （ 和 Ｐ ＲＳ ７ Ｐ Ｒ Ｖ１ ６ Ａ） Ｒ Ｖ１ ８ （ 为美 洲型 猪蓝 耳 病病 毒 普通 株 ， Ｒ Ｓ ７ （ Ａ） Ｐ Ｒ Ｖ１６ Ｅ）
为欧洲 型猪 蓝耳 病 病 毒 普通 株 。猪瘟 病 毒 、 狂犬 伪 病 ， 同年龄 、 不 品种 和性 别 的猪 均 能感 染 ， 流产 、 以 死 病 病毒 和细小 病毒 均为本 室保存 。 胎、 弱胎 、 木乃伊 胎 以及 仔猪 呼 吸 困难 、 败血 症 、 死 １ １ ２ 病料 ５ 高 ．． ８份 病 料 采 自广 东 、 西 和 云南 等 广 亡率 等 为 主要 特 征Ｌ 。 自 １９ １ ］ ９ ６年 我 国分 离 到 首 株 Ｐ Ｒ Ｖ以来 ， 病 已先 后 在广 东 、 海 、 ＲＳ 该 上 云南 、 建 、 福
病 毒等 均 未 出现 交叉反 应 。结果 表 明 ， 建立 的 美洲 型猪蓝 耳病 病毒 及 其 高致病 性 变异 株 ＲＴ Ｌ — ＡＭＰ检 测方 法具 有特 并 、 灵敏 、 高效和 简便 的特 点 ， 我 国猪 蓝耳病 快速 检 测领 域将 有广 阔 的应 用前 景 。 在
关键词 ： Ｔ Ｌ Ｒ — ＡＭＰ； 蓝耳病 ； 猪 猪蓝耳 病病 毒 高致病性 变异株
ｒｓｉ ｔｒ ｙ ｄｏ ，Ｒ Ｓ 俗称 猪蓝 耳病） 由猪 繁 ｅｐｒ ｏｙｓｎ ｒｍｅＰ Ｒ ， ａ 是 殖 与呼吸综合征病 毒 （ｏｃ ｅ ｅｒｄ ｃ ｖ ｎ ｅｐｒ ｐ ｒｉ ｐｏ ｕｔ ｅａｄｒｓｉ ｎ ｒ ｉ — ａｏｙｓｎ ｒｍｅｖ ｕ ， Ｒ Ｓ 引 起 的 猪 的 一 种 传染 ｔｒ ｙ ｄｏ ｉ ｓ Ｐ Ｒ Ｖ） ｒ
Ｄ ＮＡ 聚 合 酶 ， ａ ａａ 公 司 ＡＭ Ｖ 反 转 录 酶 与 Ｔ ｋｒ
ａ ｌｉ ｔ ｎ Ｌ ｍｐｉｃ ｉ ， ＡＭＰ 技术是 由 Ｎｏｏ 等人率 先设 ｆａ ｏ ） ｔｍｉ 计 并用 于病毒 检测 的［ 。当前 ， ３ ］ 由于 Ｌ ＡＭＰ技术 灵 敏 、 效和简便 ， 高 已被广 泛应 用到 各种 疫 病检 测 ［ － ４。 ＿ ８ 本 研究 结合 反转 录和 环介 导 等 温 扩增 两 项 技 术 ， 针 对美洲 型猪 蓝耳 病病毒 及其高 致病 性 变异 株 的基 因
动物 医学进展 ，０ ０ ３ （ ２ ：２２ ２ １ ，ｌ １ ） ２ —７
Ｐｒ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｍ ｅ ｉ ｉ ｏｇ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎ ｒ ｄ ｃｎｅ
美 洲 型 猪蓝 耳 病 病 毒 高 致 病 性 变异 株
ＲＴ—பைடு நூலகம்ＡＭＰ检 测 方 法 的建 立 Ｌ
曾少灵 ， 孙 洁 ， 智锋 ， 曦 ， 燕 ， 义 ，曹琛 福 ， 兴 ， 秦 阮周 林庆 花群 杨俊 吕建强 ， 虹 ， 张彩 陈 兵， 陈书琨
美 洲型 猪蓝耳病 病 毒 普通 株 病毒 ，８份 含有 美 洲型 ３ 猪 蓝耳病 病毒 高致病 性变 异株病 毒 ， 由本 室保存 。 均 １ １ ３ 主 要 试 剂 ＱＩ ＧＥ 公 司病 毒 Ｒ ． ． Ａ Ｎ ＮＡ 抽提 试 剂盒 Ｖｉ ｌ ＮＡ Ｍｉｉ ｔＳｇ 公 司甜菜 碱 Ｂ － ｒ ａ Ｒ ｎ ，ｉｍａ Ｋｉ ｅ
结构差 异 ， 别 设 计 一 套 Ｒ － ＡＭＰ特 异 性 引 物 ， 分 ＴＬ
ｄ Ｐ ｘ Ｉ ｖｔｏ ｅ ＮＴ ｓＭｉ ， ｉ ｇ ｎ公 司 Ｑｕ ｎ— Ｔ ｉ Ｇｒｅ ｎ ｒ ａ ｔ Ｔ Ｍｐｅ ｅｎ ｉ ｏ
ｄ Ｄ ｅｇ ｎ 染 料 。美 洲型猪 蓝 耳病 病毒 实 时荧 ｓ ＮＡ ｒａ ｅ ｔ 光 ＲＴ Ｐ Ｒ检测 试 剂 盒 为深 圳 市 三 方 圆 生 物科 技 —Ｃ
内蒙古等多个 省 市地 区暴 发 和流 行 ， 迄今 为 止 ， 国内 发现 的猪蓝耳病病毒株均为美洲 型 。２ ０ ０ ６年 ， 在我 国 多个省份暴发 的引起 生猪大量死 亡 的高热病 ， 原发病
地 的猪 场 ， 包括 猪肺 脏 １ 份 、 ５ 血清 ３ Ｏ份 、 亡胚胎 ｌ 死
份 和其他 脏器 １ ２份 ， 已经 鉴定 确 认 其 中 ２ ０份 含有
毒被 证实为美洲型猪蓝 耳病病 毒高致 病性 变异 株Ｌ 。 ２ ｊ
与美 洲型猪蓝耳病病 毒普 通株相 比， 异株具 有更 高 变
的毒 力和致病性 ， 引起更 高的死亡率 。 能
环 介 导 等 温 扩 增 （ｏ ｐｍｅ ｉｔ ｄｓｔ ｅｍａ １ ～ ｄａｅ ｉｏｈ ｒ ｌ ｏ
ｔｉ ａｎ和 Ｓ Ｂ ｅｎ Ｉ荧 光 染 料 ， Ｂ公 司 Ｂ ｔ Ｙ Ｒ Ｇｒｅ ＮＥ ｓ－
摘 要 ： 计 两套反 转 录一 介导 等 温 扩增 （ — ＡＭＰ 引物 ， 设 环 ＲＴ Ｌ ） 建立 了检 测 美洲 型猪 蓝 耳病 病 毒 及其 高 致 病性 变异株 的 ＲＴ Ｌ ～ ＡＭＰ方 法 。采 用 Ｒ — ＡＭＰ方 法与 实时荧光 Ｒ Ｐ Ｒ方 法检 测 ５ ＴＬ Ｔ— Ｃ ８份病 料 ， 果一 结 致 ， Ｒ — ＡＭＰ方 法的灵敏 度 大约 高 出 １ 但 ＴＬ ０倍 。Ｒ － ＡＭＰ方 法 特异 性 良好 ， 测猪 瘟 、 ＴＬ 检 伪狂 犬病 和 细 小
中 图 分 类 号 ： ８２ ６ ９ １ ￥ ５ ． ５ ． 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ７ ５ ３ （ ０ ０ １ — ０ ２０ １ ０ — ０ ８ ２ １ ） ２０ ２ — ６
猪繁 殖 与 呼 吸综 合 征 （ ｏｃ ｅｒｐｏ ｕｔ ｅａ ｄ Ｐ ｒｉ ｅｒｄ ｃ ｖ ｎ ｎ ｉ
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毒高致 病 性 变 异 株 ， Ｒ Ｓ １ （ 和 Ｐ ＲＳ ７ Ｐ Ｒ Ｖ１ ６ Ａ） Ｒ Ｖ１ ８ （ 为美 洲型 猪蓝 耳 病病 毒 普通 株 ， Ｒ Ｓ ７ （ Ａ） Ｐ Ｒ Ｖ１６ Ｅ）
为欧洲 型猪 蓝耳 病 病 毒 普通 株 。猪瘟 病 毒 、 狂犬 伪 病 ， 同年龄 、 不 品种 和性 别 的猪 均 能感 染 ， 流产 、 以 死 病 病毒 和细小 病毒 均为本 室保存 。 胎、 弱胎 、 木乃伊 胎 以及 仔猪 呼 吸 困难 、 败血 症 、 死 １ １ ２ 病料 ５ 高 ．． ８份 病 料 采 自广 东 、 西 和 云南 等 广 亡率 等 为 主要 特 征Ｌ 。 自 １９ １ ］ ９ ６年 我 国分 离 到 首 株 Ｐ Ｒ Ｖ以来 ， 病 已先 后 在广 东 、 海 、 ＲＳ 该 上 云南 、 建 、 福
病 毒等 均 未 出现 交叉反 应 。结果 表 明 ， 建立 的 美洲 型猪蓝 耳病 病毒 及 其 高致病 性 变异 株 ＲＴ Ｌ — ＡＭＰ检 测方 法具 有特 并 、 灵敏 、 高效和 简便 的特 点 ， 我 国猪 蓝耳病 快速 检 测领 域将 有广 阔 的应 用前 景 。 在
关键词 ： Ｔ Ｌ Ｒ — ＡＭＰ； 蓝耳病 ； 猪 猪蓝耳 病病 毒 高致病性 变异株
ｒｓｉ ｔｒ ｙ ｄｏ ，Ｒ Ｓ 俗称 猪蓝 耳病） 由猪 繁 ｅｐｒ ｏｙｓｎ ｒｍｅＰ Ｒ ， ａ 是 殖 与呼吸综合征病 毒 （ｏｃ ｅ ｅｒｄ ｃ ｖ ｎ ｅｐｒ ｐ ｒｉ ｐｏ ｕｔ ｅａｄｒｓｉ ｎ ｒ ｉ — ａｏｙｓｎ ｒｍｅｖ ｕ ， Ｒ Ｓ 引 起 的 猪 的 一 种 传染 ｔｒ ｙ ｄｏ ｉ ｓ Ｐ Ｒ Ｖ） ｒ
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动物 医学进展 ，０ ０ ３ （ ２ ：２２ ２ １ ，ｌ １ ） ２ —７
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美 洲 型 猪蓝 耳 病 病 毒 高 致 病 性 变异 株
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曾少灵 ， 孙 洁 ， 智锋 ， 曦 ， 燕 ， 义 ，曹琛 福 ， 兴 ， 秦 阮周 林庆 花群 杨俊 吕建强 ， 虹 ， 张彩 陈 兵， 陈书琨
美 洲型 猪蓝耳病 病 毒 普通 株 病毒 ，８份 含有 美 洲型 ３ 猪 蓝耳病 病毒 高致病 性变 异株病 毒 ， 由本 室保存 。 均 １ １ ３ 主 要 试 剂 ＱＩ ＧＥ 公 司病 毒 Ｒ ． ． Ａ Ｎ ＮＡ 抽提 试 剂盒 Ｖｉ ｌ ＮＡ Ｍｉｉ ｔＳｇ 公 司甜菜 碱 Ｂ － ｒ ａ Ｒ ｎ ，ｉｍａ Ｋｉ ｅ
结构差 异 ， 别 设 计 一 套 Ｒ － ＡＭＰ特 异 性 引 物 ， 分 ＴＬ
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内蒙古等多个 省 市地 区暴 发 和流 行 ， 迄今 为 止 ， 国内 发现 的猪蓝耳病病毒株均为美洲 型 。２ ０ ０ ６年 ， 在我 国 多个省份暴发 的引起 生猪大量死 亡 的高热病 ， 原发病
地 的猪 场 ， 包括 猪肺 脏 １ 份 、 ５ 血清 ３ Ｏ份 、 亡胚胎 ｌ 死
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与美 洲型猪蓝耳病病 毒普 通株相 比， 异株具 有更 高 变
的毒 力和致病性 ， 引起更 高的死亡率 。 能
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