《化学分析方法验证》PPT课件
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试验方法：规定的范围内，至少用九次测 定结果评价，如制备高，中，低三个不同浓度 样品各测三次。
准确度
试验方法（中药） 同一样品，制备相同浓度的6份供试品（样品 取样量减半，以1：1比例加入对照品） 同一样品，制备三个浓度的供试品，每个浓度 分别制备三份供试液，对照品的加入方式有三 种方式。
对照品的加入方式
专属性
破坏性试验
高温，高湿，光照，酸破坏，碱破坏，氧化破坏
注意观察降解产物生成情况，分离度是否符合 要求
注意掌握破坏条件，应使主成分峰保留大约 90%
检测限
在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度 或含量
目视法（直观评价，非仪器分析） 可用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法，用已知浓度的被
化学分析方法验证
化学分许方法验证成功的前提
能够研究建立一个有水准的分析方法的能力 有化学分析方法验证的知识和水平
化学分许方法验证成功的前提
有水平，经过培训的实施人员 仪器性能已经得到确认（校准，验证，校准在
有效期内） 可靠的对照品（法定机构提供的或有水平自己
建立的） 质量可靠的实验试剂
准确度
定量方法 测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用回收
率%表示。 原料药
已知纯度的对照品或供试品 已知准确度的另一种方法比较 制剂 配置回收试验法 加样回收试验法 已知准确度的另一方法比较 杂质
准确度
对于中药 a. 以经典方法的测定值作为真值，建立方法的
测定数据与之比较（该法适用于化学单体药物） b. 以加入对照品测定的回收率表示，一般有空
方法验证的目的 目的是判断采用的分析方法是否科学，合
理，是否有效控制产品的内在质量。
需要验证的检测项目
1.鉴别 目的在与判定被分析物是目标化合物而非
其他物质。 共存，相似的化合物要分开。要考察其他
成分和辅料的干扰，空白试验一定要成阴性。
需要验证的检测项目
2.杂质检查 主要用于控制住成分以外的杂质，如有机杂
存在问题
主要表现在： 方法设计不科学 方法没有充分的研究，优化 验证的目的性不明确，验证不充分 实验过程不规范，验证通不过的处理方法错误 验证数据不合理 忽视方法在验证
什么时候分析方法需验证
符合下列情形之一的，应对检验方法进行验证： 1.建立或采用新的检验方法 2.分析对象或检验方法变更了 3.采用中国药典未收载的检验方法 4.法规规定的其他需要验证的检验方法
Hale Waihona Puke Baidu
专属性
含量测定和杂志测定
色谱法和其他方法：附带表性图谱说明专属性 表明各组分的位置，分离度是否符合要求 杂质或辅料可获得的情况下，试样中可加入杂志或辅料，考察测
试结果是否受干扰 对于杂质测定也可相试样中加入一定量的杂质，考察杂质间是否
得到分离
色谱峰纯度试验（二极管阵列，其他检测器，质 谱）
专属性
通常是通过分析含有加了杂质，降解产物，有 关化学物质或安慰剂成分的样品，将所获的分 析结果与未加前述成分之样品的测试结果进行 比较，两组测试结果只差即为专属性。
专属性
鉴别反应 应能与可能共存的物质或结构相似化合物区别 不含被分析的样品，以及结构相似或组分 中的有关化合物均应呈负反应
什么时候分析方法需验证（续）
对不需要进行验证的的检验方法，应进行方法 确认，以保证检验数据准确可靠。
2005版药典中分析方法验证指导原则（附录 XIX A）只规定了项目和基本方法而没有合格 标准，ICH和USP类似。
方法学验证
对分析方法的科学性，准确性和可行性进行验 证，充分表明分析方法符合测试项目的目的和求。
之差
d=xi-x
测量值与平均值
标准偏差（SD） SD
n
2
(xi x)
i 1
n 1
相对标准偏差（RSD）
RSD= SD 100% x
精密度
重复性：在相同条件下，有同一个分析人员测定所得 结果的精密度
在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备 不同浓度样 品各测三次 把被测浓度当做100%，至少测6次进行评价
取相同量样品9份（一般为样品取样量的一半），设计三个浓度， 按不同比例加入对照品。中间浓度一般按1；1比例加入，低，高 浓度可选0.5：1，1.5：1的比例，加入对照品的量要适当，保证 供试品溶液的浓度（或量）在考察的线性范围内。
取3种不同量的样品个三份，每个取样量分别按1：1比例加入对 照品，中间浓度已选定正常浓度，其他两个浓度可以结合范围测 定项目选择低，高浓度。
质，无机杂质。 限度检查 定量检查
需要验证的检测项目
限度检查 各种无机离子检查等
定量检查 定量测定： 干燥失重，水分，有关物质， 残留溶剂及其他特定检测项目 等。
需要验证的检测项目
3.含量测定 除主成分外，也包括检查项下的防腐剂，溶
出度等的含量测定等。
验证内容
准确度 精密度（重复性，中检精密度和重现性） 专属性 检测线（LOD） 定量限（LOQ） 线性 范围 耐用性
按表示量计算得组分，可参订化学药品测定方法，取9份样品， 按0.8：1，1：1，1：1.2的比例加入对照品（样品取样量减半）
精密度
精密度是指在规定条件下，同一个均
匀样品，经多次取样测定所得结果 之间的接近程度。用偏差（d），标 准偏差（SD），相对标准偏差 （RSD）（变异系数CV）表示。
偏差（d）
中间精密度：同一实验室，不同时间有不同的分析人 员用不同设备所得结果的精密度（三人三机）
重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密 度。以SD，RSD表示。
专属性
专属性只有其他成分（杂质，降解物，辅 料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定 出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时 对供试液准确而专属的测定能力，是指该法用 于复杂样品分析时是否受相互干扰程度的度量。
白回收（制剂空白）和加样回收的测定方法（中药 材，复方制剂等）
准确度
回收试验：测定值（M），空白，已知量A 的 对照品测定
M-空白
回收率：R= A 100% 加样回收试验：测定值（M），背景值（P）
，已知量的加入的对照品（或标准品）的值
（A） 回收率：R= M-P （M,P为均值） A
100%
准确度
准确度
试验方法（中药） 同一样品，制备相同浓度的6份供试品（样品 取样量减半，以1：1比例加入对照品） 同一样品，制备三个浓度的供试品，每个浓度 分别制备三份供试液，对照品的加入方式有三 种方式。
对照品的加入方式
专属性
破坏性试验
高温，高湿，光照，酸破坏，碱破坏，氧化破坏
注意观察降解产物生成情况，分离度是否符合 要求
注意掌握破坏条件，应使主成分峰保留大约 90%
检测限
在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度 或含量
目视法（直观评价，非仪器分析） 可用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法，用已知浓度的被
化学分析方法验证
化学分许方法验证成功的前提
能够研究建立一个有水准的分析方法的能力 有化学分析方法验证的知识和水平
化学分许方法验证成功的前提
有水平，经过培训的实施人员 仪器性能已经得到确认（校准，验证，校准在
有效期内） 可靠的对照品（法定机构提供的或有水平自己
建立的） 质量可靠的实验试剂
准确度
定量方法 测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用回收
率%表示。 原料药
已知纯度的对照品或供试品 已知准确度的另一种方法比较 制剂 配置回收试验法 加样回收试验法 已知准确度的另一方法比较 杂质
准确度
对于中药 a. 以经典方法的测定值作为真值，建立方法的
测定数据与之比较（该法适用于化学单体药物） b. 以加入对照品测定的回收率表示，一般有空
方法验证的目的 目的是判断采用的分析方法是否科学，合
理，是否有效控制产品的内在质量。
需要验证的检测项目
1.鉴别 目的在与判定被分析物是目标化合物而非
其他物质。 共存，相似的化合物要分开。要考察其他
成分和辅料的干扰，空白试验一定要成阴性。
需要验证的检测项目
2.杂质检查 主要用于控制住成分以外的杂质，如有机杂
存在问题
主要表现在： 方法设计不科学 方法没有充分的研究，优化 验证的目的性不明确，验证不充分 实验过程不规范，验证通不过的处理方法错误 验证数据不合理 忽视方法在验证
什么时候分析方法需验证
符合下列情形之一的，应对检验方法进行验证： 1.建立或采用新的检验方法 2.分析对象或检验方法变更了 3.采用中国药典未收载的检验方法 4.法规规定的其他需要验证的检验方法
Hale Waihona Puke Baidu
专属性
含量测定和杂志测定
色谱法和其他方法：附带表性图谱说明专属性 表明各组分的位置，分离度是否符合要求 杂质或辅料可获得的情况下，试样中可加入杂志或辅料，考察测
试结果是否受干扰 对于杂质测定也可相试样中加入一定量的杂质，考察杂质间是否
得到分离
色谱峰纯度试验（二极管阵列，其他检测器，质 谱）
专属性
通常是通过分析含有加了杂质，降解产物，有 关化学物质或安慰剂成分的样品，将所获的分 析结果与未加前述成分之样品的测试结果进行 比较，两组测试结果只差即为专属性。
专属性
鉴别反应 应能与可能共存的物质或结构相似化合物区别 不含被分析的样品，以及结构相似或组分 中的有关化合物均应呈负反应
什么时候分析方法需验证（续）
对不需要进行验证的的检验方法，应进行方法 确认，以保证检验数据准确可靠。
2005版药典中分析方法验证指导原则（附录 XIX A）只规定了项目和基本方法而没有合格 标准，ICH和USP类似。
方法学验证
对分析方法的科学性，准确性和可行性进行验 证，充分表明分析方法符合测试项目的目的和求。
之差
d=xi-x
测量值与平均值
标准偏差（SD） SD
n
2
(xi x)
i 1
n 1
相对标准偏差（RSD）
RSD= SD 100% x
精密度
重复性：在相同条件下，有同一个分析人员测定所得 结果的精密度
在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备 不同浓度样 品各测三次 把被测浓度当做100%，至少测6次进行评价
取相同量样品9份（一般为样品取样量的一半），设计三个浓度， 按不同比例加入对照品。中间浓度一般按1；1比例加入，低，高 浓度可选0.5：1，1.5：1的比例，加入对照品的量要适当，保证 供试品溶液的浓度（或量）在考察的线性范围内。
取3种不同量的样品个三份，每个取样量分别按1：1比例加入对 照品，中间浓度已选定正常浓度，其他两个浓度可以结合范围测 定项目选择低，高浓度。
质，无机杂质。 限度检查 定量检查
需要验证的检测项目
限度检查 各种无机离子检查等
定量检查 定量测定： 干燥失重，水分，有关物质， 残留溶剂及其他特定检测项目 等。
需要验证的检测项目
3.含量测定 除主成分外，也包括检查项下的防腐剂，溶
出度等的含量测定等。
验证内容
准确度 精密度（重复性，中检精密度和重现性） 专属性 检测线（LOD） 定量限（LOQ） 线性 范围 耐用性
按表示量计算得组分，可参订化学药品测定方法，取9份样品， 按0.8：1，1：1，1：1.2的比例加入对照品（样品取样量减半）
精密度
精密度是指在规定条件下，同一个均
匀样品，经多次取样测定所得结果 之间的接近程度。用偏差（d），标 准偏差（SD），相对标准偏差 （RSD）（变异系数CV）表示。
偏差（d）
中间精密度：同一实验室，不同时间有不同的分析人 员用不同设备所得结果的精密度（三人三机）
重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密 度。以SD，RSD表示。
专属性
专属性只有其他成分（杂质，降解物，辅 料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定 出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时 对供试液准确而专属的测定能力，是指该法用 于复杂样品分析时是否受相互干扰程度的度量。
白回收（制剂空白）和加样回收的测定方法（中药 材，复方制剂等）
准确度
回收试验：测定值（M），空白，已知量A 的 对照品测定
M-空白
回收率：R= A 100% 加样回收试验：测定值（M），背景值（P）
，已知量的加入的对照品（或标准品）的值
（A） 回收率：R= M-P （M,P为均值） A
100%
准确度