水产品中磺胺类药物残留检测方法的研究进展

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磺胺类药物 ( Sulfonamides,SAs ) 是具有对氨基 苯磺酰胺结构的合成抗菌素的总称, 为广谱抑菌剂, 对大多数革兰阳性菌和革兰阴性菌有较强的抑制作 可用于治疗由嗜水气单胞菌、 温和气单胞菌、 荧光 用, 假单胞菌、 迟缓爱德华菌、 鳗弧菌、 副溶血弧菌、 杀鱼 巴斯德菌、 诺卡菌、 链球菌等引起的水产动物的细菌 。 性疾病 部分磺胺类药物还可用于鞭毛虫 、 球虫等一 些原虫引起的病害治疗。 该类药物在体内能被迅速 吸收, 作用时间和代谢时间均较长, 通过任何途径摄 入的磺胺类药物都有可能在体内蓄积 , 并且该类药物 存在严重的不良反应, 其残留问题日益受到国际社会 的重视。许多国家规定了磺胺类药物的最高残留限 量( MRL) , 欧盟、 加拿大、 美国规定动物组织中磺胺 日本规定为 类药物的 最 大 残 留 限 量 为 100 μg / kg, 20 μg / kg, 我国规定为 100 ~ 300 μg / kg。 近年来, 研 究人员对磺胺类药物在水产品中的残留量做了大量 的研究, 检测技术得到迅速发展。本文仅就磺胺类药 物在水产品中的残留检测方法作一综述 。 1 样品处理方法 1. 1 药物提取方法 磺胺类药物不易溶于非极性有机溶剂而易溶于 极性有机溶剂, 一般选用二氯甲烷、 乙腈等作提取液。 二氯甲烷对磺胺吡啶、 磺胺对甲氧嘧啶等提取效果较 好; 乙腈对沉淀蛋白质有很好的作用, 对磺胺甲噻二
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专论与综述
Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine
№ 5 2011
样品净化方法 大多数水产品基质比较复杂, 要同时检测多种磺 胺类药物的残留, 必须先对样品进行净化和浓缩, 以 避免样品基质中的复杂组分损害色谱仪器和对目标 分析物造成干扰。 常用的净化手段有液—液萃取和 固相萃取( SPE ) 等。 固相萃取是近年发展起来的微 主要用于复杂样品中微量或痕量目 量样品处理技术, 标化合物的分离、 纯化及浓缩。与传统的液—液萃取 相比, 它能明显减少溶剂的用量, 减少样品预处理过 加快样品处理速度, 消除某些杂质干扰, 避免乳化 程, 现象并可实现自动化, 在残留分析中具有重要的作 [9 ] 用 。水产品中磺胺类药物净化常用的固相萃取柱 [10 - 11 ] [12 ] 为 Oasis HLB 柱 和 Oasis MCX 柱 等。 2 测定方法 2. 1 液相色谱法 液相色谱法是分析磺胺类药物残留的国际公认 具有灵活、 通用、 选择性强、 灵敏度高、 检测限 的方法, 低等优点。但是其样品前处理时间较长, 仪器化程度 较高, 分析周期长, 不适宜进行药物残留的快速检测 , [13 ] 目前主要用 于 确 证 分 析 。 液 相 色 谱 法 主 要 选 用 C8 或 C18 色谱柱, 流动相多为乙腈 - 甲酸、 乙腈 - 乙 乙腈 - 磷酸及甲醇 - 乙酸等。液相色谱的检测器 酸、 主要有紫外 - 可见光检测器( UV) 和二极管阵列检测 器( DAD) 。通常根据具体检测磺胺药物的种类确定 检测波长, 紫外 - 可见光检测器的检测波长通常选为 260 ~ 290 nm, DAD 通常选为 268 nm 或 270 nm。 随 着检测限度的降低和检测成分的增加 , 液相色谱 - 质 谱连用及超高效液相色谱 - 质谱也越来越多地应用 [14 ] 于水产品中磺胺类药物的检测。2008 年, 陈莹等 运用超高效液相色谱串联质谱法对鳗鱼中包括大环 内酯类、 喹诺酮类和磺胺类在内的 25 种药物进行了 同时检测, 检测限均在 0. 1 ~ 0. 2 μg / kg 之间, 可以很 好地满足实际需要。 2. 2 免疫分析法 免疫分析法是以抗原与抗体的特异性 、 可逆性结 合反应为基础, 适用于组织中痕量组分的分析, 可以 用于规模化筛选。目前, 用于磺胺类药物残留检测的 免疫分析法主要有放射免疫分析 ( RIA ) 和酶联免疫 分析( ELISA) 两种, 此类方法不仅灵敏度高、 准确性 好, 同时还具有操作简单、 快速、 检测成本低、 适用于 [15 ] 大批量样品检测的优点 。制备针对磺胺类药物的 特异性抗体是免疫分析法的关键 , 由于磺胺类药物属 于小分子化合物, 本身不具有免疫原性, 通常将其与 载体蛋白进行偶联。将磺胺类药物的芳伯氨基 ( N4 ) 重氮化, 然后与载体蛋白的酪氨酸残基 ( 酚基 ) 偶联 或使用戊二醛, 将药物与载体直接偶联, 或者以丁二 以 N1 端 酸酐为间隔臂通过碳化二亚胺法连接载体,
பைடு நூலகம்
唑、 磺胺间甲氧嘧啶、 磺胺二甲氧嘧啶等有较强的作 用。在提取过程中, 常会将部分脂类物质一并提取出 , 来 加入正己烷则可以脱去提取液中的脂肪, 减少杂 组织中的水分会随萃取 质对待检组分的干扰。另外, 过程一并进入提取液, 对样品浓缩产生很大的影响, 因此试验中需加入某些物质结合组织中的水分 , 如无 水硫酸钠等。无水硫酸钠除具有防止样品中的水分 及部分干扰成分进入提取液中的作用外 , 还可以促使 组织中的蛋白质变性分散, 防止样品形成块状而影响 [1 ] 。 提取 近年来, 随 着 科 学 的 不 断 发 展, 基质固相分散 ( MSPD) 开始用于动物组织中药物残留的检测 。 该 技术是将样品与吸附剂均匀混合后填柱 , 用不同溶剂 。 对杂质和目标分析物进行脱洗 该技术具有简便快 样品和溶剂用量少等优点, 并已在许多兽药残留 捷、 [2 - 3 ] 。为了提高萃取效率, 分析中得到应用 现在经常 [4 - 6 ] 。超 声 波 是 指 频 率 为 使用 超 声 波 辅 助 提 取 20 kHz ~ 50 kHz 的电磁波, 它能在溶剂和样品之间 产生声波空化作用, 导致溶液内气泡的形成、 增长和 从而使固体样品分散, 增大样品与萃取溶 爆破压缩, , 剂之间的接触面积 提高目标物从固相转移到液相的 [7 ] 基于细菌受体分析的 Charm Ⅱ 传质速率 。 另外, 放射免疫法的样品前处理方法简便, 具有灵敏度高、 特异性强的优点, 可以检测磺胺类药物的残留总量, 已经为欧盟国家及美国食品和药物管理局 ( FDA ) 认 [8 ] 可并应用于初筛分析 。 该方法样品前处理步骤为 0807 收稿日期:2010sesMSU 萃取缓冲液提取药物, 80 ℃ 孵育后再置冰浴中, 作者简介:郭时金( 1974 - ) , 男, 助理研究员, 硕士研究生, ame_1979@ 163. com. 离心后的上清液即可用于检测。
《黑龙江畜牧兽医》 科技版
专论与综述
2011 年 5 月( 上) 29
水产品中磺胺类药物残留检测方法的研究进展
郭时金
( 山东省滨州畜牧兽医研究院 山东绿都安特动物药业有限公司 , 山东 滨州 256600 )
+ 中图分类号: S859. 79 5
文献标识码: A
7034 ( 2011 ) 05 - 0029 - 02 文章编号: 1004-
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制备的抗体 特异的 R 取代基结构作为抗原决定簇, 对带有 该 基 团 的 磺 胺 类 药 物 具 有 高 度 特 异 性。 英 [16 ] 瑜 建立的水产品中磺胺二甲嘧啶间接竞争 ELISA 检测方法, 最小检测限为 1. 89 μg / L, 远远低于联合 国食品法典委员会和我国农业部制定的磺胺类药物 残留限量标准( 100 μg / L) 。 3 展望 随着人们对水产类食品安全问题的日益关注 , 对 兽药残留检测方法的精确度、 时效性要求越来越高, 人们不断地探索研究新技术并将其应用于水产品的 残留检测。相信在不久的将来, 一定会开发出分析效 率更高、 检测限度更低的分析方法。 参考文献:
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