大学课程植物组织培养13植物脱毒--组培课件

二 茎尖脱毒技术的原理和方法
1 基本原理（采用茎尖的原理）
利用病毒在植物体内的分布不均匀性，一般情况下，病毒 在植物的顶端分生组织中不存在或只有较低的浓度（胚中也是 这种情况，为什么？）
2病毒分配不均匀性的可能原因：
A 物理隔离：分生组织微管系统或胞间连丝不发达，细胞分 裂速度快于病毒侵染速度
B能量竞争 ：病毒核酸和植物细胞分裂时都须要消耗大量的 能量，而分生组织细胞本身很活跃，其DNA合成是 自我提供能量自我复制，这样病毒核酸复制就得不 到足够的能量。
D 植物病毒结构 植物病毒结构简单，杆状、线条状的病毒，粒体中间 是螺旋状的核酸链，外面是蛋白质亚基组成的衣壳。
E 植物病毒的发展简史 1．症状描述期
2．病原研究期 代表人物：Adolf mayer（1882）， Dmitrii Ivanowski（1892），Martinus Beijernek （1898）。
3 植物脱毒技术概念：
A 广义：消除包括病毒、真菌、细菌在内的微生物病原体 B 狭义：单指消除植物细胞、组织内的病毒、类病毒
（本节重点为狭义脱毒所涉及内容）
4 植物脱毒技术的一般方法： A 从材料角度分：
茎尖培养脱毒（或顶端分生组织）、珠心胚培养脱毒、 微尖嫁接脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织培养脱毒
C 存在病毒钝化系统：植物不同部位细胞的防卫系统能力的 差别。
D 抑制因子存在
2 基本步骤 （1）母体的选择 （2）母体（预）处理 （3）茎尖的分离 （4）茎尖的培养和小批量快繁 （5）效果检验 （6）大批量快繁及无毒原种保存。
2 基本步骤 （1）母体的选择
欲脱毒材料的品种典型性
植体健康程度选择
织细胞。
A
B
C
低 温
生长区
热处理区
高温Biblioteka 无损伤病毒热死点 植物热死点
应用热处理脱毒也有一定的局限性，主要缺 点在于并非所有病毒都对热处理敏感。
热处理只对那些球状的病毒(如葡萄扇叶病毒、 苹果花叶病毒)或线状的病毒(如马铃薯X、 Y病毒及康乃馨病毒)有效果，而对杆状病 毒(如牛蒡斑驳病毒、千日红病毒)不起作 用。
B 危害程度仅次于真菌病害
C 不易防治，潜隐性危害更大
D 植物病毒的症状类型 症状是认识病毒的第一步，具有诊断价值，其症状类 型有花叶、坏死、畸形。
E 复合侵染和复合症 1．干扰作用 指两种有亲缘关系的病毒侵染同一种植物，其表现的症状 比单一侵染所表现的症状要轻。其中主要是交互保护，指先侵入的病毒 可以保护植物不受另一个病毒的侵染，一般是弱株系诱发对强株系的抗 性。 2．协生作用 两种无亲缘关系的病毒混合侵染后所表现的症状比它们单 独侵染所表现的症状更为严重。
B 从处理手段角度分： 物理方法脱毒
高温处理 低温处理
化学方法脱毒
病毒唑（1,2,4-三唑-3-酰胺-1-B—D-呋喃糖）
生物方法脱毒
抗病毒血清处理 RNA 合成抑制物（防线菌素D）
高温处理： （该方法可能会遇到的问题是什么？如何解决？）
原理：基本原理是在高于正常的温度下，植物组织中的病毒
可部分或全部失活（钝化），但是很少或甚至不伤害寄主植物组
鳞皮病毒需要40/30度条件下处理8周 碎叶病毒需要50度条件下处理3-22小时
（3）茎尖的分离 A两种情况： 无菌状态—剥离外层—根尖 有菌状态—剥离茎尖—常规消毒
B 注意根尖大小： 茎尖过大脱毒效果不彻底 茎尖太小培养再生困难
二 茎尖脱毒技术的原理和方法
2 基本步骤
（4）茎尖的培养和小批量快繁： 丛生芽（不定芽诱导） 单芽切割 诱导生根（换培养基） 练苗 移栽
（2）母体（预）处理 A 可采用物理、化学、生物方法（如前述） B 但是一般是热处理（母体较大、热处理好操作） C 热处理的参数选择： a 加热方式：热水或热空气 b 温度选择：视情况而定，直线式或交替式 c 湿度的保持：必须 d 和其它方式联合实行
热处理举例： 香石竹（康乃馨）在38-40度经过两个月处理可除 去全部病毒 菊花在35-38度的条件下处理60天可使病毒失活 马铃薯在37度条件下处理10-20天能除去卷叶病毒 柑橘—速衰病毒/黄化病毒在40/30度条件下处理 7-12周
（5）脱毒效果的检测：
A 直接检测法： 直接观察待测植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒 引起的特定病状，从而可以判断病毒是否存在。
例如矮缩病毒引起寄主植物叶片褪绿、坏死、扭曲、植株矮 缩等。
3．病理学研究期 研究植物病毒的传播介体。
4．生物化学、生物物理学研究期 Stanley（1935）从TMV汁液中提取出一种蛋白质的 晶体。 Bawden和Pirie（9136）证实TMV汁液中除蛋白质外 ，还有核酸，两者比例为核酸5%、蛋白质95%。
2 植物病毒的危害： A 种类多，范围广，已发现植物病毒有700种。大多数 农作物特别是利用无性繁殖生产的农作物都受到一种 或一种以上病毒感染而且带毒株率高。Ex.苹果—60%-100%
植物脱毒技术
一 植物病毒及植物物脱毒技术
1 植物病毒 2 植物病毒的危害 3 植物脱毒技术概念 4 植物脱毒技术的一般方法
二 茎尖脱毒技术的方法步骤
1 原理 2 基本步骤 3 影响茎尖脱毒效果的因素
三 其它脱毒技术方法介绍
四 脱毒技术的应用
一 植物病毒及植物物脱毒技术
1 植物病毒： A 病毒（virus）是一类非细胞结构的专性寄生的， 极微 小的分子生物，有核酸和蛋白质组成，以复制繁殖。 B 主要存在于植物细胞内的病毒（类病毒）称为植 物病毒（非系统分类）。 C 植物病毒形态 在生物界中，植物病毒形态最小，观察病毒需放大 数万倍的电子显微镜，度量病毒大小的尺度为纳米， 其形态有球状、杆状、线条状，少数弹状。
F 植物病毒症状隐潜 潜伏侵染 病毒侵染植物后不表现症状或难以觉察的症状，但病毒可以在 体内增殖称潜伏侵染。 带毒体 受病毒侵然而不表现症状的植物。
I 感病寄主内部病理变化 （一）筛管、筛板堵塞 （二）组织坏死产生坏死斑 （三）病细胞结构发生变化 （四）内含体的产生 内含体是寄主细胞内的病毒核酸和寄主细胞内的蛋白质、甘糖等物质聚 集在一起形成的一种混合体。其种类有X-体和晶状体。