支链淀粉直连淀粉

直链淀粉和支链淀粉的测定(双波长法)

一、目的

淀粉一般都是直链淀粉和支链淀粉的混合物。直链淀粉和支链淀粉含量和比例因植物种类而不同，决定着谷物种子的出饭率和食味品质，并影响着谷物的贮藏加工。通过本实验学习掌握双波长测定谷物中直链淀粉和支链淀粉的含量。

二、原理

根据双波长比色原理，如果溶液中某溶质在两个波长下均有吸收，则两个波长的吸收差值与溶质浓度成正比。

直链淀粉与碘作用产生纯蓝色，支链淀粉与碘作用生成紫红色。如果用两种淀粉的标准溶液分别与碘反应，然后在同一个坐标系里进行扫描（400 - 960 mm）或做吸收曲线，可以得

到图所示结果。

图作图法选择淀粉的测定波长

图中1 为直链淀粉的吸收曲线，2 为支链淀粉的吸收曲线。对含有直链淀粉和支链淀粉的未知样品，与碘显色后，只要在选定的波长λ1 ，λ 2 ，λ 3 ，λ 4 ，处作 4 次比色，利用直链淀粉和支链淀粉标准曲线即可分别求出样品中两类淀粉的含量。

三、仪器、试剂和材料

1. 仪器

（1）电子分析天平

（2 ）索氏脂肪抽提器 1 套

（3 ）分光光度计1 台

（4 ）pH 计

（5 ）容量瓶100ml X 2 ，50ml X 16

（6 ）吸管0.5ml X 1，2ml X 1，5ml X 1

2. 试剂

（1）乙醚或石油醚（沸程30-60 ℃）

（2 ）无水乙醇

（3 ）0.5 ml / L KOH 溶液

（4 ）0.1 mol / L HCl 溶液

（5）碘试剂：称取碘化钾 2.0g，溶于少量蒸馏水，再加碘0.2g，待溶解后用蒸馏水稀释定容至l00ml.

（6）直链淀粉标准液：称取直链淀粉纯品0.1000g，放在100ml 容量瓶中，加入0.5mol/ L KOH 10ml，在热水中待溶解后，取出加蒸馏水定容至100ml，即为1mg/ml 直链淀粉标准溶液。

（7）支链淀粉标准液：用0.1000g 支链淀粉按（6）法制备成1mg/ml 支链淀粉标准溶液。

3. 材料

供试谷物粉。

四、操作步骤

1 .选择直链、支链淀粉测定波长、参比波长。

直链淀粉：取1mg/ml 直链淀粉标准液1ml，放入50ml 容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1 mol/ L HCl 溶液调至pH 3.5 左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。静置20min ，以蒸馏水为空白，用双光束分光光度计进行可见光全波段扫描或用普通比色法绘出直链淀粉吸收曲线。

支链淀粉：取1 mg/ml 支链淀粉标准液1ml，放入50ml 容量瓶中，以下操作同直链淀粉。在同一坐标内获得支链淀粉可见光波段吸收曲线。

根据原理部分介绍的方法，确定直链淀粉和支链淀粉的测定波长、参比波长λ 2 、λ 1 、λ 4 和λ 3 。

2 .制作双波长直链淀粉标准曲线：吸取1mg/ml 直链淀粉标准溶液0.

3 、0.5 、0.7 、0.9 、1.1 、1.3 ml 分别放入6 只不同的50ml 容量瓶中，加入蒸馏水30ml ，以0.1 mol/ L HCl 溶液调至pH 3.5 左右，加入碘试剂0.5 ml，并用蒸馏水定容。静置20min，以蒸馏水为空白，用1cm 比色杯在λ1、λ 2 两波长下分别测定A λ1，A λ 2 即得△A 直= A λ 1 - A λ 2 以△ A 直为纵坐标，直链淀粉含量（mg ）为横坐标，制备双波长直链淀粉标准曲线。

3 .制作双波长支链淀粉标准曲线：吸取1mg/ml 支链淀粉标准溶液2.0，2.5 、3.0 、3.5 、

4.0 、4.5 分别放入6 只不同的50ml 容量瓶中。以下操作同直链淀粉。以蒸馏水为空白，用1cm 比色杯在λ 3 ，λ 4 两波长下分别测定其A λ3，A λ 4 即得△A 支= A λ

4- A λ3。以△A 支为纵坐标，支链淀粉含量（mg ）为横坐标，制备双波长支链淀粉标准曲线。

4. 样品中一直链淀粉、支链淀粉及总淀粉的测定：样品粉碎过60 目筛，用乙醚脱脂，称取脱脂样品0.1g 左右（精确至1mg ），置于50ml容量瓶中。加0.5 mol/ L KOH 溶液10ml，在沸水浴中加热10min，取出，以蒸馏水定容至50ml 若有泡沫采用乙醇消除），静置。吸取样品液 2.5ml 两份（即样品测定液和空白液），均加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCI 溶液调至pH 3.5 左右，样品中加入碘试剂0.5ml，空白液不加碘试剂，然后均定容至50ml 。静置20min ，以样品空白液为对照，用1cm 比色杯，分别测定λ2，λ1，λ4，λ 3 的吸收值A λ2，A λ1，A λ4，A λ3。得到△A 直= A λ2 - A λ 1 ，△A 支=A λ4-A λ 3 。分别查两类淀粉的双波长标准曲线，即可计算出脱脂样品中直链淀粉和支链淀粉含量。二者之和等于总淀粉含量。

五、结果处理

式中，X1 一查双波长直链淀粉标准曲线得样品液中直链淀粉含量（mg）

X2 一查双波长支链淀粉标准曲线得样品液中支链淀粉含量（mg）

m 一样品质量（g）

总淀粉（%）= 直链淀粉（%）+支链淀粉（%）

六、注意事项

因蜡质和非蜡质支链淀粉碘复合物颜色差异较大，在制备双波长支链淀粉曲线时，应根据测定的谷物类型选择不同支链淀粉纯品（蜡质或非蜡质型）。

七、思考题

1. 双波长法测定谷物中直链、支链淀粉的原理是什么？

2. 除了双波长法外，比色法（620nm ）和安培滴定法也能分别测定直链和支链淀粉。了解其原理，比较不同方法的优缺点。

直链淀粉,支链淀粉测定试剂盒(doc 11)的资料简介：

淀粉测定试剂盒

用于测定淀粉中的直链淀粉和支链淀粉含量

AMYL 11/99

简介:

决定谷物淀粉最终的特殊用途取决于淀粉众多特性中的直链淀粉/支链淀粉比率，因此，对于淀粉加工企业，淀粉中直链淀粉含量是一项非常重要的指标。测定谷物淀粉中的直链淀粉通常采用电位测定法、糊化染色法或旋光分析法，即通过测定碘与直链淀粉结合生成直链淀粉-碘复合物的方法来评估直链淀粉含量，然而由于支链淀粉-碘复合物在此过程中同样会形成，因此这些方法的准确性常遭到质疑。利用非比色方法测定游离碘离子的减少和通过比色测定直链淀粉-碘复合物的方法会导致高估直链淀粉的含量，是用此方法可能出现的更多问题请参考Gibson et al11。

目前，国际上普遍采用结果更加准确的利用伴刀豆凝集素A(Con A)沉降支链淀粉，然后测定直链淀粉含量的方法，在特定的温度、pH和离子强度下，Con A 可以特定的连接含吡喃葡萄糖基[a-D-glucosepyranosyl]或吡喃甘露基

[a-D-mannopyranosyl]的支链多聚糖，因此会优先于直链淀粉与支链淀粉形成沉淀复合物。

原理:

加入二甲基亚砜(DMSO)的淀粉样品通过加热被完全溶解，乙醇洗脱样品中的油脂，回收洗涤后的淀粉样品，并用醋酸/钠盐溶液溶解，加入Con A后支链淀粉被特异性的沉降，离心分离支链淀粉，保存于悬浮液中的直链淀粉被酶水解生成葡萄糖，利用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶测定葡萄糖的含量。溶解于醋酸/钠盐溶液中的总淀粉同样可以被水解成葡萄糖，并利用萄糖氧化酶/过氧化物酶测定葡萄糖。在510nm测定利用Con A沉降后悬浮液中GOPOD吸光度的比率变化来计算直链淀粉的浓度，同样道理可计算出总淀粉浓度。

此方法适用于所有的纯净淀粉样品和谷物面粉。

精确性:

对于纯净淀粉和~10%的谷物面粉，批内偏差<5%

试剂盒:

试剂盒内提供有足够50-100次试验用的试剂

1. 分析方法

2. 冻干Con A (200mg)

3. 淀粉葡萄糖苷酶/真菌α-淀粉酶悬浮液

4. 葡萄糖测定液

5. 葡萄糖反应缓冲液

6. 葡萄糖标准液

7. 淀粉参考标样（含有特定的直链淀粉）

安全手册: