双水相萃取α淀粉酶
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5.8 6.4 7.0 8.0
相比
上相酶 浓度
下相酶 浓度
分配系数
R=VT/VB -----VT为上相体积；VB为下相体积。
K=CT/CB -----CT为上相浓度；CB为下相浓度。
四 实验注意事项
• 实验中各组添加量总重量为10g • 加完原料与蛋白后必须将离心试管沿轴向充分振摇，使固
体充分溶解 • 上下相分离时注意吸管小心吸出上相，将多余上相和少量
3. 分析回收率，确定蛋白质在选择性分配某相时， 在该相的回收效率
六 实验数据处理分析（案例）
六 实验数据处理分析（案例）
实验三—五 硫酸铵浓度、pH值 对α-淀粉酶在双水相中分配的影响
一 实验目的
• 硫酸铵浓度、pH值对α-淀粉酶分配行为影响的研 究方法
• 分析比较硫酸铵浓度、pH值对α-淀粉酶分配行为 的影响
PEG 800与2000为固体，可于60℃加热熔化后称取。
三 实验步骤
溶液累
次数
H2O加量
(NH4)2SO4溶液 加量
纯（NH4)2SO4 累计量
计
PEG (NH4)2SO4
（g）
总量 (%)
(%)
（g）
（mL） (g)
（g）
1
0.5
2
0.3/0.5
3
0.3/0.5
4
0.3/0.5
5
0.3/0.5
0.3
纯(NH4)2SO4累计量m’(g)=43%* V盐
0.3
溶液累计总量m总(g)=mPEG+m盐+m水
0.5
(NH4)2SO4(%)=m’/ m总
0.5
PEG400(%)=mPEG/ m总
五 实验结果与分析
不同分子量PEG的相图
如左图所示，由图可知，
随PEG分子量的增大，双
节线对称性
，临
界点
6
0.5
红笔标记的体积可机动
四 实验注意事项
• 使用干燥洁净的试管。 • 称取PEG时，要滴加在试管底部，避免挂
到试管壁上。 • 滴定和加水过程，避免液体溅到试管壁
上。 • 初始几次滴定过程，必须要缓慢逐滴滴
加(NH4)2SO4溶液。 • 若滴下(NH4)2SO4后，溶液出现浑浊，但
振荡后又恢复澄清，说明已接近浊点， 之后要缓慢逐滴滴加(NH4)2SO4溶液。
实验一 PEG/（NH4)2SO4双水相 相图的制作
一 实验目的
• 掌握浊点法制作双水相相图（双节线）的方法 • 分析比较PEG分子量对双水相成相的影响
二 实验原理
因层析作用，一定浓度的 PEG与（NH4)2SO4混合溶液可形 成双水相，相图即用于描述双 水相的成相条件及定量关系。
双节线是双水相与均一相 的分界线，可用浊点法测定制 作双水相图中的双节线。
二 实验原理
在PEG分子量一定的条件下，PEG浓度以及硫 酸铵的浓度的改变均会改变改变两相间的性质差 异，从而影响α-淀粉酶在两相间的分配。
三 实验材料（PEG分子量的影响）
1. 0.02 mol/L PB 7.0 的配置：取 6.1ml 0.2M的Na2HPO4溶液加3.9 mL0.2M的 NaH2PO4混匀，用时稀释至2000 mL。（全班一起配置，每组分取400mL于三角烧 瓶）
下相弃去，换吸管，吸出下相。 • 每个样品组均需设置空白对照，用于调零
• 实验中各组添加量总重量为10g • 加完原料与蛋白后必须将离心试管沿轴向充分振摇，使固
体充分溶解 • 上下相分离时注意吸管小心吸出上相，将多余上相和少量
下相弃去，换吸管，吸出下相。 • 每个样品组均需设置空白对照，用于调零
六 实验数据处理分析
分子量（D）
400 800 2000
相比上相酶 浓度源自羧甲基纤维素钠/羧甲基 葡聚糖钠
PEG/磷酸盐，硫酸盐
* PEG：聚乙二醇；Dex：葡聚糖
1 双水相的类型与形成原因
• 双水相形成原因
– 聚合物/聚合物
• 聚合物的不相溶性：当两种高 分子聚合物之间存在斥力作用时， 由于相对分子质量较大，分子之 间的相互排斥作用于混合过程中 熵的增加相比占主导地位，一种 聚合物分子的周围将聚集同种分 子而排斥其他分子，当达到平衡 时，形成分别富含不同聚合物的 两相。
一 实验目的
• 掌握PEG浓度/分子量对α-淀粉酶分配行为影响 的研究方法
• 分析比较PEG分子量/PEG浓度对α-淀粉酶分配行 为的影响
二 实验原理
PEG的分子量对α-淀粉酶的分配具有重要影响。随 PEG分子量的增大，双水相分相动力增强，两相间差异增 大，选择性增强；但PEG的疏水性增强，不利于蛋白向上 相的分配。
3. 0.02 mol/L pH8.0的磷酸缓冲液的配置：取 9.47 ml 0.2M的Na2HPO4溶液加 0.53 mL0.2M的NaH2PO4混匀，稀释 至100mL，每组分25mL。
三 实验步骤（pH值的影响）
固定条件：PEG-800，PEG浓度16%，硫酸铵浓度20%
四 实验数据处理
PH值
双水相 均一相
影响双水相分配理论
2.1 成相聚合物的相对分子质量 • 2.2 成相聚合物的浓度 • 2.3 盐的种类和浓度 • 2.4 pH的影响 • 2.5 温度的影响
双水相的优势
• 含水量高，萃取条件温和，不会引起生物 活性物质变性
• 没有有机溶剂残留 • 去细胞碎片的同时纯化蛋白，使分离过程
更加经济 • 容易实现反萃取
实验安排
• 星期六上午（8:00-11:40）：实验分组，试剂配 置，实验一
• 星期六下午（2:00-5:30）：实验二与实验三 • 星期日上午（8:00-11:30）：实验四与实验五 • 星期日下午（2:00-5:30）：实验二三四五的结果
分析与讨论；完成实验报告；整理教室卫生
四 实验步骤
PEG 浓度
上相 体积 （mL）
下相 上相
体积 OD280/260 （mL）
下相 OD280/260
1. 上下相体积的读取：根据刻度读数直接读取 2. 上下相蛋白含量的测定：上相稀释两倍，下相不稀释，测定OD280与 OD260，通过公式1.45*OD280-0.74*OD260
五 实验注意事项
原点，表
明其系统分相动力
。
六 思考题
• 为什么随PEG分子量增大，双水相系统分相动力 增强？
实验分组安排
• 每四个人一大组，每两个人一小组，分别完成两 种PEG的相图制作，交叉验证。
• 实验完成后，及时清洗玻璃仪器，置于烘箱烘干 备用。
• 完成下午试剂的配置工作。
实验二-三 PEG分子量/PEG浓度 对α-淀粉酶在双水相中分配的影响
双水相 均一相
二 实验材料
1. PEG：400，800，2000，见公共实验台 2. 43%的（NH4）SO4溶液：称取43g硫酸铵（见公共实
验台）溶解于适量水中，定容至100mL，称重计算密 度。 3. 蒸馏水（值日生从117打水，放在桶中备用） 4. 碱式滴定管 5. 试管：干燥无水
三 实验步骤
下相酶 浓度
分配系数
R=VT/VB -----VT为上相体积；VB为下相体积。
K=CT/CB -----CT为上相浓度；CB为下相浓度。
六 实验数据处理分析
1. 分析分配系数是大于1还是小于1，以确定蛋白的 分配选择性
2. 分析分配系数随PEG分子量的增大，其趋势是趋 向等于1还是趋向远离1，显示两相性质差异以及 蛋白分配差异
二 实验原理
在PEG分子量一定的条件下，PEG浓度以及硫 酸铵的浓度的改变均会改变改变两相间的性质差 异，从而影响α-淀粉酶在两相间的分配。
pH值会影响蛋白质及溶液的解离状态，从 而影响蛋白质在两相中的分配。
二 实验材料(硫酸铵浓度)
1. PEG 800溶液：同前 2. 0.02 mol/L PB 7.0的配置：同前 3. 1%的α-淀粉酶酶液：同前 4. 40%的硫酸铵溶液：同前 5. 带刻度的玻璃离心管4 根/小组；塑料离心管4根/小组；
– 聚合物/盐
• 盐析作用
2.2%葡聚糖水溶液与等体 积的0.72%甲基纤维素钠
水溶液混合静置
常用的双水相
• PEG/DEX
– 平衡后，上相富含PEG，下相富含Dex
• PEG /无机盐
– 平衡后，上相富含PEG，下相富含无机盐
相图的组成及意义
• 双节线（曲线TKB）：上方为双水相， 下方为均一相
2. 1%的α-淀粉酶酶液：称取2gα-淀粉酶溶解于200mL 0.02 mol/L pH 7.0的磷 酸缓冲液中。（全班一起配置，过滤后于4摄氏度备用）
3. PEG 800：称取65 g PEG800，于60摄氏度水浴加热熔化备用。 4. PEG 2000：称取25 g PEG 2000，于60摄氏度水浴加热熔化备用。 （全班一起
• 系线（直线TMB）：
– 系线上各点处系统总浓度不同，但均分 成组成相同（T,B）而体积不同的两相
– 两相体积近似服从杠杆原则，即 VT/VB=BM/MT
• K点：系线的长度是衡量两相之间差 别的尺度，系线越长，两相间差别 越大，反之则越小。在K点系线长度 趋向为零，两相差别消失，任何溶 质在两相间的分配系数均为1，此点 称为临界点。
四 实验步骤
PEG 分子量
上相 体积 （mL）
下相 上相
体积 OD280/260 （mL）
下相 OD280/260
400 800 2000
1. 上下相体积的读取：根据刻度读数直接读取 2. 上下相蛋白含量的测定：上相稀释两倍，下相不稀释，测定OD280与 OD260，通过公式1.45*OD280-0.74*OD260
配置） 5. 40%的硫酸铵溶液：称取80 g硫酸铵，加适量pB 7.0 溶解，定重至200g。 6. 带刻度的玻璃离心管4 根/小组；塑料离心管4根/小组；16 根干燥的玻璃试管；
四 实验步骤（PEG分子量的影响）
PEG 400 为液体，直接添加1.6g，条件：PEG 16%，硫酸铵 20%，pH7.0 加完原料与蛋白后必须将离心试管沿轴向充分振摇，使固体充分溶解
二 实验材料(PEG浓度)
1. PEG 800溶液：同前 2. 0.02 mol/L PB 7.0的配置：同前 3. 1%的α-淀粉酶酶液：同前 4. 40%的硫酸铵溶液：同前 5. 带刻度的玻璃离心管4 根/小组；塑料离心管4根/小组；
16 根干燥的玻璃试管；
三 实验步骤（PEG浓度的影响）
总重量为10g，硫酸铵浓度固定为20%，PEG分子量选择800 称取的PEG800，对应的PEG浓度分别为多少？
实验前预备工作
• 请各位同学按照学号顺序就做，每排坐四 位同学，为一个小组
• 请各小组同学将各自桌面上的所有玻璃仪 器清洗干净，放入烘箱烘干备用
双水相萃取α-淀粉酶及其影响因素分析 ---生物分离工程 综合平台实验
实验背景介绍
双水相萃取
• 概念：利用溶质在两个互不相溶的亲水相之间的
分配系数不同而进行分离的萃取技术。 • 问题
二 实验材料（pH值）
1. 0.02 mol/L pH6.4的磷酸缓冲液的配置：取2.65 mL 0.2M的Na2HPO4溶液加7.35 mL0.2M的NaH2PO4混匀，稀释 至100mL，每组分25mL。
2. 0.02 mol/L pH5.8 的磷酸缓冲液的配置：取0.8ml 0.2M 的Na2HPO4溶液加9.2mL0.2M的NaH2PO4混匀，稀释至100mL。
五 实验结果与分析
次数
1 2 3 4 5 6
溶液累
H2O加量
(NH4)2SO4溶液 加量
纯（NH4)2SO4 累计量
计
PEG (NH4)2SO4
（g）
总量 (%)
(%)
（g）
（mL） (g)
（g）
0.5
(NH4)2SO4溶液累计加量V盐(ml)=滴定后读数-初始读数
0.3
(NH4)2SO4溶液累计加量m盐(g)=ρ* V盐
– 双水相成相机理及条件 – 影响蛋白质在双水相中分配的因素 – 双水相的优势
1 双水相的类型与形成原因
• 双水相类型
高聚合物/ 高聚物
高聚物/盐
类型
常用
非离子型高聚物/非离子型高聚物
PEG/Dex，聚丙烯二醇 /Dex
离子型高聚物/非离子型高聚物 羧甲基纤维素钠/Dex
离子型高聚物/离子型高聚物 非离子型高聚物/无机盐
16 根干燥的玻璃试管；
三 实验步骤（硫酸铵浓度的影响）
固定条件：PEG-800，PEG浓度20%，pH值7.0 对应的硫酸铵浓度分别为多少？
三 实验步骤
硫酸铵 浓度
上相 体积 （mL）
下相 上相
体积 OD280/260 （mL）
下相 OD280/260
1. 上下相体积的读取：根据刻度读数直接读取 2. 上下相蛋白含量的测定：上相稀释两倍，下相不稀释，测定OD280与 OD260，通过公式1.45*OD280-0.74*OD260
相比
上相酶 浓度
下相酶 浓度
分配系数
R=VT/VB -----VT为上相体积；VB为下相体积。
K=CT/CB -----CT为上相浓度；CB为下相浓度。
四 实验注意事项
• 实验中各组添加量总重量为10g • 加完原料与蛋白后必须将离心试管沿轴向充分振摇，使固
体充分溶解 • 上下相分离时注意吸管小心吸出上相，将多余上相和少量
3. 分析回收率，确定蛋白质在选择性分配某相时， 在该相的回收效率
六 实验数据处理分析（案例）
六 实验数据处理分析（案例）
实验三—五 硫酸铵浓度、pH值 对α-淀粉酶在双水相中分配的影响
一 实验目的
• 硫酸铵浓度、pH值对α-淀粉酶分配行为影响的研 究方法
• 分析比较硫酸铵浓度、pH值对α-淀粉酶分配行为 的影响
PEG 800与2000为固体，可于60℃加热熔化后称取。
三 实验步骤
溶液累
次数
H2O加量
(NH4)2SO4溶液 加量
纯（NH4)2SO4 累计量
计
PEG (NH4)2SO4
（g）
总量 (%)
(%)
（g）
（mL） (g)
（g）
1
0.5
2
0.3/0.5
3
0.3/0.5
4
0.3/0.5
5
0.3/0.5
0.3
纯(NH4)2SO4累计量m’(g)=43%* V盐
0.3
溶液累计总量m总(g)=mPEG+m盐+m水
0.5
(NH4)2SO4(%)=m’/ m总
0.5
PEG400(%)=mPEG/ m总
五 实验结果与分析
不同分子量PEG的相图
如左图所示，由图可知，
随PEG分子量的增大，双
节线对称性
，临
界点
6
0.5
红笔标记的体积可机动
四 实验注意事项
• 使用干燥洁净的试管。 • 称取PEG时，要滴加在试管底部，避免挂
到试管壁上。 • 滴定和加水过程，避免液体溅到试管壁
上。 • 初始几次滴定过程，必须要缓慢逐滴滴
加(NH4)2SO4溶液。 • 若滴下(NH4)2SO4后，溶液出现浑浊，但
振荡后又恢复澄清，说明已接近浊点， 之后要缓慢逐滴滴加(NH4)2SO4溶液。
实验一 PEG/（NH4)2SO4双水相 相图的制作
一 实验目的
• 掌握浊点法制作双水相相图（双节线）的方法 • 分析比较PEG分子量对双水相成相的影响
二 实验原理
因层析作用，一定浓度的 PEG与（NH4)2SO4混合溶液可形 成双水相，相图即用于描述双 水相的成相条件及定量关系。
双节线是双水相与均一相 的分界线，可用浊点法测定制 作双水相图中的双节线。
二 实验原理
在PEG分子量一定的条件下，PEG浓度以及硫 酸铵的浓度的改变均会改变改变两相间的性质差 异，从而影响α-淀粉酶在两相间的分配。
三 实验材料（PEG分子量的影响）
1. 0.02 mol/L PB 7.0 的配置：取 6.1ml 0.2M的Na2HPO4溶液加3.9 mL0.2M的 NaH2PO4混匀，用时稀释至2000 mL。（全班一起配置，每组分取400mL于三角烧 瓶）
下相弃去，换吸管，吸出下相。 • 每个样品组均需设置空白对照，用于调零
• 实验中各组添加量总重量为10g • 加完原料与蛋白后必须将离心试管沿轴向充分振摇，使固
体充分溶解 • 上下相分离时注意吸管小心吸出上相，将多余上相和少量
下相弃去，换吸管，吸出下相。 • 每个样品组均需设置空白对照，用于调零
六 实验数据处理分析
分子量（D）
400 800 2000
相比上相酶 浓度源自羧甲基纤维素钠/羧甲基 葡聚糖钠
PEG/磷酸盐，硫酸盐
* PEG：聚乙二醇；Dex：葡聚糖
1 双水相的类型与形成原因
• 双水相形成原因
– 聚合物/聚合物
• 聚合物的不相溶性：当两种高 分子聚合物之间存在斥力作用时， 由于相对分子质量较大，分子之 间的相互排斥作用于混合过程中 熵的增加相比占主导地位，一种 聚合物分子的周围将聚集同种分 子而排斥其他分子，当达到平衡 时，形成分别富含不同聚合物的 两相。
一 实验目的
• 掌握PEG浓度/分子量对α-淀粉酶分配行为影响 的研究方法
• 分析比较PEG分子量/PEG浓度对α-淀粉酶分配行 为的影响
二 实验原理
PEG的分子量对α-淀粉酶的分配具有重要影响。随 PEG分子量的增大，双水相分相动力增强，两相间差异增 大，选择性增强；但PEG的疏水性增强，不利于蛋白向上 相的分配。
3. 0.02 mol/L pH8.0的磷酸缓冲液的配置：取 9.47 ml 0.2M的Na2HPO4溶液加 0.53 mL0.2M的NaH2PO4混匀，稀释 至100mL，每组分25mL。
三 实验步骤（pH值的影响）
固定条件：PEG-800，PEG浓度16%，硫酸铵浓度20%
四 实验数据处理
PH值
双水相 均一相
影响双水相分配理论
2.1 成相聚合物的相对分子质量 • 2.2 成相聚合物的浓度 • 2.3 盐的种类和浓度 • 2.4 pH的影响 • 2.5 温度的影响
双水相的优势
• 含水量高，萃取条件温和，不会引起生物 活性物质变性
• 没有有机溶剂残留 • 去细胞碎片的同时纯化蛋白，使分离过程
更加经济 • 容易实现反萃取
实验安排
• 星期六上午（8:00-11:40）：实验分组，试剂配 置，实验一
• 星期六下午（2:00-5:30）：实验二与实验三 • 星期日上午（8:00-11:30）：实验四与实验五 • 星期日下午（2:00-5:30）：实验二三四五的结果
分析与讨论；完成实验报告；整理教室卫生
四 实验步骤
PEG 浓度
上相 体积 （mL）
下相 上相
体积 OD280/260 （mL）
下相 OD280/260
1. 上下相体积的读取：根据刻度读数直接读取 2. 上下相蛋白含量的测定：上相稀释两倍，下相不稀释，测定OD280与 OD260，通过公式1.45*OD280-0.74*OD260
五 实验注意事项
原点，表
明其系统分相动力
。
六 思考题
• 为什么随PEG分子量增大，双水相系统分相动力 增强？
实验分组安排
• 每四个人一大组，每两个人一小组，分别完成两 种PEG的相图制作，交叉验证。
• 实验完成后，及时清洗玻璃仪器，置于烘箱烘干 备用。
• 完成下午试剂的配置工作。
实验二-三 PEG分子量/PEG浓度 对α-淀粉酶在双水相中分配的影响
双水相 均一相
二 实验材料
1. PEG：400，800，2000，见公共实验台 2. 43%的（NH4）SO4溶液：称取43g硫酸铵（见公共实
验台）溶解于适量水中，定容至100mL，称重计算密 度。 3. 蒸馏水（值日生从117打水，放在桶中备用） 4. 碱式滴定管 5. 试管：干燥无水
三 实验步骤
下相酶 浓度
分配系数
R=VT/VB -----VT为上相体积；VB为下相体积。
K=CT/CB -----CT为上相浓度；CB为下相浓度。
六 实验数据处理分析
1. 分析分配系数是大于1还是小于1，以确定蛋白的 分配选择性
2. 分析分配系数随PEG分子量的增大，其趋势是趋 向等于1还是趋向远离1，显示两相性质差异以及 蛋白分配差异
二 实验原理
在PEG分子量一定的条件下，PEG浓度以及硫 酸铵的浓度的改变均会改变改变两相间的性质差 异，从而影响α-淀粉酶在两相间的分配。
pH值会影响蛋白质及溶液的解离状态，从 而影响蛋白质在两相中的分配。
二 实验材料(硫酸铵浓度)
1. PEG 800溶液：同前 2. 0.02 mol/L PB 7.0的配置：同前 3. 1%的α-淀粉酶酶液：同前 4. 40%的硫酸铵溶液：同前 5. 带刻度的玻璃离心管4 根/小组；塑料离心管4根/小组；
– 聚合物/盐
• 盐析作用
2.2%葡聚糖水溶液与等体 积的0.72%甲基纤维素钠
水溶液混合静置
常用的双水相
• PEG/DEX
– 平衡后，上相富含PEG，下相富含Dex
• PEG /无机盐
– 平衡后，上相富含PEG，下相富含无机盐
相图的组成及意义
• 双节线（曲线TKB）：上方为双水相， 下方为均一相
2. 1%的α-淀粉酶酶液：称取2gα-淀粉酶溶解于200mL 0.02 mol/L pH 7.0的磷 酸缓冲液中。（全班一起配置，过滤后于4摄氏度备用）
3. PEG 800：称取65 g PEG800，于60摄氏度水浴加热熔化备用。 4. PEG 2000：称取25 g PEG 2000，于60摄氏度水浴加热熔化备用。 （全班一起
• 系线（直线TMB）：
– 系线上各点处系统总浓度不同，但均分 成组成相同（T,B）而体积不同的两相
– 两相体积近似服从杠杆原则，即 VT/VB=BM/MT
• K点：系线的长度是衡量两相之间差 别的尺度，系线越长，两相间差别 越大，反之则越小。在K点系线长度 趋向为零，两相差别消失，任何溶 质在两相间的分配系数均为1，此点 称为临界点。
四 实验步骤
PEG 分子量
上相 体积 （mL）
下相 上相
体积 OD280/260 （mL）
下相 OD280/260
400 800 2000
1. 上下相体积的读取：根据刻度读数直接读取 2. 上下相蛋白含量的测定：上相稀释两倍，下相不稀释，测定OD280与 OD260，通过公式1.45*OD280-0.74*OD260
配置） 5. 40%的硫酸铵溶液：称取80 g硫酸铵，加适量pB 7.0 溶解，定重至200g。 6. 带刻度的玻璃离心管4 根/小组；塑料离心管4根/小组；16 根干燥的玻璃试管；
四 实验步骤（PEG分子量的影响）
PEG 400 为液体，直接添加1.6g，条件：PEG 16%，硫酸铵 20%，pH7.0 加完原料与蛋白后必须将离心试管沿轴向充分振摇，使固体充分溶解
二 实验材料(PEG浓度)
1. PEG 800溶液：同前 2. 0.02 mol/L PB 7.0的配置：同前 3. 1%的α-淀粉酶酶液：同前 4. 40%的硫酸铵溶液：同前 5. 带刻度的玻璃离心管4 根/小组；塑料离心管4根/小组；
16 根干燥的玻璃试管；
三 实验步骤（PEG浓度的影响）
总重量为10g，硫酸铵浓度固定为20%，PEG分子量选择800 称取的PEG800，对应的PEG浓度分别为多少？
实验前预备工作
• 请各位同学按照学号顺序就做，每排坐四 位同学，为一个小组
• 请各小组同学将各自桌面上的所有玻璃仪 器清洗干净，放入烘箱烘干备用
双水相萃取α-淀粉酶及其影响因素分析 ---生物分离工程 综合平台实验
实验背景介绍
双水相萃取
• 概念：利用溶质在两个互不相溶的亲水相之间的
分配系数不同而进行分离的萃取技术。 • 问题
二 实验材料（pH值）
1. 0.02 mol/L pH6.4的磷酸缓冲液的配置：取2.65 mL 0.2M的Na2HPO4溶液加7.35 mL0.2M的NaH2PO4混匀，稀释 至100mL，每组分25mL。
2. 0.02 mol/L pH5.8 的磷酸缓冲液的配置：取0.8ml 0.2M 的Na2HPO4溶液加9.2mL0.2M的NaH2PO4混匀，稀释至100mL。
五 实验结果与分析
次数
1 2 3 4 5 6
溶液累
H2O加量
(NH4)2SO4溶液 加量
纯（NH4)2SO4 累计量
计
PEG (NH4)2SO4
（g）
总量 (%)
(%)
（g）
（mL） (g)
（g）
0.5
(NH4)2SO4溶液累计加量V盐(ml)=滴定后读数-初始读数
0.3
(NH4)2SO4溶液累计加量m盐(g)=ρ* V盐
– 双水相成相机理及条件 – 影响蛋白质在双水相中分配的因素 – 双水相的优势
1 双水相的类型与形成原因
• 双水相类型
高聚合物/ 高聚物
高聚物/盐
类型
常用
非离子型高聚物/非离子型高聚物
PEG/Dex，聚丙烯二醇 /Dex
离子型高聚物/非离子型高聚物 羧甲基纤维素钠/Dex
离子型高聚物/离子型高聚物 非离子型高聚物/无机盐
16 根干燥的玻璃试管；
三 实验步骤（硫酸铵浓度的影响）
固定条件：PEG-800，PEG浓度20%，pH值7.0 对应的硫酸铵浓度分别为多少？
三 实验步骤
硫酸铵 浓度
上相 体积 （mL）
下相 上相
体积 OD280/260 （mL）
下相 OD280/260
1. 上下相体积的读取：根据刻度读数直接读取 2. 上下相蛋白含量的测定：上相稀释两倍，下相不稀释，测定OD280与 OD260，通过公式1.45*OD280-0.74*OD260