生物样品分析测定

溶剂解
第三节 生物样品的制备
样品预处理 药物的提取
冷冻干燥
适用于 -大批量的生物样品 大批量的生物样品 -水溶性很强的样品 水溶性很强的样品 -挥发性样品 挥发性样品 -对热不稳定的样品 对热不稳定的样品
第三节
生物样品的制备
样品预处理 药物的分离与净化
液-液萃取 液萃取 萃取率：不低于50% 萃取率：不低于
了解提取回收率和最低检测浓度的大致情况
空白样品中添加对照品后测定（回收率实验） 空白样品中添加对照品后测定（回收率实验） 实际样品测定
第四节 生物样品内药物分析方法
方法的评价 准确度（accuracy） 准确度（ ）
回收率—相对稳定 回收率 与参比方法相比较—相关系数r >0.95 与参比方法相比较—
第三节 生物样品的制备
常用生物样品 常用生物样品的种类、 常用生物样品的种类、特点与采集
血浆(plasma) 血样—— 血清(serum) 血样 全血(whole blood) 尿液(urine)——用于药物剂量回收、药物肾清除率 尿液 及生物利用度的研究 ※ 尿液药物浓度变化大，应测定一定时间内尿中药 物总量。 ※ 尿液与血液中药物的相关性差。 ※ 尿中药物大多呈缀合状态。
影响提取率的因素 pH值 值 提取溶剂 离子强度 离子对提取
第三节
生物样品的制备
样品预处理 药物的分离与净化
液-固萃取 固萃取
固相提取柱（使用硅藻土、氧化铝、离子 固相提取柱（使用硅藻土、氧化铝、 交换树脂、活性炭等填充剂） 交换树脂、活性炭等填充剂） “干混合物”萃取 干混合物”
待测组分的富集
真空挥发或通气流挥发
样品预处理 提取方法的选择依据
药物的理化性质
-酸碱度、极性、挥发性、可能的生物转化途 径等
药物的浓度范围 药物测定的目的 生物样品的类型 样品处理与分析技术的关系
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第三节 生物样品的制备
样品预处理 药物的提取
蛋白质处理
利用蛋白质脱水沉淀 有机溶剂、中性盐等 利用蛋白质形成不溶性盐沉淀 酸性沉淀剂（TCA、高氯酸、苦味酸等） 酸性沉淀剂 重金属盐（Zn2+、Cu2+） 重金属盐 其他方法 加热、离心、超滤和透析、 加热、离心、超滤和透析、酶消化法
被测组分浓度低（10-6-10-9g/ml），变化幅度 大 样品干扰物质多，部分样品稳定差 样品量少 要求较快提供结果 测定数据的处理和阐明有时不太容易
第二节
药物在生物体内的存在状态与生物转化
药物在生物体内的存在状态 药物代谢——保证临床用药的安全、合理 药物代谢 和有效
药物代谢的部位：肝脏、肾、脾、肺、肠粘膜、 药物代谢的部位： 胎盘等 药物代谢反应
第三节 生物样品的制备
样品预处理 药物的提取
缀合物（结合物） 缀合物（结合物）水解
酸水解—无机酸 酸水解 无机酸
※ 简便快速，但专属性差，有可能造成被测物分解。
酶水解 葡萄糖醛酸苷酶(glucuronidase) 葡萄糖醛酸苷酶 芳基硫酸酯酶(arylsulfatase) 芳基硫酸酯酶
※ 专属性强，一般不会造成被测物分解，但水解时间 长，费用高。
衍生化处理
第三节
生物样品的制备
样品预处理 待测物的损失
吸附、化学降解、衍生化反应、络合、 吸附、化学降解、衍生化反应、络合、 蒸发
样品玷污
增塑剂 脂肪酸和酯类 其他
第四节 生物样品内药物分析方法
分析方法建立的一般步骤 以纯品进行测定
确定线性范围、最适测定浓度、灵敏度、最佳测定条件 等
空白样品测定 以水代替空白样品， 以水代替空白样品，添加对照品后测定
第一阶段（一相）：P450等催化下的氧化、还原、 第一阶段（一相）： ）： 水解等反应，增大极性 第二阶段（二相）：与葡萄糖醛酸、硫酸盐等结合， 第二阶段（二相）： ）： 进一步增大极性，随尿排出
第三节 生物样品的制备
常用生物样品 生物样品的选取原则
能够反映出浓度与药效之间的关系 易于获得 便于处理 根据不同目的和要求进行选取
精密度（ 精密度（precision） ）
各浓度点RSD不应大于15%，最低定量限不应大 于20%。
灵敏度
检测限(LOD)、定量限(LOQ)、最低检测浓度
第四节 生物样品内药物分析方法
方法的评价 方法的专属性（ 方法的专属性（specificity） ）
注重考虑代谢物、 注重考虑代谢物、内源性物质和同时服用 药物的干扰
第三节 生物样品的制备
常用生物样品 常用生物样品的种类、 常用生物样品的种类、特点与采集
唾液(saliva)——用于药物浓度监测和药代动力学 唾液 研究 其他——动物脏器组织匀浆等 其他
样本的代表性
——力求取样条件标准化
样品的贮存
血样—离心，冷冻保存 尿液－立即测定，否则应冷藏或加防腐剂
第三节 生物样品的制备
第一节 概述
生物药物分析的对象—药物所到之生物体的体液、 生物药物分析的对象 器官、组织、排泄物等。 生物药物分析的目标—母体药物和代谢产物 生物药物分析的目标 生物药物分析的意义 药物质量的正确评价 临床合理用药
第一节 概述
生物药物分析的特点 生物样品中被测组分的存在形式多样
原型药（游离型）、结合型、代谢物、缀合物等
线性范围--相关系数r >0.99 线性范围 样品稳定性考察
长期贮存(-20 ℃/-70℃)、短期室温贮存 长期贮存 冷冻-解冻循环稳定性 冷冻 解冻循环稳定性 贮备液稳定性
第四节 生物样品内药物分析方法 常用测定方法 光谱法 紫外可见分光光度法 荧光分光光度法 色谱法 电泳法 免疫分析法