总黄酮含量的测定

总黄酮成分提取
取苦菜和蒲公英地上部分，洗净烘干，粉碎成粉，过0.6 mm筛，置于棕色瓶内储藏备用。

分别称取苦菜和蒲公英粉1.000 g于三角瓶中溶解，共9份，放入超声波清洗器中（超声功率120 W，温度为50℃）提取，过滤定容至100 mL。

为快速提取苦菜和蒲公英中的总黄酮成分，采用正交试验确定提取的最佳条件。

选择乙醇浓度、料液比和提取时间3个水平进行试验(见表1) 。

表1 正交试验因素及水平
Table 1 Factors and level of orthogonal test
处理Treatment
因素Factors
A 乙醇浓度/%
Ethanol
concentration
B 料液比/g·mL-1
Solid-liquid ratio
C 提取时间/h
Extraction time
1 50 1:10 0.5
2 60 1:20 1
总黄酮含量测定
（1）芦丁标准溶液的制备：将芦丁标准品于120℃下干燥30min，称取干燥后样品20 mg，用30%乙醇溶解，定容到100 mL，配制成浓度为0.2 mg·mL-1的芦丁标准溶液。

（2）标准曲线的制作：分别吸取0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL芦丁标准溶液，置于50 mL比色管中，加入2.0 mL 5%的NaNO2溶液，混匀后放置5 min，再加入2.0 mL 10%的Al(NO3)3溶液，摇匀后放置5 min，加入10 mL 4%的NaOH溶液，最后用30%乙醇定容至50 mL，摇匀后放置10 min，在510 nm下用紫外分光光度计测定各样品吸光值。

以吸光度A值为纵坐标( Y)，以标准样品浓度为横坐标( X) ，绘制标准曲线，计算线性回归方程。

得到的线性回归方程为: Y =0. 017X-0.0124，相关系数R2 = 0.994。

即在0~0.02 mg ·mL-1范围内，芦丁标准样品浓度与吸光度的线性关系良好。

1、总黄酮含量的测定
吸取黄酮提取液1.0 mL于50 mL比色管中，按照芦丁标准溶液吸光度的方法测定样品的吸光度，将吸光度值代入回归方程求得总黄酮得率。

总黄酮得率(%) = m/M×100；式中: m 为经换算后提取液中总黄酮质量( g) ；M 为样品质量( g)。

2、抗氧化活性测定
DPPH溶液的配制：准确称取DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）标准品0.1471 g，用95%乙醇溶解并定容至100 mL，得质量浓度为147.1 mg·mL-1的DPPH溶液，冷藏备用。

分别取适量苦菜和蒲公英样品于试管内，加入0.50 mLDPPH溶液，定容至25 mL，室温反应30 min，在517 nm波长处测定混合溶液的苦菜吸光度A1和蒲公英吸光度A2。

同时取0.50 mLDPPH溶液，定容至25 mL，室温反应30 min，用紫外分光光度计在517 nm波长处测定混合溶液的吸光度A0，重复3次，取平均值。

苦菜DPPH自由基清除率/%=(A0－A1)/A0× 100，蒲公英DPPH自由基清除率/%=(A0－A2)/A0× 100。