SH0005总胆汁酸测定SOP

总胆汁酸测定 (循环酶法)
Total Bile Acids (TBA)
1检验目的
本方法用于体外定量测定人血清或血浆总胆汁酸。

2方法
第五代循环酶方法，检测采用速率法。

3原理
胆汁酸会被3α-羟甾醇脱氢（3α-HSD）以及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）特异性地氧化，生成3-酮类固醇以及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）。

此外生成的3-酮类固醇在3α-羟甾醇脱氢（3α-HSD）及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）存在下，生成胆汁酸及β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。

如上所述，依据循环酶而放大微量的胆汁酸量，测定单位时间内生成的β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型（Thio-NADH）在405nm处的吸光度变化，以求得胆汁酸的浓度。

4 标本
血清、肝素或EDTA处理的血浆。

应使用新鲜标本，标本必须避光保存！标本稳定性：4℃保存可稳定7天，-20℃保存可稳定3个月，不可使用已被污染的标本。

5 试剂
5.1在测定时的各组分和浓度
试剂1（R1）：
952.9 mg/L
β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型
(Thio-NAD)
Good’s缓冲液120 mmol/L
试剂2(R2)：
β-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸还原型(Thio-NADH) 6.1 g/L
3α-羟甾醇脱氢酶(3α-HSD) 12500 mmol/L
Good’s缓冲液120 mmol/L
表面活性剂，稳定剂适量
5.2试剂稳定性与贮存
试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻！试剂2必须避光保存。

6 仪器
OLYMPUS AU400全自动生化分析仪
7测定程序
见参数表
8 校准品和质控品
8.1使用Roche公司提供的Roche多项目定标液对自动分析仪进行校准。

每批样品检测时，使用Roche 公司提供的Roche定标液和控制品进行内部质量控制。

8.2质控物的保存和稳定性：质控物存放于4-8℃可保存一个月，分装存放于-20℃至有效期。

8.3室内质控规则：X±2S为警告线, X±3S为失控线。

8.4 不准确度允许范围：X±10%
8.5不精密度：RCV：4.0%
9 性能特性
9.1病人结果可报告范围
本法的检测范围为1～180 μmol/L。

当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 1稀释，重新测定，结果乘以2。

9.2特异性/干扰
当样品中抗坏血酸浓度≤ 5.6 mmol/L ，胆红素≤ 855 μmol/L，血红蛋白≤ 5g/L，乳酸度≤ 3000度时没有观察到干扰。

9.3灵敏度/检测限
本试剂的检测限为2 μmol/L。

10注意事项
10.1 应严守早晨空腹采血。

10.2 避免试剂与皮肤及粘膜接触。

10.3校准品由志愿者血清制备, 经FDA认可的方法测定未发现HIV抗体和HbsAg，但仍须如病人样品一样小心处理。

11废液处理
参照卫生部<<消毒技术规范>>要求执行。

12 参考范围
成年人：≤ 10 μmol/L
13临床意义
测定血清胆汁酸可提供肝胆系统是否正常的重要信息。

肝胆疾病时周围血液循环中的胆汁酸水平明显偏高。

急性肝炎早期和肝外阻塞性黄疸时，有些病历可正常的100倍以上。

肝胆疾病时血清胆汁酸浓度的升高与其它肝功能实验及肝组织学的变化极为吻合，在肝细胞仅有轻微坏死时，血清胆汁酸的升高常比其他检查更为灵敏。