宫颈鳞癌及癌前病变组织中ILK＼PTEN的表达情况

宫颈鳞癌及癌前病变组织中ILK＼PTEN的表达情况目的:探讨宫颈鳞癌及癌前病变组织中整合素连接激酶(ILK)、PTEN的表达
情况。

方法:采用免疫组化方法对50例宫颈鳞癌,28例CIN和12例正常宫颈组织进行ILK、PTEN检测,并结合临床资料进行统计分析。

结果:宫颈鳞癌ILK阳性表达率明显高于正常组织和CIN 1、2级组织,ILK表达与肿瘤浸润、转移和临床分期密切相关;正常宫颈组织PTEN均呈阳性表达,而宫颈浸润癌组织PTEN表达率明显降低,但PTEN表达与肿瘤浸润、转移和临床分期无明显相关性。

结论:宫颈鳞癌组织ILK呈高表达、PTEN呈低表达,可能在宫颈肿瘤浸润转移过程中起重要作用。

[Abstract] Objective: To study the expression of ILK,PTEN in cervical squamous carcinoma and cervical precancerous lesions. Methods:50 cases of cervical squamous carcinoma, 28 cases of cervical intraepithelial neoplasia( CIN) and 12 cases of normal cervical tissues ample were stained for ILK,PTEN by immunohistochemistry method. Results: ILK positive expression rate in cervical squamous carcinoma was significantly higher than that in normal cervical tissue and CIN I. The positive expression rate of PTEN in normal cervical tissue was 100.0%, but it was remarkably decreased in cervical squamous carcinoma. Our analysis indicated that no significant relationship was found between the state of PTEN expression and invasion,metastasis and the clinical stage of the tumor. Conclusion: The higher expression of ILK and the lower expression of PTEN in cervical squamous carcinoma may play an important role in angiogenesis of cervical squamous carcinoma.
[Key words] Cervical squamous carcinoma; ILK; Immunohistochemistry
宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma, SCC)是世界上发病率仅次于乳腺癌的女性第二常见肿瘤,目前仍是女性生殖系统发病率最高的恶性肿瘤,且近年发病率趋于年轻化,严重危害女性生理、心理健康[1]。

近年来,随着分子生物学的发展,人们开始关注SCC发生、发展的分子生物学机制。

本文应用免疫组化方法对宫颈SCC进行整合素连接激酶(ILK)、PTEN检测,探讨它们在宫颈SCC 中表达及临床意义。

1 材料与方法
1.1 标本来源
选取5家医院2005～2009年手术及活检宫颈标本90例。

正常宫颈组织12例(子宫肌瘤行全子宫切除术),CIN 28例,宫颈浸润性鳞状细胞癌50例, 10%中性甲醛液固定,均由病理专家确诊。

宫颈浸润性鳞状细胞癌按WHO分级标准分为高分化(G1)、中分化(G2)和低分化(G3),按1995年FIGO标准分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。

1.2 主要试剂与方法
鼠抗人ILK、PTEN及免疫组化试剂盒购自北京中杉生物技术有限公司。

免疫组化采用S-P法,按照试剂盒操作步骤进行,DAB显色,苏木精复染,中性树胶封固。

1.3 结果判定
ILK、PTEN均主要为胞质着色,以胞质内出现棕黄色颗粒的细胞为阳性染色细胞,每例均随机观察5个高倍视野(×400),用半定量积分法判断结果,阳性细胞率5%为0分,6%～25%为1分,26%～50%为2分,51%～75% 为3分,>75 %为4分;阳性强度黄色为1分,棕黄为2分,棕褐色为3分。

两者积分相乘,0分为阴性(-),1～4分为弱阳性(+),5～8分为中度阳性(++),9～12分为强阳性(+++)。

1.4 统计学分析
采用t检验和χ2检验。

2 结果
2.1 宫颈鳞癌及CIN中ILK的表达情况
正常宫颈组织和CIN I组织中几乎不表达ILK,CINⅡ中阳性表达率也很低,与CIN Ⅲ和浸润性宫颈鳞癌相比,差异有统计学意义(P＜0.05)(表1)。

宫颈浸润性鳞状细胞癌中,ILK弥漫分布于癌巢中,并以巢周表达更明显,浸润前沿的癌巢表达明显比其他部位要显著。

2.2 宫颈鳞癌及各级CIN组织中PTEN的表达情况
正常宫颈组织鳞状上皮细胞中PTEN呈强阳性表达。

各级CIN组织中PTEN 的阳性表达率明显高于宫颈浸润性鳞状细胞癌组,差异有统计学意义(P＜0.01),见表1。

2.3 PTEN阳性表达与ILK表达的关系
PTEN阳性表达的55例中,ILK阳性表达率为7.3%(4/55);而PTEN阴性表达的35例中,ILK的阳性表达率为60.0%(21/35)。

经统计学分析,PTEN阳性表达与ILK的表达呈负相关(χ2=10.37,P＜0.005)。

2.4 ILK、PTEN表达宫颈鳞癌临床病理特征的关系
宫颈浸润性鳞状细胞癌组ILK阳性表达率随着组织学分级的升高而增高,有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者,浸润深度≥1 cm者明显高于浸润深度<1 cm者,Ⅱ～Ⅳ期浸润癌者明显高于Ⅰ期。

PTEN在有淋巴结转移者、浸润深度≥1
cm者及Ⅱ～Ⅳ期浸润癌者表达率明显低于无淋巴结转移者,浸润深度<1 cm者及Ⅰ期宫颈鳞癌者,但差异均无统计学意义(P＜0.05),见表2。

与正常宫颈组和CIN I、CINⅡ组相比,*P＜0.05;与正常宫颈组和CIN组相比, #P＜0.01
与无淋巴结转移组比较,*P＜0.05;与临床Ⅰ期组比较,△P＜0.05;与浸润深度<1组比较,**P＜0.01
3讨论
ILK是一种丝/苏氨酸蛋白激酶,可与整合素胞浆域结合,作用于多种与肿瘤相关的信号传导途径,促进细胞周期进行,加快细胞的生长裂变,促进新血管形成等作用对肿瘤的形成起着非常关键的作用[2]。

ILK经PI3K依赖方式对激酶相关的肌动蛋白丝重组进行调节,过度表达可引起细胞壁肌动蛋白丝结构重组,形成细胞动能结构,增强了细胞迁移及侵袭能力[3]。

由于这些原因,使得ILK与肿瘤的形成、浸润转移和临床预后等密切相关[4-8]。

PTEN是一种抑癌基因,它不仅可以通过信号传导通路调控细胞周期,影响细胞的生长发育和凋亡,而且参与调节细胞的迁移、黏附。

其广泛存在于人类多种恶性肿瘤中[9-12]。

本研究显示,宫颈浸润性鳞状细胞癌组ILK阳性表达率随着组织学分级的升高而增高,有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者,浸润深度≥1 cm者明显高于浸润深度<1 cm者,Ⅱ~Ⅳ期浸润癌者明显高于Ⅰ期。

提示ILK能促进宫颈癌的发生、侵袭和转移,与宫颈癌的发生、发展密切相关。

PTEN阳性表达率在正常宫颈组织明显高于宫颈鳞状细胞癌组,差异具有统计学意义(P＜0.05)。

随着临床分期的增高、浸润深度的增加、淋巴结的转移,PTEN的表达越低,而ILK的表达逐渐增高,说明ILK和PTEN与宫颈癌的发生、发展密切相关,且二者表达呈负相关,其机制可能与PTEN失活(可表现为突变)和(或)丢失,使ILK持续活化,从而导致了肿瘤细胞的增殖、癌变[13]。

ILK及PTEN在肿瘤形成中的作用以及二者之间的关系,提示它们在宫颈癌诊断治疗中的前景。

肿瘤的形成和转移是多种相关因子和信号通路共同作用的结果,而ILK及PTEN在宫颈癌中的具体作用机制尚有待于进一步研究。

[参考文献]
[1]Arnouk H, Merkley MA, Podolsky RH, et al. Characterization of Molecular Markers Indicative of cervical cancer progression[J].Proteomics Clin Appl,2009,3(5): 516-527.
[2]Wang S, Basson MD. Integrin-linked kinase: a multi-functional regulator modulating extracellular pressure-stimulated cancer cell adhesion through focal adhesion kinase and AKT[J]. Cell Oncol,2009,31(4):273-289.
[3]McDonald PC, Fielding AB, Dedhar S. Integrin-linked kinase--essential roles in physiology and cancer biology[J]. J Cell Sci,2008,121(19):3121-3132.
[4]Durbin AD, Hannigan GE, Malkin D. Oncogenic ILK, tumor suppression and all that JNK[J].Cell Cycle,2009,8(24):4060-4066.
[5]Eke I, Hehlgans S, Cordes N. There’s something about ILK[J]. Int J Radiat Biol,2009,85(11): 929-936.
[6]Wang S, Basson MD. Integrin-linked kinase: a multi-functional regulator modulating extracellular pressure-stimulated cancer cell adhesion through focal adhesion kinase and AKT[J]. Cell Oncol,2009,31(4):273-289.
[7]McDonald PC, Dedhar S, Keller C. Integrin-linked kinase: both Jekyll and Hyde in rhabdomyosarcoma[J]. J Clin Invest,2009,119(6):1452-1455.
[8]Haase M, Gmach CC, Eke I, et al. Expression of integrin-linked kinase is increased in differentiated cells[J]. J Histochem Cytochem,2008,56(9): 819-829.
[9]Bowen KA, Doan HQ, Zhou BP, et al. PTEN loss induces epithelial-mesenchymal transition in human colon cancer cells[J].Anticancer Res, 2009,29(11):4439-4449.
[10]Zhao Y, Huang Q, Wang A, et al. Mutation of PTEN in glioma stem/progenitor cells: a case report[J]. Cancer Genet Cytogenet,2009,195(2): 183-185.
[11]Negri FV, Bozzetti C, Lagrasta CA. PTEN status in advanced colorectal cancer treated with cetuximab[J]. Br J Cancer,2010,102(1):162-164.
[12]Al-Saad S, Donnem T, Al-Shibli K, et al. Diverse prognostic roles of Akt isoforms, PTEN and PI3K in tumor epithelial cells and stromal compartment in non-small cell lung cancer[J]. Anticancer Res,2009,29(10):4175-4183.
[13]Persad S, Attwell S, Cray V, et al. Inhibition of integrin-linked kinase(ILK)suppresses activation of protein kinase B/Akt and induces cell cycle arrest and apoptosis of PTEN-mutant prostate cancer cell[J]. proc Natl Acad Sci USA,2000,97(7):3207-3212.。