第四章 药典中常见定量分析方法的概述

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2．杂质定量测定的准确度
• 向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。 • 本法测定结果与另一成熟的方法进行比较
• 应明确表明
• 单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（%）或面积 比（%）
3．数据要求
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在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。
3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液
硫喷妥钠含量测定
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取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取 适量（约相当于硫喷妥钠0.25g），置500ml量瓶中， 加水使硫喷妥钠溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量 取适量，用0.4%氢氧化钠溶液定量稀释制成每1ml 中约含5μg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录 ⅣA），在304nm的波长处测定吸光度；另取硫喷妥 钠对照品适量，精密称定，用0.4%氢氧化钠溶液溶 解并定量稀释制成每1ml中约含5μg的溶液。同法测 定。根据每支的平均装量计算。每1mg硫喷妥钠相 当于1.091mg的C11H17N2NaO2S
计算分光光度法 比色法 标准曲线法
仪器的校正和检定
波长
吸光度 杂散光
对溶剂的要求
截止波长：溶剂的截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器 中使用的最低波长,低于该波长后,溶剂会有紫 外吸收。
高效液相色谱法
基本原理
高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定得流动相泵 入装有填充剂得色谱柱进行分离测定得色谱分析方法。 供试品经进样阀注入，由流动相带动通过色谱柱，各 成分在柱内被分离后，依次通过检测器，其成分情况 转变为其色谱信号情况，并由记录仪、积分仪或计算 机记录、显示而作为检验成分得依据。
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外标法
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色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以庚烷磺酸钠溶液(取庚 烷磺酸钠2.0g，加水900ml溶解后，用冰醋酸调节pH值至3.9，加水至1000ml)－乙腈－甲醇 (25:6:1)为流动相；检测波长为254nm。理论板数按法莫替丁峰计算应不低于1400。
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测定法 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于法莫替丁50mg），置 50ml量瓶中，加甲醇适量，振摇使法莫替丁溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密 量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；取经五氧 化二磷80℃减压4小时的法莫替丁对照品50ml，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇适量溶解 并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对 照品溶液。精密量取上述两种溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。
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按外标法以峰面积计算，即得。
气相色谱法
基本原理
采用气体为流动相流经装有填充剂得色谱柱进行分离 测定得色谱方法。
应用
溶剂残留量得检查、乙醇检查、挥发性杂质检查、维 生素E及其制剂的含量测定。
温控系统
载气系统
进样系统
色谱柱
检测系统
数据处理系统
分析方法的验证
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药品质量标准分析方法验证的目的
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吸收池：1cm的石英池
波长：在规定的吸收峰波长正负2nm以内，测试几个点，以 吸收度最大的波长为测定波长。
吸光度读数：0.3～0.7
狭缝宽度：小于吸收带半宽度的十分之一
含量测定方法
标准品对照法
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Cx＝（Ax／AR）＊CR
卡马西平含量测定
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取本品，精密称定，加乙醇溶解并定量稀释制成每1ml 中约含10ug的溶液。照紫外－可见分光光度法，在 285nm波长处测定吸光度；另取卡马西平对照品，同 法测定，计算，即得。
吸光系数法 盐酸氟奋乃静的含量测定：取本品，精密称定，加盐 酸溶液（9→1000）溶解并定量稀释制成每1ml中约含 10μg的溶液，照分光光度法，在255nm的波长处测定 吸收度，吸收系数为553～593。
贝诺酯片含量测定
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取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相 当于贝诺酯片15mg），置100ml容量瓶中，加无水乙 醇适量，振摇，微温，使贝诺酯溶解后，放冷。加无 水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml， 置100ml容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，按 照紫外－可见分光光度法，在240nm得波长处测定吸 光度，按C17H15NO5得吸光系数为745计算，即得。
所得残渣重量与1.087相乘，即得供试品中含有药物的重量。
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请问该法是什么方法？
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二、酸碱滴定法 的弱酸都可用碱滴定液直接滴定； 的弱碱都可用酸滴定液直接滴定； 精密称取供试品适量，置于锥形瓶中，加入适当的溶剂使其溶解，
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精密加入定量过量的酸（碱）滴定液待反应完全后，加指示液数
滴，再用酸（碱）滴定液滴定至规定的突变终点颜色，此为 滴定法 ，
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三、氧化还原滴定法 氧化还原滴定法有哪些方法？ 碘量法的指示剂是什么？
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剩余碘量法回滴定用的标准溶液是什么？
亚硝酸钠滴定法的标准溶液是什么？终点指示方法是什么？
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测定有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐或有机酸盐、 以及有机酸碱金属盐类药物的含量的方法是什么滴定法？
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高氯酸法的标准溶液是什么？指示剂是什么？溶剂是什么？
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鉴别反应、杂质检查和含量测定方法
（四）检测限
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检测限 系指试样中被测物能被检测出的最低量。
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鉴别试验和杂质检查方法
信噪比法
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一般以信噪比为3∶1或2∶1。
（五）定量限
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定量限 系指试样中被测物能被定量测定的最低量 杂质定量测定 信噪比法
–
•
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一般以信噪比为10∶1
（六）线性
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线性
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系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直 接呈正比关系的程度。
• 成本低
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准确度和精密度都较高。
在中外药典中广泛应用于原料药的含量测定；
仪器分析法的特点
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准确度和精密度越来越高
专属性也较强
色谱法：先分离后测定，适合组分复杂、干扰成分较多、难以用滴 定分析法测定含量的品种 国内外药典——仪器分析法占绝大部分 高效液相色谱、分光光度法
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化学分析法
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精密度试验
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RSD（%） 0.65
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稳定性试验
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12小时内供试品稳定性良好
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重现性试验
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相对标准偏差为0.39%，表明方法重现性良好
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回收率试验
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平均回收率为99.61%，符合要求
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通过以上方法学考察，说明甘草酸含量方法稳定可行
定量分析有关计算
• 药物的定量分析
– 准确测定药品有效成分或指标性成分的含量
– 原料药与制剂含量表示方法不同
• 原料药的含量用百分含量表示 • 制剂的含量则用标示量的百分含量表示。
原料药的百分含量
制剂 标示量的百分含量
一、原料药百分含量的计算
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（一）滴定分析法
（二）分光光度法 （三）色谱法（HPLC、GC）
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（一）滴定分析法
1．直接滴定法
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呋塞米含量测定：取本品0.4988g，加乙醇30ml，微温使 溶解，放冷，加甲酚红指示液4滴与麝香草酚蓝指示液1滴，
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项目 内容 准确度
杂质测定
鉴别 -
含量测定
限度
定量
溶出量测定
+
-
+
精密度
重复性 中间精密度 专属性 检测限 定量限 线性
+ -
+ + + + +
+ + -
+ + + +
范围
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+
-
+
某研究拟建立以高效液相色谱法测定
解郁安神片中甘草酸含量的方法
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方法学考察 线性关系
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标准曲线，回归方程为y=382206.54x－4139.33，相关系数 r=0.9999。
应报告已知加入量的回收率（%） 或测定结果平均值与真实值之差及其相对标准偏差
或可信限。
（二）精密度
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精密度 系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试 品，经多次取样测定所得结果之间的接近程
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度。
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一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 含量测定和杂质的定量测定
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重复性
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在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度
用氢氧化钠滴定液（0.1003 mol/L）滴定至溶液显紫红色，
消耗氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）14.86ml；并将滴定 的结果用空白试验校正，消耗氢氧化钠滴定液
（0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氢氧化钠滴定液
（0.1mol/L）相当于33.07mg的呋塞米。按干燥品计算， 含C12H11ClN2O5S不得少于99.0%。
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含量测定
（七）范围
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范围
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系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的 高低限浓度或量的区间。
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例如：原料药和制剂含量测定，范围应为测试浓度的 80%～120%；
（八）耐用性
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耐用性
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系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程 度。
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例如：
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液相色谱法中典型的变动因素有： 流动相的组成和pH值、不同厂牌或不同批号的同类 型色谱柱、柱温、流速等；
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应用较广的沉淀滴定法是什么？其指示剂是什么？
配位滴定法的标准溶液是什么？指示剂是什么？
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紫外分光光度法
基本原理
单色光辐射穿过被测溶液时，在一定浓度范围内被该 物质吸收的量与该物质的浓度和液层厚度成正比。
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A＝ECl
应用及注意事项
分析对象：含有共轭体系或芳香环等发色基团，或在一定条件 下加入显色剂或经过处理显色后能对可见光产生吸收的药物。 测定方法： 对照液：同批次的溶剂
药典中常见的定量分析方法概述
药物的定量分析
准确测定药品有效成分或指标性成分的含量 是评价药品质量、判定药物优劣的重要手段
化学分析
仪器分析
重量法
容量法
电化学分析法
分光光度法 色谱法
化学分析法的特点
优点
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仪器设备简单 易于操作、速度较快 • • •
缺点
灵敏度低，药物用量大 不适合含量少的药物 专属性不如仪器分析法（易受到干 扰）
系指用该方法测定的结果与真实值或参考值
接近的程度
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一般用回收率（%）表示。 准确度应在规定的范围内测试。
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1．含量测定方法的准确度
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原料药
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可用已知纯度的对照品或供试品进行测定 或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定 的结果进行比较。
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制剂
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用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。
可向制剂中加入已知量的被测物进行测定 用本法所得结果与已知准确度的另一个方法
2．中间精密度
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考察随机变动因素对精密度的影响
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变动因素为
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不同日期、不同分பைடு நூலகம்人员、不同设备。
3．重现性
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法定标准采用的分析方法，应进行重现性试验。
4．数据要求
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应报告 标准偏差、相对标准偏差和可信限。
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（三）专属性
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专属性 系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能
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存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。
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证明采用的方法适合于相应检测要求。
方法验证理由、过程和结果均应记载在药品
质量标准起草说明或修订说明中。
分析方法验证的内容
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（一）准确度
（二）精密度
重复性、中间精密度 重现性
• （四）检测限 • （五）定量限 • （六）线性
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（三）专属性
• （七）范围
• （八）耐用性
（一）准确度
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准确度
–
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中间精密度
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在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定 结果之间的精密度
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重现性
–
在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度
1．重复性
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9个测定结果进行评价。 3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试 品溶液
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或将相当于100%浓度水平的供试品溶液，用
至少测定6次的结果进行评价。
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一、重量分析法
A挥发法 B萃取法 C沉淀法 取本品约0.3g，精密称定，加水50ml溶解后，加稀盐酸l0ml，摇匀，用乙醚 振摇提取5次，第一次100ml，以后每次各25ml，合并乙醚液，用水洗涤2次， 每次5ml，合并洗液，用乙醚10ml振摇提取，合并前后两次得到的乙醚液，
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置105℃恒重的蒸发皿中，低温蒸去乙醚，并在105℃干燥至恒重，精密称定，
应用
色谱柱：ODS
检测器：常用UV 流动相：有机相不低于5％
系统适用性试验
色谱柱得理论塔板数 n＝5.54（tR／Wh／2）2
分离度 重复性 拖尾因子 R＝2（tR2－tR1）／（W1＋W2） RSD < 2.0% T＝W0.05h／2d1
测定方法
内标法
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色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲 醇－水(70:30)为流动相，检测波长为281nm 。理论板数按炔雌醇 峰计算应不低于1000，炔雌醇峰与内标物质峰的分离度应符合要求。 内标溶液的制备 取醋酸甲地孕酮约20mg，精密称定，置10ml量瓶 中，以无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 测定法 取炔雌醇对照品约40mg，精密称定，置5ml量瓶中，以无 水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液与内标溶液各 2ml ，置10ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，取10μl 注入液相 色谱仪，记录色谱图；另取本品适量，同法测定，按内标法以峰面 积计算，即得。