病理生理学ppt课件 第二十一章 病毒感染的检查与防治
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内常带有潜在病毒，应防止将这些潜在病毒误作接种的病原体。
第一节 病毒感染的检查方法
（一）病毒的分离培养 2. 鸡胚培养
鸡胚对多种病毒敏感，通常选用孵化9～14天的鸡胚，按病毒接 种部位分：
①绒毛尿囊膜接种，用于培养天花病毒、痘苗病毒及人类疱疹病毒等； ②尿囊腔接种，用于培养流感病毒及腮腺炎病毒等； ③羊膜腔接种，用于流感病毒的初次分离培养； ④卵黄囊接种，用于某些嗜神经病毒的培养。
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本的采集与送检
病毒标本的采集与送检原则基本与细菌相似。但还要特别注意下列 原则：
3. 因病毒在室温中易失去活性，故标本应低温保存并尽快送检 ，如需较长时间运送，应将标本置于装有冰块或维持低温的材 料（如固态二氧化碳、低温凝胶袋等）的保温容器内冷藏。病 变组织可置于含抗生素的50%甘油缓冲盐水中低温保存。不能 立即检查的标本，应置于—70℃保存。
（二）红细胞吸附（hemadsorption）：
• 带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后，细胞膜上可 出现血凝素，能与加入的脊椎动物（豚鼠、鸡、候等）红细 胞结合，此现象称为红细胞吸附，常用作含有血凝素的粘病 毒与副粘病毒等的增殖指标。
• 若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的血凝素，阻断红细 胞吸附的形成，称红细胞吸附抑制试验。
第一节 病毒感染的检查方法
1．中和试验(neutralization test)
（一）病毒的分离培养 1. 动物接种
▪ 是最早的病毒分离方法，目前用的不多。 ▪ 可根据病毒的亲嗜性选择敏感动物及其适宜的接种部位，观察动物
的发病情况、进行血清学检测、测定ID50和LD50等。 ▪ 该方法简便，实验结果易观察，对某些尚无敏感的细胞进行培养的
病毒，该方法仍在沿用。 ▪ 但动物对许多人类病毒不敏感，或感染后症状不明显，而且动物体
病原生物学
第二十一章 病毒感染的检查与防治
学习目标
1. 掌握：病毒感染性标本的采集与送检；人工主 动免疫与人工被动免疫的应用。
2. 熟悉：病毒的血清学检查方法。
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本的采集与送检
病毒标本的采集与送检原则基本与细菌相似。但还要特别注意下 列原则：
1. 用于分离病毒或检测病毒及其核酸的标本应采集患者急性期 标本。 2. 对本身带有其他微生物（如咽拭子、粪便）或易受污染的标 本，进行病毒分离培养时，应使用抗生素以抑制标本中的细菌 或真菌等生长繁殖。
（1）细胞病变(cytopathy)：
常见的病变有细胞变圆、胞质颗粒增多、聚集、融合、坏死、 溶解或脱落，形成包涵体等，不同病毒的CPE特征不同，如腺 病毒可引起细胞圆缩、团聚或呈葡萄串状；副粘病毒、巨细胞 病毒、呼吸道合胞病毒等可引起细胞融合，形成多核巨细胞或 称融合细胞等。
第一节 病毒感染的检查方法
第一节 病毒感染的检查方法
1．中和试验(neutralization test)
▪ 病毒在细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试 验。
▪ 常用于检测患者血清中抗体的消长情况，也可用来鉴定未知 病毒或对病毒进行半定量。
▪ 用系列稀释的患者血清与等量的已知病毒悬液（100 TCID50 或100 ID50）混合，在适温下作用一定时间后接种敏感细胞 进行培养，以能保护半数细胞培养孔不产生CPE的血清最高 稀释度作为终点效价。
第一节 病毒感染的检查方法
（二） 病毒的鉴定 1. 病毒形态学鉴定
可通过电子显微镜和免疫电镜检查进行形态观察和大小的测定。
2. 病毒血清学鉴定
即用已知抗体对病毒进行种、型和亚型的血清学鉴定。方法除常 用的免疫标记法外，还有血凝抑制试验等。
3. 病毒分子生物学鉴定
其方法主要包括核酸扩增、核酸杂交、基因芯片、基因测序等分 子生物学技术。
第一节 病毒感染的检查方法
病毒在培养细胞中增殖的指征：
（1）细胞病变(cytopathy)：
▪ 部分病毒在敏感细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为 细胞病变效应(CPE)。
▪ CPE在未固定、未染色时，用低倍显微镜即可观察到，据此 可作病毒增殖的指标。
第一节 病毒感染的检查方法
病毒在培养细胞中增殖的指征：
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本的采集与送检
病毒标本的采集与送检原则基本与细菌相似。但还要特别注意下列 原则：
4. 血清学诊断标本的采集应在发病初期和恢复期各取一份血清 ，以便对比双份血清中抗体效价。通常恢复期血清的抗体效价 比急性期增高4倍以上才有诊断意义。
第一节 病毒感染的检查方法
二、病毒的分离与鉴定
因鸡胚对流感病毒最敏感，故目前除分离流感病毒还继续选用 外，其他病毒的分离基本已被细胞培养所取代。
第一节 病毒感染的检查方法
（一）病毒的分离培养 3. 细胞培养
▪ 细胞培养法为病毒分离鉴定中最常用的方法。 ▪ 可根据细胞生长的方式分为单层细胞培养(monolayer cell
culture)和悬浮细胞培养(suspຫໍສະໝຸດ Baidunded cell culture)。
第一节 病毒感染的检查方法
（三）病毒感染的血清学诊断
应用血清学方法辅助诊断病毒性疾病，其原理是用已知病毒抗 原来检测患者血清中有无相应抗体，须待患者感染后体内产生 抗体时才能检出。 这显然不能进行早期诊断，故对临床帮助不大。但遇下列情况 时仍需做血清学诊断：
①采取标本分离病毒为时已晚； ②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒； ③为证实所分离的病毒的临床意义； ④进行血清流行病学调查等。
第一节 病毒感染的检查方法
（一）病毒的分离培养
3. 细胞培养
从细胞的来源、染色体特征及传代次数等可分为：
①原代细胞，来源于动物、鸡胚或引产人胚组织的细胞（如人胚肾细胞等），对 多种病毒敏感性高，但来源困难； ②二倍体细胞，指细胞在体外分裂50～100代后仍保持2倍染色体数目的单层细 胞。但经多次传代也会出现细胞老化，以致停止分裂。常用的2倍体细胞株有来 自人胚肺的WI-26与WI-38株等，用于人类病毒的分离或病毒疫苗生产； ③传代细胞系，由肿瘤细胞或2倍体细胞突变而来，能在体外持续传代，对病毒 的敏感性稳定，因而被广泛应用。但不能用来源于肿瘤的传代细胞生产疫苗。
第一节 病毒感染的检查方法
（一）病毒的分离培养 2. 鸡胚培养
鸡胚对多种病毒敏感，通常选用孵化9～14天的鸡胚，按病毒接 种部位分：
①绒毛尿囊膜接种，用于培养天花病毒、痘苗病毒及人类疱疹病毒等； ②尿囊腔接种，用于培养流感病毒及腮腺炎病毒等； ③羊膜腔接种，用于流感病毒的初次分离培养； ④卵黄囊接种，用于某些嗜神经病毒的培养。
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本的采集与送检
病毒标本的采集与送检原则基本与细菌相似。但还要特别注意下列 原则：
3. 因病毒在室温中易失去活性，故标本应低温保存并尽快送检 ，如需较长时间运送，应将标本置于装有冰块或维持低温的材 料（如固态二氧化碳、低温凝胶袋等）的保温容器内冷藏。病 变组织可置于含抗生素的50%甘油缓冲盐水中低温保存。不能 立即检查的标本，应置于—70℃保存。
（二）红细胞吸附（hemadsorption）：
• 带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后，细胞膜上可 出现血凝素，能与加入的脊椎动物（豚鼠、鸡、候等）红细 胞结合，此现象称为红细胞吸附，常用作含有血凝素的粘病 毒与副粘病毒等的增殖指标。
• 若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的血凝素，阻断红细 胞吸附的形成，称红细胞吸附抑制试验。
第一节 病毒感染的检查方法
1．中和试验(neutralization test)
（一）病毒的分离培养 1. 动物接种
▪ 是最早的病毒分离方法，目前用的不多。 ▪ 可根据病毒的亲嗜性选择敏感动物及其适宜的接种部位，观察动物
的发病情况、进行血清学检测、测定ID50和LD50等。 ▪ 该方法简便，实验结果易观察，对某些尚无敏感的细胞进行培养的
病毒，该方法仍在沿用。 ▪ 但动物对许多人类病毒不敏感，或感染后症状不明显，而且动物体
病原生物学
第二十一章 病毒感染的检查与防治
学习目标
1. 掌握：病毒感染性标本的采集与送检；人工主 动免疫与人工被动免疫的应用。
2. 熟悉：病毒的血清学检查方法。
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本的采集与送检
病毒标本的采集与送检原则基本与细菌相似。但还要特别注意下 列原则：
1. 用于分离病毒或检测病毒及其核酸的标本应采集患者急性期 标本。 2. 对本身带有其他微生物（如咽拭子、粪便）或易受污染的标 本，进行病毒分离培养时，应使用抗生素以抑制标本中的细菌 或真菌等生长繁殖。
（1）细胞病变(cytopathy)：
常见的病变有细胞变圆、胞质颗粒增多、聚集、融合、坏死、 溶解或脱落，形成包涵体等，不同病毒的CPE特征不同，如腺 病毒可引起细胞圆缩、团聚或呈葡萄串状；副粘病毒、巨细胞 病毒、呼吸道合胞病毒等可引起细胞融合，形成多核巨细胞或 称融合细胞等。
第一节 病毒感染的检查方法
第一节 病毒感染的检查方法
1．中和试验(neutralization test)
▪ 病毒在细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试 验。
▪ 常用于检测患者血清中抗体的消长情况，也可用来鉴定未知 病毒或对病毒进行半定量。
▪ 用系列稀释的患者血清与等量的已知病毒悬液（100 TCID50 或100 ID50）混合，在适温下作用一定时间后接种敏感细胞 进行培养，以能保护半数细胞培养孔不产生CPE的血清最高 稀释度作为终点效价。
第一节 病毒感染的检查方法
（二） 病毒的鉴定 1. 病毒形态学鉴定
可通过电子显微镜和免疫电镜检查进行形态观察和大小的测定。
2. 病毒血清学鉴定
即用已知抗体对病毒进行种、型和亚型的血清学鉴定。方法除常 用的免疫标记法外，还有血凝抑制试验等。
3. 病毒分子生物学鉴定
其方法主要包括核酸扩增、核酸杂交、基因芯片、基因测序等分 子生物学技术。
第一节 病毒感染的检查方法
病毒在培养细胞中增殖的指征：
（1）细胞病变(cytopathy)：
▪ 部分病毒在敏感细胞内增殖时可引起特有的细胞病变，称为 细胞病变效应(CPE)。
▪ CPE在未固定、未染色时，用低倍显微镜即可观察到，据此 可作病毒增殖的指标。
第一节 病毒感染的检查方法
病毒在培养细胞中增殖的指征：
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本的采集与送检
病毒标本的采集与送检原则基本与细菌相似。但还要特别注意下列 原则：
4. 血清学诊断标本的采集应在发病初期和恢复期各取一份血清 ，以便对比双份血清中抗体效价。通常恢复期血清的抗体效价 比急性期增高4倍以上才有诊断意义。
第一节 病毒感染的检查方法
二、病毒的分离与鉴定
因鸡胚对流感病毒最敏感，故目前除分离流感病毒还继续选用 外，其他病毒的分离基本已被细胞培养所取代。
第一节 病毒感染的检查方法
（一）病毒的分离培养 3. 细胞培养
▪ 细胞培养法为病毒分离鉴定中最常用的方法。 ▪ 可根据细胞生长的方式分为单层细胞培养(monolayer cell
culture)和悬浮细胞培养(suspຫໍສະໝຸດ Baidunded cell culture)。
第一节 病毒感染的检查方法
（三）病毒感染的血清学诊断
应用血清学方法辅助诊断病毒性疾病，其原理是用已知病毒抗 原来检测患者血清中有无相应抗体，须待患者感染后体内产生 抗体时才能检出。 这显然不能进行早期诊断，故对临床帮助不大。但遇下列情况 时仍需做血清学诊断：
①采取标本分离病毒为时已晚； ②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒； ③为证实所分离的病毒的临床意义； ④进行血清流行病学调查等。
第一节 病毒感染的检查方法
（一）病毒的分离培养
3. 细胞培养
从细胞的来源、染色体特征及传代次数等可分为：
①原代细胞，来源于动物、鸡胚或引产人胚组织的细胞（如人胚肾细胞等），对 多种病毒敏感性高，但来源困难； ②二倍体细胞，指细胞在体外分裂50～100代后仍保持2倍染色体数目的单层细 胞。但经多次传代也会出现细胞老化，以致停止分裂。常用的2倍体细胞株有来 自人胚肺的WI-26与WI-38株等，用于人类病毒的分离或病毒疫苗生产； ③传代细胞系，由肿瘤细胞或2倍体细胞突变而来，能在体外持续传代，对病毒 的敏感性稳定，因而被广泛应用。但不能用来源于肿瘤的传代细胞生产疫苗。