4——细胞化学染色
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造血检验的基本方法
临床血液学与检验临床血液学与检验
细胞化学染色
细胞化学染色检验
骨髓报告
细胞化学染色
主要内容Contents
铁染色
细胞化学染色
中性粒细胞碱性磷酸酶（ 中性粒细胞碱性磷酸酶（ALP） ）
过氧化物酶（ 过氧化物酶（POX）苏丹黑 ） 糖原（ 糖原（PAS） ） 酯酶染色
酸性磷酸酶 （ACP） ） 细胞化学染色检验
细胞化学染色检验
细胞化学染色检验
NAP 积分法 计算100个成熟中性粒细胞的积分 计算 个成熟中性粒细胞的积分 积分= 数量× 数量× 积分 (+) 数量×1+(++)数量×2+(+++)数量 数量 数量 数量× ×3+(++++)数量×4 数量 百分率=100个细胞中阳性细胞总数即为阳性率 个细胞中阳性细胞总数即为阳性率 百分率 参考值:30～ 参考值 ～130分 分 各单位应建立自己实验室的参考值） （各单位应建立自己实验室的参考值）
细胞化学染色检验
细胞外铁
观察骨髓小粒中的铁 阳性呈弥散性、颗粒状、小珠状或块状蓝色
细胞外铁（ Extracellular iron）
细胞化学染色检验
细胞外铁判定标准
实验结果
显微镜下表现 （-） 无颗粒 （+） 有少数颗粒或偶见铁小珠 （++） 有较多铁颗粒或铁小珠 （+++）有很多铁颗粒、铁小珠及少数铁小块 （++++）有极多铁颗粒、铁小珠，很多铁小块密集 成堆
细胞化学染色检验
二 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 phosphataseNAP） （neutrophil alkaline phosphataseNAP） 偶氮偶联法） （偶氮偶联法） [原理] 磷酸萘酚钠 NAP PH9.6 萘酚+ 重氮盐偶联
（亮红色沉着于胞浆中） [结果] NAP主要存在于成熟中性粒细胞， 其他血细胞均呈阴性反应。
造血检验的基本方法
细胞化学染色方法
酶 脂类 糖原 铁
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
固定
蒸汽固定—甲醛 蒸汽固定 甲醛 液体固定--液体固定 甲醛、乙醇、甲醇、丙酮； 甲醛、乙醇、甲醇、丙酮；
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
有色沉淀反应
偶氮偶联法---偶氮偶联法
NAP、SE、NSE、 NAP、SE、NSE、ACP
操作步骤
亚硫酸溶液冲洗3次 每次 亚硫酸溶液冲洗 次，每次2 min 甲绿复染10～ 甲绿复染 ～20 min 水洗，待干， 水洗，待干，镜检
注意事项 1.雪夫氏试剂变红无效 1.雪夫氏试剂变红无效 2.结果观察要及时 结果观察要及时， 2.结果观察要及时，长期保存会褪色
正常血细胞的染色反应
粒细胞系统:
细胞化学染色检验
1、胞浆中出现灰色到棕黑色沉淀者为阳性。 胞浆中出现灰色到棕黑色沉淀者为阳性。 2、反应强度分为五级： + ++ 淡红 淡灰 灰黑 +++ 浅棕黑 ++++ 深棕黑色
3、百分率：计数100个成熟中性粒细胞，计算 阳性率。 4、积分法：计数100个成熟粒细胞，按反应强度作 出分级，将其百分率乘以级数，然后 相加。
第二节、 第二节、细胞化学染色检验
P74
定义： 血细胞化学染色是以形态学为基
础，根据化学反应原理, 将骨髓片染色, 观察单个细胞内的各种化学成分、代谢 产物等，了解它们的代谢活动和生理功 能。鉴别各种类型血液细胞
细胞化学染色的临床应用
辅助判断白血病的细胞类型 辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断 观察疾病的疗效和预后 发病机制的探讨
H2O2 细胞内 POX 二氨基联苯胺 [O] [O]↑
金黄色颗粒(定位于胞浆内) [结果] 粒系： 强阳性 单核系：弱阳性 淋巴系：阴性
[临床意义] 鉴别急粒和急淋
细胞化学染色检验
新鲜涂片
复方联苯胺溶液 (或二氨基联苯胺） 或
操作步骤
1 min
加入等量1%过氧化氢溶液 加入等量 过氧化氢溶液
6 min 水洗，待干， 水洗，待干， 瑞氏复染15 15～ 瑞氏复染15～20 min 水洗，待干， 水洗，待干，镜检
[原理] 原理] 苏丹黑B（脂溶性染料）
细胞质内含脂结构 棕黑色或深黑色
[结果] 粒细胞系统：阳性 （黑色粗大） 单核细胞系统：阳性 （黑色细小） 其他细胞：阴性
细胞化学染色检验
[临床意义] 临床意义] 大致同POX;可用陈旧骨髓片 可用陈旧骨髓片 大致同
细胞化学染色检验
苏丹黑B染色临床意义 苏丹黑 染色临床意义
注意事项
1.标本要新鲜，否则酶活性会下降 标本要新鲜， 标本要新鲜 2.每次染色最好做阳性对照 每次染色最好做阳性对照
细胞化学染色检验
类白血病反应
慢粒白血病反应
细胞化学染色检验
[参考值] 正常：阳性率：40~89% 积分： 14-113分 [临床意义] 1. 区别CML 、 类白血病反应 ↓ 积分为0 ; ↑ 积分>200分 2. 急粒 积分↓;急淋 积分↑;急单 N或↓ 3. AA时↑ PNH↓ 4. 化脓性感染↑ 病毒性感染时↓
[原理] 联苯胺法
H2O2 细胞内 联苯胺 [O] POX [O]↑ 联苯胺蓝 + 亚硝基氰化钠 暗蓝色颗粒(定位于胞浆内)
[结果]
粒系： 强阳性 单核系：弱阳性 淋巴系：阴性
[临床意义] 鉴别急粒和急淋
细胞化学染色检验
过氧化物酶染色(Peroxidase, POX)） 过氧化物酶染色(Peroxidase, POX)） 二氨基联苯胺法 [原理]
【原理】
过碘酸 双醛基 +
细胞内的糖原氧化 无色品红（雪夫碱） 无色品红（雪夫碱） 紫红色沉淀
细胞化学染色检验
涂片于95％乙醇固定 冲洗） 涂片于 ％乙醇固定10 min （DW冲洗） 冲洗 高碘酸氧化15～ 高碘酸氧化 ～20 min，冲洗，待干 ，冲洗， 雪夫染液染色30～ 雪夫染液染色 ～60 min
过氧化物酶（POX） ）
细胞化学染色检验
红细胞系统—阴性 红细胞系统 阴性
正常骨髓POX染色 正常骨髓POX染色 POX
各型白血病的POX反应
粒系白血病细胞
淋巴细胞白血病细胞 细胞化学染色检验
临床评价
1.辅助鉴别急性白血病的类型 1.辅助鉴别急性白血病的类型 急性粒细胞白血病 AML （+） ALL（ 阳性率<3 <3％ 急性淋巴细胞白血病 ALL（-）(阳性率<3％) AMOL（ 急性单核细胞白血病 AMOL（-/±） POX（+）可排除ALL,但POX（-）并不能排除 ANLL或AMOL。
4Fe3+ + 3K4「Fe(CN)6」 」 亚铁氰化钾 含铁物质 Fe4「Fe(CN)6」3 +12K+ 」 亚铁氰化铁
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
结果判断
细胞外铁： 细胞外铁 存在于骨髓小粒的巨噬细胞中的蓝色颗粒 外铁： 外铁：+~++ (++)约2/3人 约 人 约1/3人(+) 人 细胞内铁： 细胞内铁： 存在于有核红和成熟红细胞内的铁； 存在于有核红和成熟红细胞内的铁； 铁粒幼红细胞阳性率:19%~44% 无环形铁幼细胞及铁粒红细胞
注意事项 （1）标本要新鲜 掌握好H 的浓度， （2）掌握好H2O2的浓度，并要新鲜 在弱酸性环境中显色较为稳定（PH5.5） （3）在弱酸性环境中显色较为稳定（PH5.5） 加试剂要充分混匀， （4）加试剂要充分混匀，使染色均匀
POX结果判断 结果判断
实验结果 细胞表现 （-） 无颗粒 （+） 颗粒粗大聚集，约占胞浆面积1/4 （++）颗粒弥散状分布，有一定空隙，约占胞浆面 积1/2 （+++）颗粒均匀分布于胞浆或聚集，约占胞浆面 积3/4 （++++）颗粒充满整个胞浆，无空隙
细胞外铁（高倍镜） 细胞外铁（高倍镜）
细胞化学染色检验
细胞内铁（ 细胞内铁 Intracellular iron）
幼红细胞核呈鲜红色， 浆呈淡黄红色。 铁粒呈蓝色， 幼红细胞核呈鲜红色 ， 浆呈淡黄红色 。 铁粒呈蓝色 ， 定位于胞质内。 定位于胞质内。 根据铁颗粒的多少、 根据铁颗粒的多少、粗细将铁粒幼红细胞分为 以下几种类型： 以下几种类型：
细胞化学染色检验
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 NAP） （neutrophil alkaline phosphatase NAP） 钙钴法） （钙钴法） [原理] β-甘油磷酸钠 NAP 甘油+磷酸钠 NaHPO4 + Ca（NO3)2+（NH4） SCO↓ 棕黑色（沉着于胞浆中 [结果] NAP主要存在于成熟中性粒细胞， 其他血细胞均呈阴性反应。
临床评价
2.辅助鉴别急性早幼粒细胞白血病（ 2.辅助鉴别急性早幼粒细胞白血病（APL) 辅助鉴别急性早幼粒细胞白血病 急性单核细胞白血病（AMOL)、 、急性单核细胞白血病（AMOL)、恶性 组织细胞病（ 组织细胞病（MH) APL 呈强阳性反应 AMOL 呈弱阳性反应 MH 呈阴性反应
苏丹黑B 四、 苏丹黑B染色 (Sudan black B,SBB)
基本与POX染色相同，但其灵敏度及特异性 有所不同。 SB染色的特异性低于POX，POX阳性主要见 于髓系细胞。 SB染色的灵敏度高于POX，如急性粒细胞白 血病POX染色阴性的患者，SB可见呈阳性。
雪夫反应） 五、糖原染色（过碘酸-雪夫反应） 糖原染色（过碘酸 雪夫反应 (periodic acid –Schiff,PAS)
Type Type Type Type
I: 幼红细胞内含铁粒1～2粒 幼红细胞内含铁粒1 II: 幼红细胞内含铁粒3 II: 幼红细胞内含铁粒3～5粒 III:幼红细胞内含铁粒6 10粒 III:幼红细胞内含铁粒6～10粒 IV: 幼红细胞内含铁粒﹥10粒 IV: 幼红细胞内含铁粒﹥10粒
铁粒红细胞（ Siderocyte） 铁粒红细胞 （ Siderocyte ） : 成熟红细 胞中出现铁颗粒称为铁粒红细胞。 胞中出现铁颗粒称为铁粒红细胞。 铁粒幼红细胞（Sideroblast）: 胞质中 铁粒幼红细胞（Sideroblast） 出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。 出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。 环形铁粒幼红细胞（ 环形铁粒幼红细胞（Ringed sideroblast）： ）：幼红细胞胞质内蓝色 sideroblast）：幼红细胞胞质内蓝色 颗粒多于6 围绕核周1/2 1/2以上的铁粒 颗粒多于6个，围绕核周1/2以上的铁粒 幼红细胞。 幼红细胞。
分化差原粒呈阴性 早幼粒以下均呈阳性，随细胞的成熟阳性程 度逐渐增强 嗜酸粒细胞颗粒不着色,颗粒间胞质呈阳性 嗜碱性粒阳性,呈粗颗粒或块状
正常血细胞的染色反应
红系:有核细胞及成熟红细胞均呈阴性 淋巴系:大多数呈阴性,少数呈阳性,粗颗粒 巨核系及血小板:均为阳性,块状或颗粒状 其它:浆细胞少数可呈阳性,巨噬细胞呈细颗粒 阳性
细胞内铁
阳性 阴性
细胞化学染色检验
Βιβλιοθήκη Baidu 细胞内铁
（环状铁粒幼红细胞）
幼红细胞胞质内蓝色颗粒多于6 幼红细胞胞质内蓝色颗粒多于6个，围绕核周1/2以上的铁粒幼红细胞 围绕核周1/2以上的铁粒幼红细胞 1/2
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
临床评价
1.鉴别 IDA 与 非缺铁性贫血 2.铁粒幼细胞性贫血 3.骨髓增生异常综合症 4.非缺铁性贫血
联苯胺法-----POX 联苯胺法 普鲁士兰反应---Fe 普鲁士兰反应 雪夫反应---PAS 雪夫反应 金属沉淀法---NAP-钙钴法 金属沉淀法 钙钴法
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
复染
使各种细胞有明显的对比度 中性红 甲基绿 核固红 亮绿
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
一、铁染色
原理： 原理
正常血细胞的染色反应
单核系 原始单核:阴性 幼单核:(+) 成熟单核:(+)~(++) 细颗粒弥散阳性,胞浆边缘粗颗粒
中性粒细胞PAS染色分级标准 染色分级标准 中性粒细胞
实验结果 细胞表现 （-） 胞质无色 （+）胞质呈淡红色，薄而透明，颗粒不明显，边缘有极少 深红色颗粒 （++）胞质呈红色，厚而不透明，有少量颗粒或边缘有较 多深红色颗粒 （+++）胞质呈深红色，颗粒多或呈片状，颗粒较紧密，颗 粒间尚有空隙 （++++）胞质呈深紫红色，颗粒紧密，颗粒无空隙
细胞化学染色检验
慢性粒细胞性白血病
Chronic myeloid leukemia
细胞化学染色检验
慢粒
阴性
细胞化学染色检验
急性淋巴细胞白血病
急性化脓性感染NAP染色
慢性粒细胞性白血病
Chronic myeloid leukemia
ALP
阴性
三、 过氧化物酶染色 POX)） (Peroxidase, POX)）
临床血液学与检验临床血液学与检验
细胞化学染色
细胞化学染色检验
骨髓报告
细胞化学染色
主要内容Contents
铁染色
细胞化学染色
中性粒细胞碱性磷酸酶（ 中性粒细胞碱性磷酸酶（ALP） ）
过氧化物酶（ 过氧化物酶（POX）苏丹黑 ） 糖原（ 糖原（PAS） ） 酯酶染色
酸性磷酸酶 （ACP） ） 细胞化学染色检验
细胞化学染色检验
细胞化学染色检验
NAP 积分法 计算100个成熟中性粒细胞的积分 计算 个成熟中性粒细胞的积分 积分= 数量× 数量× 积分 (+) 数量×1+(++)数量×2+(+++)数量 数量 数量 数量× ×3+(++++)数量×4 数量 百分率=100个细胞中阳性细胞总数即为阳性率 个细胞中阳性细胞总数即为阳性率 百分率 参考值:30～ 参考值 ～130分 分 各单位应建立自己实验室的参考值） （各单位应建立自己实验室的参考值）
细胞化学染色检验
细胞外铁
观察骨髓小粒中的铁 阳性呈弥散性、颗粒状、小珠状或块状蓝色
细胞外铁（ Extracellular iron）
细胞化学染色检验
细胞外铁判定标准
实验结果
显微镜下表现 （-） 无颗粒 （+） 有少数颗粒或偶见铁小珠 （++） 有较多铁颗粒或铁小珠 （+++）有很多铁颗粒、铁小珠及少数铁小块 （++++）有极多铁颗粒、铁小珠，很多铁小块密集 成堆
细胞化学染色检验
二 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 phosphataseNAP） （neutrophil alkaline phosphataseNAP） 偶氮偶联法） （偶氮偶联法） [原理] 磷酸萘酚钠 NAP PH9.6 萘酚+ 重氮盐偶联
（亮红色沉着于胞浆中） [结果] NAP主要存在于成熟中性粒细胞， 其他血细胞均呈阴性反应。
造血检验的基本方法
细胞化学染色方法
酶 脂类 糖原 铁
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
固定
蒸汽固定—甲醛 蒸汽固定 甲醛 液体固定--液体固定 甲醛、乙醇、甲醇、丙酮； 甲醛、乙醇、甲醇、丙酮；
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
有色沉淀反应
偶氮偶联法---偶氮偶联法
NAP、SE、NSE、 NAP、SE、NSE、ACP
操作步骤
亚硫酸溶液冲洗3次 每次 亚硫酸溶液冲洗 次，每次2 min 甲绿复染10～ 甲绿复染 ～20 min 水洗，待干， 水洗，待干，镜检
注意事项 1.雪夫氏试剂变红无效 1.雪夫氏试剂变红无效 2.结果观察要及时 结果观察要及时， 2.结果观察要及时，长期保存会褪色
正常血细胞的染色反应
粒细胞系统:
细胞化学染色检验
1、胞浆中出现灰色到棕黑色沉淀者为阳性。 胞浆中出现灰色到棕黑色沉淀者为阳性。 2、反应强度分为五级： + ++ 淡红 淡灰 灰黑 +++ 浅棕黑 ++++ 深棕黑色
3、百分率：计数100个成熟中性粒细胞，计算 阳性率。 4、积分法：计数100个成熟粒细胞，按反应强度作 出分级，将其百分率乘以级数，然后 相加。
第二节、 第二节、细胞化学染色检验
P74
定义： 血细胞化学染色是以形态学为基
础，根据化学反应原理, 将骨髓片染色, 观察单个细胞内的各种化学成分、代谢 产物等，了解它们的代谢活动和生理功 能。鉴别各种类型血液细胞
细胞化学染色的临床应用
辅助判断白血病的细胞类型 辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断 观察疾病的疗效和预后 发病机制的探讨
H2O2 细胞内 POX 二氨基联苯胺 [O] [O]↑
金黄色颗粒(定位于胞浆内) [结果] 粒系： 强阳性 单核系：弱阳性 淋巴系：阴性
[临床意义] 鉴别急粒和急淋
细胞化学染色检验
新鲜涂片
复方联苯胺溶液 (或二氨基联苯胺） 或
操作步骤
1 min
加入等量1%过氧化氢溶液 加入等量 过氧化氢溶液
6 min 水洗，待干， 水洗，待干， 瑞氏复染15 15～ 瑞氏复染15～20 min 水洗，待干， 水洗，待干，镜检
[原理] 原理] 苏丹黑B（脂溶性染料）
细胞质内含脂结构 棕黑色或深黑色
[结果] 粒细胞系统：阳性 （黑色粗大） 单核细胞系统：阳性 （黑色细小） 其他细胞：阴性
细胞化学染色检验
[临床意义] 临床意义] 大致同POX;可用陈旧骨髓片 可用陈旧骨髓片 大致同
细胞化学染色检验
苏丹黑B染色临床意义 苏丹黑 染色临床意义
注意事项
1.标本要新鲜，否则酶活性会下降 标本要新鲜， 标本要新鲜 2.每次染色最好做阳性对照 每次染色最好做阳性对照
细胞化学染色检验
类白血病反应
慢粒白血病反应
细胞化学染色检验
[参考值] 正常：阳性率：40~89% 积分： 14-113分 [临床意义] 1. 区别CML 、 类白血病反应 ↓ 积分为0 ; ↑ 积分>200分 2. 急粒 积分↓;急淋 积分↑;急单 N或↓ 3. AA时↑ PNH↓ 4. 化脓性感染↑ 病毒性感染时↓
[原理] 联苯胺法
H2O2 细胞内 联苯胺 [O] POX [O]↑ 联苯胺蓝 + 亚硝基氰化钠 暗蓝色颗粒(定位于胞浆内)
[结果]
粒系： 强阳性 单核系：弱阳性 淋巴系：阴性
[临床意义] 鉴别急粒和急淋
细胞化学染色检验
过氧化物酶染色(Peroxidase, POX)） 过氧化物酶染色(Peroxidase, POX)） 二氨基联苯胺法 [原理]
【原理】
过碘酸 双醛基 +
细胞内的糖原氧化 无色品红（雪夫碱） 无色品红（雪夫碱） 紫红色沉淀
细胞化学染色检验
涂片于95％乙醇固定 冲洗） 涂片于 ％乙醇固定10 min （DW冲洗） 冲洗 高碘酸氧化15～ 高碘酸氧化 ～20 min，冲洗，待干 ，冲洗， 雪夫染液染色30～ 雪夫染液染色 ～60 min
过氧化物酶（POX） ）
细胞化学染色检验
红细胞系统—阴性 红细胞系统 阴性
正常骨髓POX染色 正常骨髓POX染色 POX
各型白血病的POX反应
粒系白血病细胞
淋巴细胞白血病细胞 细胞化学染色检验
临床评价
1.辅助鉴别急性白血病的类型 1.辅助鉴别急性白血病的类型 急性粒细胞白血病 AML （+） ALL（ 阳性率<3 <3％ 急性淋巴细胞白血病 ALL（-）(阳性率<3％) AMOL（ 急性单核细胞白血病 AMOL（-/±） POX（+）可排除ALL,但POX（-）并不能排除 ANLL或AMOL。
4Fe3+ + 3K4「Fe(CN)6」 」 亚铁氰化钾 含铁物质 Fe4「Fe(CN)6」3 +12K+ 」 亚铁氰化铁
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
结果判断
细胞外铁： 细胞外铁 存在于骨髓小粒的巨噬细胞中的蓝色颗粒 外铁： 外铁：+~++ (++)约2/3人 约 人 约1/3人(+) 人 细胞内铁： 细胞内铁： 存在于有核红和成熟红细胞内的铁； 存在于有核红和成熟红细胞内的铁； 铁粒幼红细胞阳性率:19%~44% 无环形铁幼细胞及铁粒红细胞
注意事项 （1）标本要新鲜 掌握好H 的浓度， （2）掌握好H2O2的浓度，并要新鲜 在弱酸性环境中显色较为稳定（PH5.5） （3）在弱酸性环境中显色较为稳定（PH5.5） 加试剂要充分混匀， （4）加试剂要充分混匀，使染色均匀
POX结果判断 结果判断
实验结果 细胞表现 （-） 无颗粒 （+） 颗粒粗大聚集，约占胞浆面积1/4 （++）颗粒弥散状分布，有一定空隙，约占胞浆面 积1/2 （+++）颗粒均匀分布于胞浆或聚集，约占胞浆面 积3/4 （++++）颗粒充满整个胞浆，无空隙
细胞外铁（高倍镜） 细胞外铁（高倍镜）
细胞化学染色检验
细胞内铁（ 细胞内铁 Intracellular iron）
幼红细胞核呈鲜红色， 浆呈淡黄红色。 铁粒呈蓝色， 幼红细胞核呈鲜红色 ， 浆呈淡黄红色 。 铁粒呈蓝色 ， 定位于胞质内。 定位于胞质内。 根据铁颗粒的多少、 根据铁颗粒的多少、粗细将铁粒幼红细胞分为 以下几种类型： 以下几种类型：
细胞化学染色检验
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 NAP） （neutrophil alkaline phosphatase NAP） 钙钴法） （钙钴法） [原理] β-甘油磷酸钠 NAP 甘油+磷酸钠 NaHPO4 + Ca（NO3)2+（NH4） SCO↓ 棕黑色（沉着于胞浆中 [结果] NAP主要存在于成熟中性粒细胞， 其他血细胞均呈阴性反应。
临床评价
2.辅助鉴别急性早幼粒细胞白血病（ 2.辅助鉴别急性早幼粒细胞白血病（APL) 辅助鉴别急性早幼粒细胞白血病 急性单核细胞白血病（AMOL)、 、急性单核细胞白血病（AMOL)、恶性 组织细胞病（ 组织细胞病（MH) APL 呈强阳性反应 AMOL 呈弱阳性反应 MH 呈阴性反应
苏丹黑B 四、 苏丹黑B染色 (Sudan black B,SBB)
基本与POX染色相同，但其灵敏度及特异性 有所不同。 SB染色的特异性低于POX，POX阳性主要见 于髓系细胞。 SB染色的灵敏度高于POX，如急性粒细胞白 血病POX染色阴性的患者，SB可见呈阳性。
雪夫反应） 五、糖原染色（过碘酸-雪夫反应） 糖原染色（过碘酸 雪夫反应 (periodic acid –Schiff,PAS)
Type Type Type Type
I: 幼红细胞内含铁粒1～2粒 幼红细胞内含铁粒1 II: 幼红细胞内含铁粒3 II: 幼红细胞内含铁粒3～5粒 III:幼红细胞内含铁粒6 10粒 III:幼红细胞内含铁粒6～10粒 IV: 幼红细胞内含铁粒﹥10粒 IV: 幼红细胞内含铁粒﹥10粒
铁粒红细胞（ Siderocyte） 铁粒红细胞 （ Siderocyte ） : 成熟红细 胞中出现铁颗粒称为铁粒红细胞。 胞中出现铁颗粒称为铁粒红细胞。 铁粒幼红细胞（Sideroblast）: 胞质中 铁粒幼红细胞（Sideroblast） 出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。 出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。 环形铁粒幼红细胞（ 环形铁粒幼红细胞（Ringed sideroblast）： ）：幼红细胞胞质内蓝色 sideroblast）：幼红细胞胞质内蓝色 颗粒多于6 围绕核周1/2 1/2以上的铁粒 颗粒多于6个，围绕核周1/2以上的铁粒 幼红细胞。 幼红细胞。
分化差原粒呈阴性 早幼粒以下均呈阳性，随细胞的成熟阳性程 度逐渐增强 嗜酸粒细胞颗粒不着色,颗粒间胞质呈阳性 嗜碱性粒阳性,呈粗颗粒或块状
正常血细胞的染色反应
红系:有核细胞及成熟红细胞均呈阴性 淋巴系:大多数呈阴性,少数呈阳性,粗颗粒 巨核系及血小板:均为阳性,块状或颗粒状 其它:浆细胞少数可呈阳性,巨噬细胞呈细颗粒 阳性
细胞内铁
阳性 阴性
细胞化学染色检验
Βιβλιοθήκη Baidu 细胞内铁
（环状铁粒幼红细胞）
幼红细胞胞质内蓝色颗粒多于6 幼红细胞胞质内蓝色颗粒多于6个，围绕核周1/2以上的铁粒幼红细胞 围绕核周1/2以上的铁粒幼红细胞 1/2
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
临床评价
1.鉴别 IDA 与 非缺铁性贫血 2.铁粒幼细胞性贫血 3.骨髓增生异常综合症 4.非缺铁性贫血
联苯胺法-----POX 联苯胺法 普鲁士兰反应---Fe 普鲁士兰反应 雪夫反应---PAS 雪夫反应 金属沉淀法---NAP-钙钴法 金属沉淀法 钙钴法
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
复染
使各种细胞有明显的对比度 中性红 甲基绿 核固红 亮绿
细胞化学染色检验
造血检验的基本方法
一、铁染色
原理： 原理
正常血细胞的染色反应
单核系 原始单核:阴性 幼单核:(+) 成熟单核:(+)~(++) 细颗粒弥散阳性,胞浆边缘粗颗粒
中性粒细胞PAS染色分级标准 染色分级标准 中性粒细胞
实验结果 细胞表现 （-） 胞质无色 （+）胞质呈淡红色，薄而透明，颗粒不明显，边缘有极少 深红色颗粒 （++）胞质呈红色，厚而不透明，有少量颗粒或边缘有较 多深红色颗粒 （+++）胞质呈深红色，颗粒多或呈片状，颗粒较紧密，颗 粒间尚有空隙 （++++）胞质呈深紫红色，颗粒紧密，颗粒无空隙
细胞化学染色检验
慢性粒细胞性白血病
Chronic myeloid leukemia
细胞化学染色检验
慢粒
阴性
细胞化学染色检验
急性淋巴细胞白血病
急性化脓性感染NAP染色
慢性粒细胞性白血病
Chronic myeloid leukemia
ALP
阴性
三、 过氧化物酶染色 POX)） (Peroxidase, POX)）