HPLC_ELSD测定黄芪药材及其炮制品中黄芪甲苷的含量

HPL C-EL SD测定黄芪药材及其炮制品中

黄芪甲苷的含量

毛文彬　相　莉　冯　伟

【摘要】　目的　建立HPL C-EL SD方法测定黄芪药材及其炮制品中黄芪甲苷的含量,论证黄芪炮制方法对炮制品中黄芪甲苷含量的影响。方法　采用Kromasil-C(18)柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(25∶75);体积流量:1.0ml/min;漂移管温度105℃、空气流量2.5L/min。结果　黄芪甲苷在2.39～14.34μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9993,样品平均回收率为105.8%, RSD为2.34%。结论　本方法简便、准确、专属性强,可用于黄芪药材及其制剂的质量控制,炮制品中黄芪甲苷含量明显低于黄芪药材,以黄芪甲苷为主要治疗成分时,使用生品为宜。

【关键词】　HPL C-EL SD　黄芪　黄芪甲苷

黄芪为豆科植物蒙古黃芪[Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao]或夹膜黃芪[Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.]的干燥根。炙黄芪为黄芪的炮制加工品。我们在采用《中国药典》2005年版黄芪含量测定方法[1]测定时,发现回收率较低,不符合分析方法验证要求,出峰时间较晚,影响实验进度及成本。故本文对《中国药典》2005年版黄芪含量测定方法进行了改进,提高了回收率,缩短了分析时间,并对其炮制品进行含量测定,评价其质量,为黄芪药材炮制品规范化加工提供重要参考。

1　仪器与试药

1.1　药品与试剂　Waters Alliance H T型高效液相色谱仪, Alltech EL SD2000型蒸发光散射检测器;黄芪对照药材、黄芪甲苷对照品均购自中国药品生物制品检定所;硅胶G为青岛海洋化工厂生产;所用试剂均为分析纯。

1.2　药材　黄芪生品和蜜炙黄芪均购自陕西省药材公司,西安市万寿路药材市场。

2　方法与结果

2.1　色谱条件　Kromasil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-水(25∶75);体积流量:1.0ml/min;EL SD检测参数:漂移管温度105℃、空气流量2.5l/min;外标两点法对数方程计算;理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。样品中黄芪甲苷的保留时间为32.10min,黄芪药材溶液在此色谱条件下,黄芪甲苷对照品(主峰)出现此峰,阴性对照品溶液色谱图中未出现该色谱峰,其他成分对黄芪甲苷峰无干扰,

作者单位:西安交通大学医学院第二附属医院药剂科,陕西西安

邮 编　710004 收稿日期　2008-06-20主峰与各物质峰间有较好的分离度。

2.2　对照品溶液的制备　精密称取黄芪甲苷对照品9.56 mg,加甲醇制成每1ml含黄芪甲苷0.478mg的溶液。

2.3　供试品溶液的制备　取样品中粉约4g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇40ml,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流4小时,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水10ml,微热使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取4次,每次40ml,合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次40ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

2.4　线性关系的考察　精密吸取对照品溶液5、10、20、25、30μl,在上述条件下测定峰面积,以进样量对数值(C)对峰面积对数值(A)作标准曲线,计算回归方程为C=0.7012A-

3. 2405(r=0.9993),表明黄芪甲苷在2.39～1

4.34μg范围内线性关系良好。

2.5　精密度试验　精密吸取黄芪甲苷对照品溶液10μl,重复进样5次,求得RSD为0.61%。

2.6　重现性试验　取同一黄芪样品5份,按样品溶液制备项下操作测定,结果该批饮片黄芪甲苷含量为0.075%,RSD为0.85%。

2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液分别在0、2、4、8、24和36h测定,求得RSD为0.96%,表明稳定性良好。

2.8　加样回收率试验　取已知含量的样品5份,分别精密加入一定量的黄芪甲苷对照品,测定含量,平均回收率为105. 8%,RSD为2.34%。

2.9　样品含量的测定　精密吸取供试品溶液25μl,注入液相色谱仪,测定结果见表1。

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齐齐哈尔医学院学报2008年第29卷第15期