缓解体力疲劳功能评价方法

缓解体力疲劳功能

试验项目、试验原则及结果判定

1. 实验项目

1.1 动物实验

1.1.1动物体重

1.1.2 负重游泳实验

1.1.3 力竭实验

1.2人体试食试验

1.2.1 临床症状与体征

1.2.2 跑台试验

2 试验原则

2.1 动物实验所列指标均为必做项目，动物负重游泳和力竭实验前，对实验动物进行运动能力筛选。

2.2 实验前必须对同批受试样品进行违禁药物的检测。

2.3 运动实验与生化指标检测相结合。

2.4 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。2.5 停止给予受试物一天后进行效果观察。

3 结果判定

3.1 动物实验：

负重游泳实验结果阳性，力竭实验结果为阴性（特指无显著不利影响），可判定该受试样品缓解体力疲劳功能的动物实验结果为阳性。

3.2 人体试食试验：

（1）试食前后，受试组自身对照，肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶无不利的显著性改变；

（2）跑台试验：试食组自身对照，试食后运动时间与试食前相比显著性增加，首次试食后运动时间与试食前相比无显著性差异。

满足（1）和（2）可判定该受试样品具有缓解体力疲劳的功能。

缓解体力疲劳功能评价方法

1. 动物实验

1.1 原理

在一定时间内给予一定量的受试样品，通过持续服用，调整特定人群机体状态，使其拥有更好的调节功能，该功能包括应对潜在需求、使机体处于良好状态，具有更长时间作业能力或在相同作业时间内不出现更重的疲劳表现。

1.2 负重游泳实验

1.2.1 仪器与器材

游泳箱（大小约80cm×50cm×60cm），电子天平、铅皮。

1.2.2 实验方法

1.2.2.1 实验动物推荐使用雄性小鼠，6周龄，体重20-24g。

1.2.2.2 剂量分组及受试样品给予时间

实验设三个剂量组和一个阴性对照组，一个空白对照组，一个单次中剂量受试组。其中以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。阴性对照组灌胃给予安慰剂。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。

1.2.2.3 实验步骤

末次给受试样品24小时后，将尾根部负荷6%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于40cm，水温30℃±2.0℃，记录小鼠自游泳开始至力竭时间，即小鼠负重游泳时间。力竭判断标准为：小鼠沉入水中超过10秒，且放在平面上无法完成翻正反射。

1.2.3 数据处理及结果判定

游泳时间为计量资料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐

性检验，方差齐，计算F值，F值

（1）受试样品组负重游泳时间明显长于阴性对照组和空白对照组，且差异有显著性；

（2）单次中剂量组与阴性对照组相比，负重游泳时间无显著差异。

同时满足（1）和（2）时，可判定该实验结果阳性。

1.3 力竭实验

1.3.1仪器与器材

全自动生化仪，游泳箱，电子天平、铅皮。

1.3.2 实验方法

1.3.

2.1 实验动物

雄性SD大鼠，体重160-200g。

1.3.

2.2 剂量设计和分组大鼠以人体推荐量的5倍为基本剂量。其余同1.2.2.2。

1.3.

2.3 实验步骤

末次给受试样品24小时后，采用尾部负重3%体重铅皮的大鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于50cm，水温31℃±1.0℃，当大鼠游至连续3次没入水底，每次超过10秒，视为力竭。记录大鼠自游泳开始至力竭时间，大鼠腹主动脉采血全血，置4℃冰箱约3h，血凝固后2000rpm离心15min，取血清备用，测定尿素氮、肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性。

1.3.3 数据处理及结果判定

血液生化数据为计量资料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值

和检验进行统计。

（1）受试样品组与阴性对照组和空白对照组相比，血清尿素氮、肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性应无显著性差异；

（2）单次中剂量组与阴性对照组相比，血清尿素氮、肌酐、转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性应无显著性差异；

同时满足（1）和（2）时，可判定该实验结果阴性（特指无显著不利影响）。

1.4 注意事项

1.4.1 每一游泳箱一次放入动物不宜太多，每只小鼠占用的水面积大多在300平方厘米以上，每平方米水面同时不超过6只大鼠游泳，否则互相挤靠，影响实验结果。

1.4.2 水温对小鼠的游泳时间有明显的影响，因此要求各组水温控制一致，每一批实验动物下水之前都应测量水温，水温以30-31℃为宜，如果过低可能引起实验动物痉挛，影响实验结果。

1.4.3 铅皮缠绕松紧应适宜。

1.4.4 观察者应在整个实验过程中使每只实验动物四肢保持运动。如果实验动物漂浮在水面四肢不动，可用木棒在其附近搅动。同时适时清除水中杂质，以避免影响实验结果。

1.4.5 不同批的实验动物因饲养环境、季节等原因的变化体质上会出现差异。因此受试样品组和对照组应采用同一批动物同时进行实验。

1.4.6负重游泳实验、力竭实验前对实验动物进行能力筛选。

1.5 结果判定

负重游泳实验结果阳性，力竭实验结果为阴性，可判定该受试样品缓解体力疲劳功能的动物实验结果为阳性。

2 人体试食试验