MTT法分析5_氟尿嘧啶缓释微球的体外细胞毒作用

M T T 法分析5-氟尿嘧啶缓释微球的体外细胞毒作用

朱世滨,梁怀祝

(大连市中心医院普外科,辽宁大连116000)

摘要:目的:探讨两种不同制剂5-氟尿嘧啶在体外对胃癌细胞的影响,为临床腹腔灌洗防治胃癌腹腔种植奠定实验基

础。方法:人胃癌细胞株BCG 820常规培养于含10%小牛血清的DM E M ,M T T 法来观察不同处理因素(DM E M 对照组、5-Fu 组和5-Fu 缓释微球组)随时间对肿瘤细胞生长的影响。结果:BCG 820胃癌细胞在5-Fu 组和5-Fu 缓释微球组培养均出现细胞的大体形态改变,第6天BCG 820细胞杀伤率,5-Fu 为91.6%;5-Fu 缓释微球组为97.1%。结论:不同时间不同处理因素肿瘤细胞细胞杀伤率,可见5-Fu 缓释微球组体外对胃癌细胞杀伤作用随时间延长优于5-Fu 组。

关键词胃癌细胞;5-Fu 缓释微球;M T T

中图分类号:R 735.2;R 979.1+2　文献标识码:A

　文章编号:1008-0104(2006)02-0059-01 胃癌术后的死亡原因

50%～70%系由于腹膜转移或复发。针对腹膜转移或复发的腹腔内区域性化疗可大大提高化疗药物对肿瘤细胞直接的细胞毒性作用,并能明显降低全身用药所致的造血、消化、神经等系统的毒副反应

[1,2]。5-Fu 是一种广谱的抗肿瘤药物,已广泛应用于腹腔化疗,为了克服其半衰期短,代谢快,作用时间短的缺点,我们与沈阳兴齐制药厂合作生产5-Fu 缓释微球,本实验应用M T T 法对该药物进行体外细胞毒研究。1　材料与方法

1.1　实验材料

人胃癌细胞株BCG 820细胞株由大连市中心医院中心实验室提供;含10%小牛血清的DM E M ;胰蛋白酶;M T T ;5-Fu ;5-Fu 缓释微球由沈阳兴齐制药厂提供;相差倒置显微镜;自动分光光度仪;超净工作台;CO 2孵育培养箱。1.2　培养条件

人胃癌细胞株BCG 820,培养液含10%小牛血清的DM E M ,用25%的胰酶和0.02ED TA 混合液消化细胞的对数生长期37℃、5%CO 2培养孵育细胞数。1.3　实验方法

取对数生长期人胃癌细胞株BCG 820细胞,用含10%小牛血清的DM E M 培养液制成1×105 m l 悬液,加到24孔平底培养板,每孔1m l ,置5%CO 237℃培养24h ,细胞形成单层,吸去营养液后,加入不同组药物,再次置5%CO 237℃培养24,48,72,96,120,144h ,吸去营养液,每孔加入5m g m l M T T 0.1m l ,振荡摇匀后置5%CO 237℃培养4h ,吸去上清后,加入10%DM SO 二甲亚砜600u l ,10～20m in 结晶完全溶解后,于波长960nm 测OD 值,并计算细胞存活率、细胞杀伤率。

细胞存活率=实验组OD 值 对照组OD 值×100%细胞杀伤率=(对照组OD 值-实验组OD 值) 对照组OD 值×100%1.4　检测

实验分为5-Fu 组(350umo l L )、5-Fu 缓释微球组(350umo l L )和对照组采用Toch ino -R 450自动分光光度仪检测,每组12孔样本,重复对数据进行统计学分析。2　结果

BCG 820胃癌细胞经过处理,5-Fu 组和5-Fu 缓释微球组均出现细胞的大体形态(包括细胞间的连接断裂、细胞间隙增大,核溶解、核碎裂、细胞膜碎裂和染色质释放)改变,见图1～4。5-Fu 缓释微球组体外对胃癌细胞杀伤作用随时间延长优于5-Fu 组。见图5,6。

图1　对照组肿瘤细胞生长良好(D ay 3,200X )

图2　5-Fu 组肿瘤细胞见形态变异,连接消失,

大量细胞死亡(D ay 3,200X )

图3　5-Fu 缓释微球组肿瘤细胞见形态变异,连接消失,

细胞死亡多于5-Fu 组(D ay 3,200X )

(下转第60页)

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95・H E I LON GJ I AN GM ED I C I N E AND PHA RM A CY A p r .2006,V o l .29N o .2

白血病细胞双侧乳腺浸润1例

李永海,周丽艳,张文陆

(佳木斯大学附属第一医院检验科,黑龙江佳木斯154003)

关键词:白血病;乳腺的细胞浸润

中图分类号:R 733.7　文献标识码:B 文章编号:1008-0104(2006)02-0060-01 患者,女,32岁,妊娠34周。以面色苍白,四肢乏力,双侧乳腺肿胀,于2004年4月30日来我院门诊就诊。查体:双侧乳腺整体肿大、质地坚硬、表面凸凹不平、表浅静脉怒张。表浅淋巴结不大,由于妊娠的原因肝、脾不能清楚触及。血象:H b 79g L 、RBC 2.29×1012 L 、PL T 96×109

L 、W BC 110×

109

L 、

分类原始细胞占86%。骨髓象:有核细胞增生极度活跃、全片增生以原始单核细胞为主,占87.5%。非特异性酯酶

(Α-NA E )染色强阳性;氟化钠抑制试验,抑制率40%。粒、

红两系明显受抑制,全片巨核细胞41个,多为颗粒型,血小

板可见。诊断为急性单核细胞性白血病(M 5)。乳腺肿物针吸

细胞学检查:镜下为散在分布的白血病细胞。诊断为白血病

细胞双侧乳腺浸润。确诊后病人未经治疗,返回家乡。讨论:急性单核细胞性白血病是一种比较常见的白血病,可见白血病浸润多种组织的病例,如肝、脾、淋巴结,骨组织、神经组织浸润等。本例患者在妊娠与白血病并存期出现

乳腺白血病细胞浸润,形成的肿物坚硬、。如此之多的白血病细胞集中浸润双侧乳腺,这是非常罕见的现象,可能与妊娠期激素分泌的变化以及受到激素作用的乳腺腺细胞对白血病细胞有趋化作用有关,其发生机理有待于进一步研究。(收稿日期:2006-02-04)作者简介:李永海(1970～)男,黑龙江佳木斯人,主管技师。

(

上接第59页)

图4　5-Fu 缓释微球周围肿瘤细胞大量死亡(D ay 3,200X )

图5　不同时间不同处理因素肿瘤细胞生长曲线,可见5-Fu 缓释微球组体外对胃癌细胞杀伤作用随时间延长优于5-Fu 组。

图6　不同时间不同处理因素肿瘤细胞细胞杀伤率,可见5-Fu 缓释I

微球组体外对胃癌细胞杀伤作用随时间延长优于5-Fu 组。

3　讨论

四唑盐比色实验(M T T 法)是M o s m an 于1983年率先建立的。其原理是活细胞线粒体中的琥珀酸能使外源性的M T T 还原为难溶的蓝紫色的结晶物(Fo rm azan )并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。DM SO 能溶解细胞中的紫色结晶物,在490nm 检测其光吸收值,可间接反映活细胞数量。M T T 法是目前检测细胞增殖与活性的常用方法,临床多用于肿瘤细胞的药敏实验[3],观察细胞因子对细胞增殖的影响等。M T T 法的特点是快速,简便,可在短期内进行大量标本分析,多用于大量抗肿瘤药物对多种建株的细胞系的筛选。本实验已建立了稳定完善的M T T 技术,用于检测抗癌药物对体外细胞的细胞毒作用,方法稳定,数据可靠。5-Fu 是一种广谱的抗肿瘤药物,5-Fu 进入体内后在肿瘤细胞内转变为5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸(FdUM P ),后者抑制脱氧胸苷酸合成酶(T S ),阻止脱氧尿苷酸(dUM P )甲基化转变为脱氧胸苷酸(dTM P ),影响生物合成,抑制肿瘤细胞增殖从而发挥抗肿瘤作用[4]。但有半衰期短,代谢快,作用时间短的缺点,我们将其制成缓释微球,具有缓慢释放,延长药效,降低毒副作用,提高生物利用度等特点。本实验结果表明,5-Fu 组和5-Fu 缓释微球组均对胃癌BCG 820细胞具有很好的生长抑制作用,5-Fu 缓释微球组体外对肿瘤细胞杀伤作用随时间延长优于5-Fu 组。缓释微球使5-Fu 的安全性、有效性和适应性有所提高。具有广泛的应用前景,由于未检测该药物的分布、胃肠道影响及肝、肾毒性,该方法应用于临床还应该持谨慎态度,还有待进一步的实验加以验证。

参考文献:

[1]吴敬波,刘志钧.胃肠道恶性肿瘤腹腔化疗[J ].泸州医学院学

报,2000,23(4):331

[2]熊斌.胃癌术后腹膜转移[J ].实用肿瘤学杂志,1995,9(2):72[3]T ade H ,Sh iho O ,kuro sh i m a K L ,et al .A n i m p roved co lo ri m ete 2icassy fo r interlreuk in -2[J ].I mm uno l M ethods ,1986,93(2):157～165

[4]耿宝琴.抗代谢物见:韩锐,主编肿瘤化学预防与药物治疗

[M ].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1991,260～266

(收稿日期:2005-12-27)

作者简介:朱世滨(1973～)男,医学硕士,主治医师,从事肿瘤外科方面研究。

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06・ 黑龙江医药科学　2006年4月第29卷第2期