肌酐亚胺水解酶法测定在自动生化分析仪上的应用分析

肌酐亚胺水解酶法测定在自动生化分析仪上的应用分析

发表时间：2013-11-08T11:06:17.670Z 来源：《医学与法学》2013年第3期供稿作者：黄勤烽王美珠黄少铃杨湘越[导读] 近几年出现的一种酶法-亚胺水解酶法测定肌酐，其原理是利用肌酐亚氨基水解酶水解肌酐。

黄勤烽王美珠黄少铃杨湘越

(福建省福州市南京军区福州总医院350025)

【摘要】目的在Olympus AU2700 上用亚胺水解酶法、肌氨酸氧化酶法和苦味酸动力学法三种方法对肌酐分别进行测定与评价，寻找更符合临床及实验室要求的肌酐测定方法。方法使用肌酐亚胺水解酶法在AU2700 上进行准确度，精密度，药物干扰试验。结果亚胺水解酶法偏倚、偏倚率符合方法学质控要求；质控CONTROL2 精密度为 3.16，质控CONTROL3 精密度为1.77，满足1/3CLIA’88 要求；在酚磺乙胺，维生素C 干扰试验中，不受药物干扰。结论肌酐亚胺水解酶法具有较好的准确度、精密度、抗药物干扰性可以更好地满足临床检测要求。

【关键词】亚胺水解酶法准确度精密度干扰试验

近几年出现的一种酶法-亚胺水解酶法测定肌酐，其原理是利用肌酐亚氨基水解酶水解肌酐，产生N-甲基乙内酰脲和NH3，再以谷氨酸脱氢酶催化α-酮戊二酸和NH3，在NADPH 供氢的条件下生成谷氨酸，最后测定340nm 处吸光度降低速率求得肌酐含量。据国外报道，血清中某些氨基酸，丙酮，乙酸，胆红素、乳糜等，均对亚胺水解酶法不产生干扰[1]。为了寻找更加符合临床实际检测要求的方法，现报告如下。

1 材料

1.1 标准品与质控品：2012 年卫生部第三次质控品(批号201231-201235)；质控品 RANDOX CONTORL2(批号434UE)和RANDOX CONTROL3(批号670UN)。

1.2 标本：随机收集无溶血，无黄疸，无脂血高中低三个值的血清肌酐标本各2 份。

1.3 试剂：浙江康特试剂(肌氨酸氧化酶法)，西门子Simens Dimension RxL Max 原装进口试剂(苦味酸动力学法)，上海执诚RANDOX 试剂(亚胺水解酶法)。徐州莱恩酚磺乙胺注射液0.5g/2ml，福州海王维生素C 注射液0.5g/2ml。

1.4 仪器：日本Olympus AU2700 自动生化分析仪。

2 方法

2.1 准确度分析： 2012 年卫生部第三次质控，批号201231-201235，重复测定三次，取均值，计算偏倚及偏倚率。

2.2 精密度评价：参照EP5-A2，朗道质控CONTORL2，CONTORL3 高低两个值，每天测定2 次，间隔2 小时，测试20 天，中间穿插正常测定门诊标本，计算均值， SD，变异系数(CV%)。

2.3 药物干扰试验：参照EP7-A2 文件，将酚磺乙胺0.5g/2ml，维生素C 0.5g/2ml，用蒸馏水稀释成以下两组浓度，甲组(酚磺乙胺)：5，2.5，2，1，0.5，0.25，0.1，0.05g/L；乙组(维生素C)：20，15，12.5，10，7.5，5，2.5，1g/L。甲组选取高低血清标本(H， L)，按180(H，L)μL+20μL 各浓度药物，编号1-8，另编一个9 号对照管，180(H， L)μL+20μL 生理盐水；乙组选取高中低血清标本(H，M，L)，按180(H，M，L)μL+20μL 各浓度药物，编号1-8，另编一个9 号对照管，180(H，M，L)μL+20μL 生理盐水。各组按1→9，9→1 顺序测定，取均值。

2.4 统计方法：应用EXCEL2007 进行统计。

3 结果

3.1 准确度试验：结果符合卫生部对亚胺水解酶法测定肌酐的要求，见表一。

表一亚胺水解酶法准确度试验

3.3 药物干扰试验

3.3.1 甲组酚磺乙胺对肌酐测定的影响：亚胺水解酶和苦味酸动力学法，无明显差异；而肌氨酸氧化酶法，随着酚磺乙胺浓度的增加，肌酐测定结果越低，在酚磺乙胺浓度低于0.1g/L 时，无明显影响。见表三。__

4 讨论

病人治疗期间的物质介入是误差的一个重要因素，临床上试验分析前药物的影响因素时有发现[2]。在酚磺乙胺干扰试验中，分析产生上述现象的原因，主要是其基本结构中的氢醌环可作为供氢体，消耗POD 反应中的过氧化氢，从而使基于POD 反应的酶法肌酐检测产生负干扰[3]。在维生素C 干扰试验中，分析产生上述现象的原因，可能在于维生素C 具有还原性，对Trinder 反应产生负干扰[4]。

苦味酸动力学法及肌氨酸氧化酶法均不能完全消除药物的影响，二者缺点也较多。一是苦味酸动力学法，虽然利用真假肌酐反应速率时间差来消除假肌酐的干扰，使特异性提高，但不能完全消除干扰；二是肌氨酸氧化酶法，内源性肌酸干扰依然存在，并且增加了样品中还原性物质对氧化反应的干扰[5]。同时用这两种方法检测肌酐时，有必要在临床工作中加强分析前质量控制，尤其是对于接受此类治疗的肾病患者，更应重视标本采集的时间，避免在服药后立即采集血液标本进行检测，从而将药物对肌酐检测的干扰效应降至最小，进而为临床提供更为真实、可信的检测结果。而亚胺水解酶法测定肌酐时则受上述多种因素的影响不大，可以更好地满足临床的需要。

参考文献

[1]Thienpont LM，Van Landuyt KG，Stockl D，et al. Candidate reference method for determining serum creatinine by isocratic HPLC: validation with isotope dilution gas chromatography-mass spectrometry and application for accuracy assessmentof routine test kits. Clin Chem，1995，41(7)：995-1003. PMID:7600702

[2]马恺，秦培华.临床实验室分析前影响因素的探讨与对策研究.国际检验医学杂志， 2011，32(16): 1908- 1909.

[3]Fushimi R，Suminoe A，Yasuhara M，et al.Negative interference by ethamsylate in enzymatic assay of serum creatinine involving peroxidase coupled reaction. Clin Chem， 1992，38(1)：169-170. PMID:1310265

[4]陈兴明，李丹，邴岩，等. 部分还原性药物对Trinder 反应的干扰. 总装备部医学学报，2010，12(4): 233-235.

[5]姚艳霞. 血清肌酐测定方法学的局限性及临床应用的相对性.中国实验诊断学， 2011，15(7)：1225-1227.