优选第三次实验血清总脂含量测定

三、仪器、材料和试剂
（一）实验仪器 可见光分光光度计，恒温水浴锅，移液枪等
（二）实验试剂 （1）胆固醇标准液（6mg/mL） （2）香草醛显色剂 （3）浓硫酸（AP） （4）浓磷酸（AP） （5）生理盐水 （三）实验材料
兔血清（未稀释）
四、操作步骤
1、血清脂类的颜色反应
管号
空白管
标准管
测定管1 测定管2
(4)离子对酶活性的影响
就唾液淀粉酶而言，低浓度Cl一可以增加酶活性，高浓度的Cl一或者低浓度的 Cu2+则会抑制酶的活性，而低浓度的Na+、SO42-等对酶活性没有影响。不同 的酶对不同的离子具有不同的效应。
二、血糖的测定
1、实际用量减半 2、结果分析（两个样本值的比较，与健康家兔的比较80-
120mg/100mL，结果偏高与氧化的关系判断错误） 3、测定管颜色深浅的处理（稀释！） 4、定性实验仪器型号的记录 5、实验改进：标准曲线的制作
每种酶都有其最适温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言，若酶 处于过高的温度环境中，会使酶活性永久地丧失；而若处于极低温度的环境 中只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。
(3)酶浓度对酶促反应速度的影响
在其它条件不变的情况下，若反应物浓度大大高于酶浓度时，则反应速度随酶 浓度增加而增加，两者间成正比关系，即：V=k[E]。但若反应底物浓度较低， 而且酶的浓度足够高时，增加酶浓度，反应速度基本不变。
碳正离子 磷酸酯
羰基
红色的醌化合物
香草醛法
优点： （1）采用胆固醇（或橄榄油）作标准的测定法，结果
比较接近实际情况。 （2）方法简易，常用方法。
缺点：不能准确测定总脂含量。 （不饱和脂类比饱和脂类呈色强。血清中饱和脂类 与不饱和脂类的比例约为3：7。要测定血清的标 准总脂含量最好选用称量法。）
实验五 血清总脂含量测定 （香草醛法）
一、实验目的
掌握香草醛法测定总脂的原理和方法 。
二、实验原理
血清中的脂类，尤其是不饱和脂类与浓硫酸共热 作用，经水解后生成碳正离子，试剂中的香草醛 与浓磷酸的羟基作用生成芳香族的磷酸酯，由于 改变了香草醛分子中的电子分配，使醛基变成活 泼的羰基。此羰基即可与碳正离子起反应，生成 红色的醌化合物，其强度与碳正离子成正比。
二、实验原理
（一）维生素C简介
（3）用玻璃棒搅拌时，应从下往上搅拌，以免捅破试管底部。 （4）戴手套操作，待测液装入高度为比色血的2/3，严禁装满！
六、思考题
1.何谓总脂？测定总脂含量有何意义？ 2.显色后为什么要放置20min？放置的目的是什么？
实验七 维生素C的提取和定量测定 ——2,6-二氯酚靛酚法
一、实验目的
1. 学习维生素C定量测定法的原理和方法。 2. 进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技能。
测定管吸光度 ×胆固醇标准液浓度×稀释倍数
标准管吸光度 （ 6mg/mL） （ 1）
五、注意事项
（1）注意浓酸使用及安全：黏稠度大，取量时吸管内试剂要尽量 慢放，避免因放过快而使试剂附于管壁过多而造成误差。不要 将吸硫酸的枪头放在实验台上。
（2）血清中脂类含量过多时，可用生理盐水稀释后再进行测定， 并将结果乘以稀释倍数。
优选第三次实验血清 总脂含量测定
温度对酶活力的影响
0℃ 37 ℃ 100 ℃
0℃ 37 ℃ 100 ℃
0℃ 37 ℃ 100 ℃ 100℃ 0 ℃ 37 ℃
100℃ 37 ℃ 0 ℃
100℃
37 ℃
0℃
100℃ 0 ℃ 37 ℃
作用时间、酶的活性高低、量多少对结果的影响
激活剂和抑制剂对酶活性的影响
支链淀粉螺旋（约25-30个残基）中的短串碘分子比直链淀粉螺 旋中的长串碘分子吸收更短波长的光，因此支链淀粉遇碘呈紫色到紫 红色。
7、酶实验必须控制哪些条件？
酶的化学本质是蛋白质，它极易受外界条件的影响而改变它的构象及性 质，因而也必然会影响到它的催化活性。酶对温度、 pH、酶浓度及某些离子 浓度等变化很敏感。
0.9% 1% H2O NaCl CuSO4
酶的高效性
Fe 熟马铃 生马铃 空白 薯糜 薯糜 对照
Baidu Nhomakorabea
3.8 6.8 8.0
0℃ 37 ℃ 100 ℃
0.9% 1% H2O NaCl CuSO4
6、高温对结果的影响
淀粉的结构：天然的淀粉有直链淀粉和支链淀粉，直链淀粉的 二级结构（指多糖链的折叠方式）是一个左手螺旋，每圈螺旋含6个 残基，螺距0.8nm，直径1.4nm。
实验过程中的问题：
1、协作实验、合理分工 2、损坏物品登记及处理 3、移液器使用：用完后调到量程的最大值，按组放好。 4、试管、试剂瓶清洗 5、实验结束后：检查移液器数量、装配枪头、整理桌面及试剂， 试管、三角瓶等洗净后按规格分装及白瓷盘中烘干，擦净桌面及试剂 架，老师或研究生检查后才能离开。 6、值日生按值日表执行，负责打扫及协助试剂的分装等工作。 7、预习报告抽检：老师随机抽查并记分。 8、实验报告写明姓名、班级、学号，学委按序排列后在实验结 束后的第三天上交。
淀粉的螺旋结构并不十分稳定。当不与其他分子如碘相互作用 时，直链淀粉很可能是以无规卷曲形式存在。碘分子正好能嵌入螺旋 中心空道，每圈可容纳一个碘分子（I2），通过朝向圈内的羟基氧 （提供未共享电子对）和碘（提供空轨道）之间的相互作用形成稳定 的深蓝色淀粉和碘络合物。产生特征性的蓝色需要约36个即6圈的葡 萄糖残基。(见书81页)
(1)pH值对酶活性的影响
酶的活性受环境pH的影响极为显著，通常各种酶只有在一定的pH范围内才能 表现出它的活性。一种酶表现其最高活性时的 pH值称为该酶的最适pH。高 于或低于最适pH值时，酶的活性降低。酶的最适pH值受酶的纯度、底物的种 类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。
(2)温度对酶活性的影响
血清
—
—
0.02
0.02
标准液
—
0.02
—
—
浓硫酸
1.0
1.0
1.0
1.0
充分混合，放置沸水浴10min，使脂类水解，冷水冷却
向各管中均匀加入显色剂4.0mL，用玻璃棒充分搅匀。
放置20min（或者37℃保温15min）后，以空白管调零，测各管 A525nm吸光值
2、计算
血清总脂含量= （mg/mL）