黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究_图文(精)

安徽农业科学,Journal ofAnhui A一.蹦.2009,37(10:4493,4498责任编辑金琼琼责任校对夏蓉黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究
李万才 (滨州职业学院生物工程系。

山东滨州256603
摘要[目的]研究黄芪根中多糖的含量,[方法]采用分光光度法测定膜英黄芪中多糖的含量,以葡萄糖为对照品.以苯酚一浓硫酸为显色荆.在波长486m处测定样品溶液的吸光度。

【结果]标准曲线为A=51.654C+0.0372.r=0.999
8,脚。

为1.28%.BSD2为 1.50%。

[结论]该方法操作简单,灵敏度高。

关键词黄芪根;多糖含量;分光光度法
中图分类号s567.23+9文献标识码A 文章编号0517—661l(200910—04493—01
Research on Extraction Process and Content Determination of Astragalus Polysaccharides
LI Wan-cai(Department of Biological Engineering,Binzhou Vocational College,Binzhou,Shandong 256603
Abstract Objective]111P study re.arches the poly鲴echaride content in the Astragalus root.f Method Using spectrophotometry determines polysaceharide content in Astragalus membranaceus.taking slucose酗compari.,“m,taking phenol・concentrated sulfuric acid黯developer and determining the absorbency of sample∞lution
underA=486nln.『Resultl 111P standard curve is A=51.654C+0.0372。

r=0.9998. 冗sD.js 1.28%and RSD,is 1.5%(n=5.I Conclusion 111is method is simple,sensitive and accurate.
Key words Astragalus root:Polysaccharides content;Spectrophotometry
黄芪(Radix Astragalus是豆科植物,膜荚黄芪[Astraga— lus
membranaceus(Fisch.Bge.]的干燥根含有多糖、木质素类、黄酮类化合物、香豆苯
醚类、生物碱类、皂苷类、甾体类、氨基酸、微量元素等众多的生物活性物质¨。

J,具有补气同表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能博J。

膜荚黄芪多糖不仅是机体的重要组成部分。

还具有提高机体免疫能力、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗肿瘤、抗突变、降血脂、降血糖、防辐射以及改善动物生产性能等功能,同时由于它自身对细胞毒性极小,对正常细胞影响很小,因此将多糖作为药物对于治疗多种免疫缺损疾病和自身免疫疾病有显著的效果。

笔者采用可见分光光度法对膜荚黄芪根中多糖的含量进行了测定,旨在为膜荚黄芪的产品开发提供理论依据。

l材料与方法
1.1样品来源膜荚黄芪于lO月份采自山东,采后洗净、晾干,60℃烘干,粉碎后过60目筛备用。

1.2仪器与试剂SX722分光光度计(上海精密仪器仪表有限公司,8453E型紫外分光光度仪(美国Agilent,超声仪 (SK8210HP,水浴锅,酒精计,漏斗,分液漏斗。

无水葡萄糖,苯酚分析纯,浓硫酸,95%乙醇,氯仿,正丁醇,活性碳。

1.3多糖的提取与精制一一训称取膜英黄芪根粉100g,加水适量,超声提取3次,30nlin/次,过滤,合并滤液,浓缩,加 95%乙醇至含醇量为80%,静置过夜(4℃,过滤,分离出沉淀,加适量水溶解,加95%乙醇至含醇量为80%,再静置过夜(4℃,过滤。

分离出沉淀,加水溶解,除蛋白(氯仿:正丁醇=4:l,共除20次后,加活性炭脱色,抽滤,加95%乙醇至含醇量为80%,静置过夜(4℃,过滤,分离出沉淀,冷冻干燥得多糖0.5051g,密封备用。

1.4溶液的制备
1.4.1葡萄糖标准溶液。

精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1g,置100rng容量瓶中,加蒸馏水至刻度,再精密吸取10IIll于另一容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀备用。

得O.1
作者简介李万才(1966一,男,山东滨州人.副教授,从事生物技术研究。

收稿日期2009-01-04 ms/m1的葡萄糖标准溶液。

1.4.2苯酚溶液。

称取苯酚100g,加0.10g锌片、0.05g NaHCO,。

蒸馏,收集182℃馏分,称取该馏分5g,加蒸馏水 95Ⅱd。

置棕色瓶中备用,得浓度为5%的苯酚溶液。

1.4.3膜英黄苠多糖溶液。

精密称取干燥至恒重的膜荚黄芪多糖0.1g,置100rng 容量瓶中,加蒸馏水至刻度,再精密吸取10nd于另一容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀备用,得 0.1mg/ml的膜荚黄芪多糖溶液。

1.5最大吸收波长的选择分别配制0.1r-,罾/IIlr的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、醛糖溶液,再分别精密吸取 l ml于具塞试管中。

加苯酚试液l IIlI,摇匀,迅速加浓硫酸 5rrII,振摇2min后,于沸水浴中旋转加热15min,取出置冷水中冷却至室温。

以苯酚一浓硫酸溶液为空白,用紫外分光光度仪在波长400~800Bin范围内,扫描光谱图,得上述糖溶液的最大吸收波长分别为486,488,479,488、479nnl。

以同样的方法处理膜荚黄蓖多糖样品溶液,在波长486nnl处有最大吸收。

2结果与分析
2.1葡萄糖标准曲线的绘制分别精密吸取O.1ms/m1的标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0IIll于具塞试管中,再分别加蒸馏水1.0、0.8、0.6,0.4、0.2,0ml,并给试管编号。

然后分别加苯酚试液l rnl,摇匀,迅速加浓硫酸5nll。

振摇2min 后,于沸水浴中旋转加热15min,取出置冷水中冷却至室温, 以苯酚一浓硫酸溶液为空白,于波长486舳处测吸光度,得回门方程A=51.654C+o.0372,r=o.9998(,l=5,说明线性关系较好。

2.2换算因子(,的测定精密称取已干燥至恒重的膜荚黄芪多糖4.048mg于
100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,得多糖供试品溶液。

精密吸取该溶液
2lIll,按“2.1”方法,测定波长486illn处的吸光度为2.9322。

由回归方程计算供试品中葡萄糖的含量为0.056,W,/wa,按下式计算厶 {=w/c
式中,1,0为供试液中膜荚黄芪多糖的量(4.048rag,由公式 (下转第4498页
安徽农业科学
2009生
往受到限制。

而新的生物指纹图谱是能够鉴别生物个体之间差异的电泳图谱,多态性丰富且具有高度的个体特异性和稳定性,非常适合进行品种的鉴定工作旧“。

传统的鉴定手段更多是从生物的形态、结构上进行的鉴别,但生物的外形、结构在环境因素的影响下会发生一定程度的改变,例如同种植物在不同的气候、土壤、水分、日照等条件下,其形态、组织细胞都会有差异,因此有可能会造成错误的鉴别结果,特别是疑难种、易混种,用传统方法较难鉴别。

而DNA分子作为遗传信息的直接载体,不受外界因素、生物体发育阶段以及器官组织差异的影响,故以DNA分子特征进行物种鉴别准确可靠Ⅲ】。

RAPD技术正是依托DNA 分子特征进行物种鉴别的、新兴、科学的鉴别方法,该技术在传统的鉴别技术基础上提升了一大步,对宁夏枸杞的鉴别起到重要作用。

3结语
枸杞鉴别作为与人类的现实健康生活息息相关的一个内容,在近年来的科研中日益提上日程,从传统鉴别手段的日臻完善,到新兴鉴别手法的蓬勃发展,无论是传统的、抑或是新兴的,其在现实的枸杞鉴别工作中都在继续发挥着各自的作用。

传统鉴别方法的优势是注重研究者的个人素质和专业技能,而新兴的高科技鉴别手法无疑注重研究者科学的手段和对精密的实验器材操作。

基于不同的研究者素质,以及枸杞鉴别方式的灵活和多样性,传统和新兴的鉴别方式都以其不同的功能在日益发展的枸杞鉴别工作中发挥着各自应有的作用。

在期待新的鉴别方式不断更新的同时,传统的鉴别方式同样是不可或缺的。

因此,先进的分子生物学技术与传统枸杞鉴别手段的有效结合,是宁夏枸杞鉴别方式的重要途径Ⅲ】,两者的结合可在各自原有鉴别的基础上起到锦上添花的作用。

参考文献
[1】周兴梅.枸杞子掺杂物的鉴别[J].时珍国医国药,2002.13(I:25.
[2]严宜昌,傅杰,陈平,等.宁夏枸杞产区调研及商品lillJ[J].湖北中医
+一+一+一+・+*—卜
(上接第4493页得f:3.614(n=3。

2.3样品中多糖含量的测定精密称取样品l g于100
ml
杂志.2001。

23(12:45.
[3]林秀平.枸杞子与几种混伪品的鉴别[J].湖北预防隈学杂志,2002,13
(6:40.
[4]阴健,郭力弓.中药现代研究与临床应用[M].北京:学苑出版社.1995. [5]张雪琴,魏加印.枸杞子鉴别[J].时珍国医国药,2000,11(1:52.
[6]张秀明,侯惠婵.四种枸杞子的鉴别及含量测定[J].中药材,2003,30
(3:282—283.
[7]牛艳,王明国,郑国琦,等.宁夏不同地域构杞子微量元素比较研究
[J].干旱地区农业研究,2005,23(2:100—103.
[8]周红英,张颖,李同德,等.不同产地枸杞子微量元素测定[J].微量元
素与腱康研究,21203.20(3:19-20.
[9]常璇,胡奇林用聚类分析方法对宁夏中宁县和平罗县枸杞中6种元
素综合指标的比较研究[J].宁夏大学学报,2006,27(3:248—251.
[10]孙素琴,张宣,秦竹,等.FHR直接鉴拐0植物生药材[J].光谱学与光谱
分析,1999,19(4:542.
[11]孙紊琴.郁监源,胡鑫尧.分子光谱法无损鉴别生药材的最新进展
[J].光谱学与光谱分析,1999,19(6:841.
[12]孙素琴,周群,王钊,等.傅里叶变换拉曼光谱法无损鉴别植物生药材[J].分析化学,2000.28(2:211.
[13]孙素琴,周群,郁鉴源,等.分子振动光谱法与中药研究的最新进展[J].炮善龇谱分析,2000,20(2:199.
[14]周群,孙素琴,杜德国,等.芦丁热稳定性的红外光谱法实时原位跟踪[J].光谱学与光谱分析。

2010,20(2:195.
[15]孙素琴,王米渠,梁曦云,等.枸杞子四种原性状的兀豫光谱法鉴别[J】.光谱学与光谱分析,2001,21(6:187—189.
[16]金文英.程路遥连续小波变换HA—TR FIRE分析应用于中药枸杞
子与同属非正品鉴别的研究[J].浙江师范大学学报,2008。

31(3:312
-315.
[17]周群,孙素琴,梁曦云.枸杞产地的红外指纹图谱与聚类分析法研究[J].光谱学与光谱分析,2003。

23(3:509—511.
[18]施玉珍,陈志春,林贤福.枸杞子的共焦显微拉曼光谱鉴别[J].光谱
实验室,2004,21(6:1212.
[19]严奉坤,许兴,魏玉海槲瑾因组DNA提取西嘴纹图谱分析[J].时
珍国医国药,2007,18(1:8一10.
[20]ZHANG K Y B,LEUNG H W,YEUNG H W,d a1.Differentiation of Lr- eium
hm咖from
its
rdaedLyeium印eci∞Ⅷing random amplified
p01rⅡ唧lIlic DNA[J].Phnta NIed,2001,67:379一鲳1.
[21]李军,郭晏海,秦雪黼DNA随机扩增多态性分析技术在枸杞道地药
材鉴别中的应用[J].光中医药研究,2002,18(3:48-49.
[22]魏玉清,许兴,王璞。

等.不同地区主要栽培宁夏枸杞品种的RAPD分
析[J].西北农林科技大学学报.2007,35(1:9l一笏.
[为]刘华,贾继增.指纹图谱在作物品种鉴定中的应用[J].作物品种资
源.1997,23(2:45—49.
[24]詹秀琴,王明艳分子生物哮积沭在中药鉴定中的应用及拐}讨CJ].生
物学通报,2001,36(11:4.
[25]魏瑜RAPD技术在中药材道地性鉴定中的应用[J].海峡药学,2008,
20(io:148—150.
—+一—-卜-・・卜一-—卜.-+-.-4--.-+-.
为5.23%-9.13%。

可见,用分光光度法测定膜荚黄芪根中多糖的含量是可行的,该方法稳定可靠,简单易行。

参考文献
容量瓶中,加求适量,80气超声提取30而氓加水至刻度j1圾_一{}]嚆功昔'灏哮j 毯玉荚,等多序岩黄蓼毛4l律成分研究[n中国中药杂
取2
1111于具塞试管中,按“2.1’’的方法,测定波长486姗处
[2]霪舅量锬萎?黼‘多序岩黄芪化学成分研究[J].药学学报.
的吸光度。

多糖(%=CDf/w×100%
式中,C为样品溶液中葡萄糖的浓度;D为样品溶液的稀释倍数i厂为换算因子;∞为样品的质量。

由该公式得多糖平均含量为7.35%。

2.4精密度试验精密吸取0.1ms/ml葡萄糖对照品溶液
0.4ml
5份,0.1ms/m1膜荚黄芪多糖供试液O.4
IIll
5份,按
“2.1”的方法,分别测定波长486/lln处的吸光度,计算得
RSDl=1.28%,RSD2=1.50%。

3小结
通过对膜荚黄芪根中多糖含量的测定可知,其多糖含量
2003,38(8:592—593.
[3]海力茜.张庆英,赵玉英,等.多序岩黄芪化学成分研究[J].中国中药
杂志,21304,29(5..432—433.
[4]徐建军,海力茜,王小青,等.新疆红芪化学成分研究[J].华西药学杂
志￡20晒,20(3:214-215.
[5]海力茜,张垣,徐建军,等.I-IPLC法测定新疆红芪中芒柄花素的含量
[J].华西药学杂志,加晒,20(3:214—216. [6]徐建军,海力茜,凯赛尔新疆红芪化学成分研究[J].华西药学杂志,
2006。

21(i:钾一49.
[7]王小青,海力茜.帕丽达,等.膜荚黄芪不同部位中总黄酮含量的测定
[J】.新疆师范大学学报,2006,58(25:49—50.
[8】国家药典委员会中国药典.I部[M].北京:化学工业出版社,2005.
[9]江寮}新,朱正兰.超声渡提取龙租多糖的研究[J].中草药杂志,2005,36
(6:862—863.
[10]徐凌川,张华,许昌盛,等.超声波提取灵芝多糖的最佳工艺探讨[J].
中国中药杂志.2005,30(6..471—472.
黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究
作者:李万才 , LI Wan-cai
作者单位:滨州职业学院生物工程系,山东滨州,256603刊名:安徽农业科学
英文刊名:JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES年,卷
(期:2009,37(10被引用次数:
3次
参考文献(10条
1. 江蔚新;朱正兰超声波提取龙胆多糖的研究 [期刊论文]-中草药杂志 2005(06
2. 国家药典委员会中国药典(一部 2005
3. 王小青;海力茜;帕丽达膜荚黄芪不同部位中总黄酮含量的测定 2006(25
4. 徐建军;海力茜;凯赛尔新疆红芪化学成分研究 [期刊论文]-华西药学杂志2006(01
5. 海力茜;张;徐建军 HPLC法测定新疆红芪中芒柄花素的含量 [期刊论文]-华西药学杂志 2005(03
6. 徐建军;海力茜;王小青新疆红芪化学成分研究 [期刊论文]-华西药学杂志 2005(03
7. 海力茜;张庆英;赵玉英多序岩黄芪化学成分研究 [期刊论文]-中国中药杂志 2004(05
8. 徐凌川;张华;许昌盛超声波提取灵芝多糖的最佳工艺探讨 [期刊论文]-中国中药杂志 2005(06
9. 海力茜;张庆英;梁鸿多序岩黄芪化学成分研究 [期刊论文]-药学学报 2003(0810. 海力茜;梁鸿;赵玉英多序岩黄芪化学成分研究 [期刊
论文]-中国中药杂志 2002(11
引证文献(3条
1. 张建 . 杨发君 . 刘顺 . 郭爽 . 任跃英膜荚黄芪传粉昆虫的研究 [期刊论文]-农业科学与技术(英文版 2010(2
2. 姜志艳 . 张宇黄芪和螺旋藻过氧化氢酶的活性研究[期刊论文]-广东农业科学 2010(5
3. 王晓华 . 朱华 . 曾建红 . 陈旭不同采收时间桂郁金多糖含量的测定 [期刊论文]-中国民族民间医药 2010(22
本文链接:/Periodical_ahnykx200910055.aspx。