显微镜的使用和海洋细菌的观察 实验报告

实验一显微镜的使用和海洋细菌的观察

一、目的要求：

1、了解普通光学显微镜的构造。

2、学习显微镜的正确使用维护。

3、观察不同细菌形成菌落特征。

4、学习活细菌形态的观察方法。

二、实验说明

显微镜是微生物研究的工具，显微镜种类繁多，有光学显微镜、相差、暗视野、荧光及电子显微镜等。但它们的原理和结构基本相同。下面以普通光学显微镜为例简要介绍其原理及结构。

（一）原理

一般显微镜的光学系统由两部分组成。

1、成像系统由目镜、物镜组成。物镜将标本作第一次放大，然后目镜再将第一次放大的实像作第二次放大。

2、照明系统由光源、光圈调节器和聚光镜组成。光源可选用人工光源，人工光源由钨卤素灯发出，经光圈调节器调解后，然后聚光镜将外来光线聚在标本上，从而照明了标本，便于观察。

（二）结构

由光学部分（光圈调节器、聚光器、物镜和目镜）和机械部分（镜座、镜筒、镜臂、转换器、载物台、推动器、粗动螺旋和微动螺旋）

组成（图1-2），主要部分件有：

1、目镜通常备有5×、10×、16×，一般选用10×。

2、物镜它对分辩力有着决定性影响。一般低倍镜（10×）、高倍镜（40×）和油镜（100×），通常按顺序安装在转换器上。

3、聚光镜具有使样品明亮的集光作用，同时还影响物像的分辩力和反差，若将聚光镜的光圈开放到超过物镜的数值孔径时，便产生光斑，若收扰光圈，分辩力下降但反差增大。

4、载物台又称镜台，载放样品用。一般都装有一个推进器，

可由移动手轮作横向或纵向移动载玻片。

5、粗、细调旋转是调节载物台或镜筒上下移动的装置。细调旋扭转动一圈的升降值为0.2mm，刻值为0.002 mm。

（三）显微镜性能

1、数值孔径显微镜分辩力的高低决定于光学系统的各种条件，但起决定性影响的是物镜。物镜的性能可用数值孔径（N.A来表示）。数值孔径又叫开口率，它与显微镜的分辩力成正比，与焦深成反比，与镜像亮度平方根成正比。

2、分辨力分辨力系指分辨物体细微结构的能力。D值愈小，分辨力愈高，物像愈清晰。

3、放大倍数显微镜放大倍数（V）等于物镜放大率（V1）和目镜放大率（V2）的乘积V=V2×V2。

4、焦深在显微镜下观察一个标本时，焦点对在某一像面时，物像最清晰，这像面为目的面。在视野内除目的面外，还能在目的面的上面和下面看见物像，这两个面之间的距离称为焦深。物镜的焦深和开口率及放大率成反比，即开口率和放大率愈大，焦深愈小。因此调节高倍镜比调节低倍镜要仔细，否则容易使物像滑过而找不到。

三、实验器材

显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、接种环。

以改良Zobell 2216E培养基采用涂布法分离的海洋细菌，海水样品采自唐山附近海域。

四、实验方法步骤

（一）显微镜使用

1、取镜打开镜箱、右手握住镜臂，取出显微镜，用左手托住镜座放于平稳的实验台上。镜检者姿势应端正，观察时两眼必须同时睁开，以减少疲劳。

2、调光打开电源开关。

（1）将低倍镜转至镜筒下方，旋转粗调节器，使镜头与载玻台相距0.5cm。

（2）观察光源强弱，调节光源强弱、光圈及升降聚光镜即可。使视野内光线均匀明亮。

3、低倍镜观察将待测标本置载物台上，用卡尺夹住，移动推动器，使观察标本处于物镜正下方。转动粗螺旋，使载物台上升（或镜筒下降）至距标本0.5cm处，由目镜观察，然后慢慢下降载物台（或上升镜筒）直至出现模糊像后，用细调节器调至物像清晰为止。

4、高倍镜观察低倍镜观察至清晰物像后，将观察的部位移至视野中央，转换高低镜，然后用细调节器调至物像清晰。

（二）活细菌观察

生活的细菌在显微镜下是透明的，不易观察。因此观察时应减弱光照、增加反差，才能获得较好的效果。如果光照很强，细菌和周围液体的差别就难以辩别。

取载玻片一块，加无菌海水一滴，用接种环取少许菌在水滴中沾几下，当水滴微浑时即将接种环在酒精灯火焰上灼烧去多余菌体，然后盖上玻片。

镜检时先用低倍镜调焦，然后转高倍镜观察。

五、实验结果

将菌落观察及显微镜镜检结果填入下表中。

说明：

1、菌落大小估算即可

2、形态可采用点状、圆形、纺锤形、不规则、假根状、丝状等词语。

3、隆起可采用扁平、拱起、凸透镜状、脐凹状、枕状等词语。

4、边缘可采用完整、波状、裂叶状、啮蚀状、丝状、卷曲等词语。

5、数量为菌落数量，估算一下即可。无法估算的，直接写成片。

6、菌体形态用显微镜观察，球形、杆形、弧形、螺旋形、双球

等等。