人肝癌巴马小型猪异种移植模型的建立
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【关 键词 】 人肝 细胞 癌 ； 异 种细 胞移 植 ； 巴马小 型猪 ； 免疫 抑 制剂
Ｄｅｖｅｌｏｐｍ ｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍ ａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍ ａ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｍ ｏｄｅｌ ｉｎ ｂａｍ ａ ｍ ｉｎｉ ｐｉｇｓ
Ｗｕ Ｙａｎｓｈｕａｎｇ，Ｈｕ Ｘｉｎｇｌｉｎ，Ｚｈｏｕ Ｘｉａｏｎａｎ，Ｌｅｉ Ｌｅｉ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，Ｈａｒｂｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ １５００８６，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ．
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｌｅｉ Ｌｅｉ，Ｅｍａｉｌ：ｌｅｉＯ８６＠ｅｍｓ．ｈｒｂｍｕ．ｅｄｕ．Ｃｎ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ ０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｏｕｒ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ
《实用器 官移植 电子杂志 》 ２０１８年 ３月第 ６卷第 ２期 Ｐｒａｅ ＪＯｒｇａｎＴｒａｎｓｐｌａｎｔ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＶｅｒｓｉｏｎ），Ｍａｒｃｈ２０１８，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．２
·９３ ·
人肝癌 巴马小型猪异种移植模 型 的建立
· 论 著 ·
吴嫣爽 ，胡兴琳 ，周晓囡，雷蕾 （哈尔滨医科大学组织胚胎学教研室 ，黑龙江 哈尔滨 １５００８Biblioteka Baidu）
ｍｏｄｅｌ ｉｎ ｐｉｇｓ ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｗｈｅｔｈｅｒ ｈｕｍａｎ ｃｅｉｌｓ ｃｏｕｌｄ ｓｕｒｖｉｖｅ ｉｎ ｐｉｇ ｌｉｖｅｒ，ａｎｄ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ
ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｄｒｕｇ ｔｒｉａｌｓ． Ｍ ｅｔｈｏｄｓ ＨｅｐＧ２一Ｐｕｒｏ—ＧＦＰ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｂａｍａ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ
ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ， ａｎｄ ｆｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ ａｆｔｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ
ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｔｉｍｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＬＴ），ａｓｐａｒ ｔａｔｅ ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ （ＡＳＴ）ａｎｄ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ－ｆｅｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＦＰ）．Ｂａｍａ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｐｉｇ’Ｓ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ｆｏｒ ｈｅｍａｔｏｘｙｌ！ｎ－ ｅｏｓｉｎ（ＨＥ）ｓｔａｉｎｉｎｇ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｉｇ ｌｉｖｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ＨｅｐＧ２一Ｐｕｒｏ—ＧＦＰ
【摘要 】 目的 建 立 人 肝 癌 巴 马 小 型猪 异 种 移 植 模 型 ，探 索 人 肝 癌 细 胞 是 否 能在 猪 的肝 脏 中存 活 ， 为 建 立人 肿 瘤 细胞 异 种移 植 的大 动物 模 型 和临 床肿 瘤 治疗 、药物 试 验 等研 究奠 定 实验 基 础 。方 法 将表 达 ＧＦＰ的人 肝癌 细胞 通 过腹 腔镜 手 术注 入 １５只 肝部 分切 除 的 巴马 小型 猪 的肝实 质 中 。实验 分 为 ３组 （ＧＯ组 、 Ｇ１组 和 Ｇ２组 ）。ＧＯ组 为对 照组 ，巴马小 型猪 肝 脏实 行肝 部 分切 除术 后 注射 生理 盐水 ；Ｇ１组 巴马小 型猪 实 施肝 部 分 切 除术 后 注射 人 肝癌 细 胞 ；Ｇ２组 巴 马小 型猪 实 施肝 部 分 切 除术 后 注射 人 肝癌 细胞 ，术后 １２小 时 饲 喂免疫 抑 制剂 。定 期采 集各 组实 验动 物 的外周 血 ，检测 实验 动物 天冬 氨 酸转氨 酶 （ＡＳＴ）和丙 氨酸转 氨 酶 （ＡＬＴ）的变化 ，检 测血 清 中是否 存在 人类 甲胎蛋 白（ＡＦＰ）。对 巴马 小型 猪 的肝脏 进行 取材 ，苏 木素 一伊 红 （ＨＥ） 染 色 后 镜 下 观察 猪 肝组 织 病 理学 特 征 。对 实验 组 进行 绿 色 荧 光 蛋 白 （ＧＦＰ）免 疫 组 织化 学 染 色 ，检测 组 织 中是 否有人 肝癌 细胞 的嵌 合 。结果 各 组 巴马小型猪 的 ＡＳＴ和 ＡＬＴ指标在 术后 １４天恢复 到术前 水平 。ＧＦＰ免 疫组织 化学结 果显示 在 Ｇ１组 和 Ｇ２组 巴马小 型猪 的肝 脏 中均 能检测 到人肝癌 细胞 。酶 联免疫 吸附试验 （ＥＬＩＳＡ） 检 测结 果 显 示在 实 验 组 的外 周血 中可 以检 测 到人 ＡＦＰ的表 达 ，且 Ｇ２组 与 Ｇ１组相 比，差 异具 有 统计 学 意 义 ［ＡＦＰ （￣ｔｇ／Ｌ）：３９．５４－４－２０．３０比 １３．７７ ４－７．５２，Ｐ＜ ０．０５ Ｊｏ ＨＥ染 色 结 果 显 示 Ｇ１组 肝 组 织 出 现 淋 巴 细 胞 浸 润 和肝 细 胞 坏 死 。结 论 通 过猪 肝 原 位 移植 人 肝癌 细胞 的 方法 可 以建立 人 肝 癌 巴 马小 型 猪异 种 移 植模 型。 免疫 抑制 剂 能促进 移植 的细胞 存活 。
ｐｉｇ’Ｓ ｌｉｖｅｒ ｗｈｉｃｈ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｐａｒｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ ｂｙ ｌａｐａｒｏｓｃｏｐｉｃ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔ ｗｅｒｅ
ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ（ＧＯ，Ｇ１ ａｎｄ Ｇ２）．Ｂａｍａ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｐｉｇｓ ｉｎ ＧＯ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓａｌｉｎｅ ａｆｔｅｒ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｐａｒｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ（ｓｈａｍ）．Ｐｉｇｓ ｉｎ Ｇ１ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ＨｅｐＧ２一Ｐｕｍ—ＧＦＰ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｐａｒ ｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｐｉｇｓ ｉｎ Ｇ２ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ＨｅＧ２一Ｐｕｒｏ—ＧＦＰ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｐａｒｔｉａｌ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍ ｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍ ａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍ ａ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｍ ｏｄｅｌ ｉｎ ｂａｍ ａ ｍ ｉｎｉ ｐｉｇｓ
Ｗｕ Ｙａｎｓｈｕａｎｇ，Ｈｕ Ｘｉｎｇｌｉｎ，Ｚｈｏｕ Ｘｉａｏｎａｎ，Ｌｅｉ Ｌｅｉ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，Ｈａｒｂｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ １５００８６，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ．
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｌｅｉ Ｌｅｉ，Ｅｍａｉｌ：ｌｅｉＯ８６＠ｅｍｓ．ｈｒｂｍｕ．ｅｄｕ．Ｃｎ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ ０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｏｕｒ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ
《实用器 官移植 电子杂志 》 ２０１８年 ３月第 ６卷第 ２期 Ｐｒａｅ ＪＯｒｇａｎＴｒａｎｓｐｌａｎｔ（ＥｌｅｃｔｒｏｎｉｃＶｅｒｓｉｏｎ），Ｍａｒｃｈ２０１８，Ｖｏ１．６，Ｎｏ．２
·９３ ·
人肝癌 巴马小型猪异种移植模 型 的建立
· 论 著 ·
吴嫣爽 ，胡兴琳 ，周晓囡，雷蕾 （哈尔滨医科大学组织胚胎学教研室 ，黑龙江 哈尔滨 １５００８Biblioteka Baidu）
ｍｏｄｅｌ ｉｎ ｐｉｇｓ ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｗｈｅｔｈｅｒ ｈｕｍａｎ ｃｅｉｌｓ ｃｏｕｌｄ ｓｕｒｖｉｖｅ ｉｎ ｐｉｇ ｌｉｖｅｒ，ａｎｄ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ
ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ ｄｒｕｇ ｔｒｉａｌｓ． Ｍ ｅｔｈｏｄｓ ＨｅｐＧ２一Ｐｕｒｏ—ＧＦＰ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ Ｂａｍａ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ
ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ， ａｎｄ ｆｅｄ ｗｉｔｈ ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ ａｆｔｅｒ ｓｕｒｇｅｒｙ．Ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ
ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｔｉｍｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＡＬＴ），ａｓｐａｒ ｔａｔｅ ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ （ＡＳＴ）ａｎｄ ｈｕｍａｎ ａｌｐｈａ－ｆｅｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＦＰ）．Ｂａｍａ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｐｉｇ’Ｓ ｌｉｖｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ｆｏｒ ｈｅｍａｔｏｘｙｌ！ｎ－ ｅｏｓｉｎ（ＨＥ）ｓｔａｉｎｉｎｇ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｉｇ ｌｉｖｅｒ，ａｎｄ ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｏｆ ＨｅｐＧ２一Ｐｕｒｏ—ＧＦＰ
【摘要 】 目的 建 立 人 肝 癌 巴 马 小 型猪 异 种 移 植 模 型 ，探 索 人 肝 癌 细 胞 是 否 能在 猪 的肝 脏 中存 活 ， 为 建 立人 肿 瘤 细胞 异 种移 植 的大 动物 模 型 和临 床肿 瘤 治疗 、药物 试 验 等研 究奠 定 实验 基 础 。方 法 将表 达 ＧＦＰ的人 肝癌 细胞 通 过腹 腔镜 手 术注 入 １５只 肝部 分切 除 的 巴马 小型 猪 的肝实 质 中 。实验 分 为 ３组 （ＧＯ组 、 Ｇ１组 和 Ｇ２组 ）。ＧＯ组 为对 照组 ，巴马小 型猪 肝 脏实 行肝 部 分切 除术 后 注射 生理 盐水 ；Ｇ１组 巴马小 型猪 实 施肝 部 分 切 除术 后 注射 人 肝癌 细 胞 ；Ｇ２组 巴 马小 型猪 实 施肝 部 分 切 除术 后 注射 人 肝癌 细胞 ，术后 １２小 时 饲 喂免疫 抑 制剂 。定 期采 集各 组实 验动 物 的外周 血 ，检测 实验 动物 天冬 氨 酸转氨 酶 （ＡＳＴ）和丙 氨酸转 氨 酶 （ＡＬＴ）的变化 ，检 测血 清 中是否 存在 人类 甲胎蛋 白（ＡＦＰ）。对 巴马 小型 猪 的肝脏 进行 取材 ，苏 木素 一伊 红 （ＨＥ） 染 色 后 镜 下 观察 猪 肝组 织 病 理学 特 征 。对 实验 组 进行 绿 色 荧 光 蛋 白 （ＧＦＰ）免 疫 组 织化 学 染 色 ，检测 组 织 中是 否有人 肝癌 细胞 的嵌 合 。结果 各 组 巴马小型猪 的 ＡＳＴ和 ＡＬＴ指标在 术后 １４天恢复 到术前 水平 。ＧＦＰ免 疫组织 化学结 果显示 在 Ｇ１组 和 Ｇ２组 巴马小 型猪 的肝 脏 中均 能检测 到人肝癌 细胞 。酶 联免疫 吸附试验 （ＥＬＩＳＡ） 检 测结 果 显 示在 实 验 组 的外 周血 中可 以检 测 到人 ＡＦＰ的表 达 ，且 Ｇ２组 与 Ｇ１组相 比，差 异具 有 统计 学 意 义 ［ＡＦＰ （￣ｔｇ／Ｌ）：３９．５４－４－２０．３０比 １３．７７ ４－７．５２，Ｐ＜ ０．０５ Ｊｏ ＨＥ染 色 结 果 显 示 Ｇ１组 肝 组 织 出 现 淋 巴 细 胞 浸 润 和肝 细 胞 坏 死 。结 论 通 过猪 肝 原 位 移植 人 肝癌 细胞 的 方法 可 以建立 人 肝 癌 巴 马小 型 猪异 种 移 植模 型。 免疫 抑制 剂 能促进 移植 的细胞 存活 。
ｐｉｇ’Ｓ ｌｉｖｅｒ ｗｈｉｃｈ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｐａｒｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ ｂｙ ｌａｐａｒｏｓｃｏｐｉｃ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ．Ｅｘｐｅｒｉｍ ｅｎｔ ｗｅｒｅ
ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ（ＧＯ，Ｇ１ ａｎｄ Ｇ２）．Ｂａｍａ ｍｉｎｉａｔｕｒｅ ｐｉｇｓ ｉｎ ＧＯ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓａｌｉｎｅ ａｆｔｅｒ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｐａｒｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ（ｓｈａｍ）．Ｐｉｇｓ ｉｎ Ｇ１ ｗｅｒｅ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ＨｅｐＧ２一Ｐｕｍ—ＧＦＰ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｐａｒ ｔｉａｌ ｈｅｐａｔｅｃｔｏｍｙ．Ｆｉｎａｌｌｙ，ｐｉｇｓ ｉｎ Ｇ２ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｉｎｊｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ ＨｅＧ２一Ｐｕｒｏ—ＧＦＰ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔｅｄ ｐａｒｔｉａｌ