肉苁蓉中两种主要的苯乙醇苷类化合物

O
O
H3C
HO HO
O OH
OH O O
OH
来自百度文库
松果菊苷
Echinacoside 三糖苷
OH
麦角甾苷
OH
Acteoside
双糖苷
背景介绍
• 松果菊苷和麦角甾苷是各制药企业对肉苁蓉制剂 进行定性和定量控制的主要指标，其市场需求量 很大。
• 这2种化学对照品的商品市场价格昂贵（1～2万元 /克）。
• 本实验依据化合物性质成功地对两种化学对照品 进行分离纯化。
2. 物质在溶剂中的溶解度大，树脂对此物质的吸附力就小，反 之就大。
大孔吸附树脂
三、应用：
广泛应用于天然化合物如多糖、苷类等水溶性化合物的分 离和富集工作。
四、洗脱液的选择
最常用的水、乙醇， 此外甲醇、丙酮、乙酸乙酯也被应用。
本实验采用D101型大孔吸附树脂分离得到肉苁蓉苯乙醇总苷。
大孔吸附树脂洗脱程序
羟丙基葡聚糖凝胶
羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20）：它是葡聚糖 凝胶G-25分子中的羟基被羟丙基代替而形成的一种新型凝 胶。
OH
OCH2CH2CH2OH
根据松果菊苷和麦角甾苷分子量大小不同，可以用Sephadex LH-20凝胶过滤层析而将二者分离。
Sephadex LH-20分离松果菊苷与麦角甾苷
松果菊苷？ 麦角甾苷？
30%乙醇
50%乙醇
荧光薄层色谱
• 荧光薄层：有些化合物本身无色，在紫外灯下也不显荧 光，又无适当的显色剂时，则可在吸附剂中加入荧光物质 制成荧光薄层进行层析。展层后置于紫外光下照射，薄层 板本身显荧光，而样品斑点处不显荧光，即可检出样品的 层析位置。
• 本实验采用硅胶GF254薄层板对得到得到的松果菊苷和麦 角甾苷进行鉴定。
回流提取
• 回流提取是溶剂提取法定一种。溶剂提取法是根 据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用 对活性成分溶解度大，对不需要溶出成分溶解度 小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来 的方法。一般来说，极性大的物质选择用极性溶 剂提取，而极性小的化合物用低极性溶剂提取。
• 而肉苁蓉中苯乙醇苷类为多糖苷类化合物，极性 比较大，因此选用80%乙醇回流提取。
回流提取
大孔吸附树脂 (macroreticular resin，macroporous resin)
一、大孔吸附树脂：是一类不带交换基团的多孔性
交联聚合物，白色球形颗粒状。
CH2 CH CH2 CH CH2 CH
CH2 CH CH2 CH CH2 CH
以苯乙烯为母体，二乙烯苯为交联剂（非极性）
• 分离原理：按化合物极性大小分离。
GF254薄层板鉴定两种苯乙醇苷
CHCl3:CH3OH:H2O=6:4:0.5
思考题
• 1.大孔吸附树脂分离肉苁蓉总苷的作用是什么？
• 2.葡聚糖凝胶法制备两种化学对照品的原理是什 么？哪个化合物先流出，哪个后流出？
• 3.硅胶GF254薄层色谱中哪个化合物的比移值大？ 为什么？
盐生肉苁蓉C. salsa
肉苁蓉照片由新疆医科大学附属肿瘤医院杨建华博士提供。
背景介绍
• 肉从蓉总苷是肉苁蓉属植物的主要有效部位，为 类苯乙醇苷类化合物，具有补肾助阳、润肠通便、 抗疲劳、治疗老年性痴呆症等生理活性。
• 国际市场需求很大。
OR6
O
R5O R4O
O
R1
OR3
R2
背景介绍
HO
O
HO
肉苁蓉药材
实验内容与原理： 80%乙醇回流提取3次，每次1h
制备工艺路线
提取液 减压浓缩
浸膏 通过大孔吸附树脂，先水洗脱，后用
50%乙醇洗脱，收集50%洗脱流份
肉苁蓉总苷
通过Sephadex LH-20柱层析，用水：乙 醇梯度洗脱，分别收集30%与50%乙醇
流份
松果菊苷
麦角甾苷
硅胶GF254荧光板鉴定，展开剂 CHCl3:CH3OH:H2O=6:4:0.5
• 掌握苯乙醇苷类化合物的结构和性质。
• 熟悉新疆特色药材肉苁蓉的开发及利用。
背景介绍
肉苁蓉 Herba Cistanches为列当科Orobanchaceae肉苁蓉 属植物Cistanche 干燥带鳞叶的肉质茎。
具补肾阳、益精血、润肠通便、延年益寿等功效；疗效确 切，药性温和，补而不峻，养而不燥，自古就被视为强壮、 滋补的名贵中药，有“沙漠人参”之美誉。在历代补肾阳方 剂中出现的频率最高，在抗老防衰类中药处方中出现的机率 仅次于人参位居第二。
大孔吸附树脂
二、分离原理
吸附性与分子筛原理相结合的多孔性结构分离材料，其吸 附原理是基于范德华引力或氢键。吸附规律：
1. 分子量小、极性小的化合物与非极性大孔吸附树脂吸附作用 强。一般非极性化合物在水中易被非极性树脂吸附，极性化 合物在水中易被极性树脂吸附。能与大孔吸附树脂形成氢键 的化合物易吸附。
背景介绍
• 《中国药典》（2005年版）收载正品药材有： 荒漠肉苁蓉Cistanche deserticola 管花肉苁蓉C. tubulosa
• 历代本草记载的肉苁蓉原植物为 荒漠肉苁蓉 盐生肉苁蓉C. salsa 。
• 新疆是肉苁蓉的主要产区，肉苁蓉产量占全国总产量的50% 以上。盐生肉苁蓉是新疆的优势资源药材，在民间大量药用。
水
50%乙醇 部分
乙醇
水
大孔吸附树脂
四、特点：
（1）理化性质稳定，不受pH影响，可以反复使用。 （2）脱盐、脱色、脱臭。 （3）吸附量大。 （4）可再生，可反复使用。
葡聚糖凝胶
葡聚糖凝胶是由葡聚糖及交联剂交联聚 合而成。“分子筛”作用：将分子量大小不 同的化合物进行分离，化合物按分子量由大 到小顺序得到分离。
xx医科大学
天然药物化学实验
肉苁蓉中两种主要的苯乙醇苷类化合物 的分离与鉴定
xx医科大学药学院天然药物化学教研室
主要内容
• 实验目的 • 背景介绍 • 实验内容及原理 • 思考题 • 思考题参考答案 • 教学效果评价
实验目的
• 掌握回流提取法、大孔树脂吸附法、凝胶色谱法、薄层 色谱法在制备肉苁蓉中两个苯乙醇苷类化学对照品中的 原理和应用。
思考题参考答案
• 1. 大孔吸附树脂吸附肉苁蓉总苷，水洗脱糖类、盐类及水 溶性色素等杂质，再经50%乙醇洗脱，达到富集苯乙醇总 苷的作用。
• 2.葡聚糖凝胶是利用被分离物质分子量不同达到分离的作 用，分子量大的化合物先流出，分子量小的化合物后流出， 由于松果菊苷的分子量大于麦角甾苷，故而较麦角甾苷先 流出色谱柱。