基因工程 考试 重点 噬菌体载体

第二章 DNA重组克隆的单元操作

练习题

噬菌体载体(练习题)

一、填空题

1．噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面的原因：一是；二是。2．第一个报道的全测序的单链DNA 噬菌体是φX174，DNA 长5386 个碱基对，共个基因，为一环状DNA 分子，基因组的最大特点是。

3．λ噬菌体的基因组DNA 为kb，有多个基因。在体内，它有两种复制方式，扩增时(早期复制)按复制，成熟包装(晚期复制)则是按复制。它有一个复制起点，进行向复制。λ噬菌体的DNA 既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然成环。其原因主要是在λ噬菌体线性DNA 分子的两端各有一个个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的黏性末端部位就叫做位点。4．根据噬菌体的包装能力，将野生型λ噬菌体的基因组DNA 改造成插入型载体，该载体的最小分子大小约为kb，插入的外源片段最大不超过kb。

5．野生型的M13 不适合用作基因工程载体，主要原因是和。

6．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS 位点序列来

自，最大的克隆片段达到kb。

7．有两类改造型的λ噬菌体载体，即插入型和取代型。从酶切点看，插入型为个，取代型为个。

8．野生型的丸噬菌体DNA 不宜作为基因工程载体，原因是：(1) (2) (3) 。9．M13 单链噬菌体的复制分为三个阶段：(1) (2) (3) 。10．噬菌粒是由质粒和噬菌体DNA 共同构成的，其中来自质粒的主要结构是，而来自噬菌体的主要结构是。

11 ．M13 单链噬菌体基因2 和基因4 之间的IG 区有三个最重要的功能，即(1)

(2) (3) 。

12．野生型的M13 有10 个基因，分为三个功能集团，其中与复制有关的两个基因是：和。

13．以λ噬菌体载体和黏粒载体构建文库时，起始DNA 的长度是不同的，前者为

kb，后者为kb。

14．λ噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA 片段后，总的长度应在噬菌体基因组的的范围内。

二、判断题

1. 取代型载体(replacement vector)是指同一种限制性内切核酸酶在),DNA 中具有两个切

点，外源DNA 通过取代这两个切点间的片段被克隆。

2. 现在最常用的pUC 载体是pUCl8,它的分子量小，具有多克隆位点和易于选择的分子标记，并且是松弛型复制。另外，这种载体可在辅助质粒的帮助下合成单链DNA。

3. 噬菌粒(phagemid)pUCll8／pUCll9 载体是集质粒和丝状噬菌体有利特征于一身的载体，既能合成单链DNA,又能合成双链DNA。

4. λ噬菌体DNA 和M13 单链噬菌体DNA 在成熟前的DNA 复制都是用滚环模型。

5. M13 噬菌体每个世代裂解宿主后，可释放100 个子代噬菌体。

6. 以黏粒为载体的重组体虽然在平板上生长的速度不同，但是转化子中插入片段的扩增量

是相同的。

三、选择题(单选或多选)

1. 限制性内切核酸酶EcoRI 在野生型的丸噬菌体DNA 中有5 个切点、Hind Ⅲ有7 个切点，BamH I 也有5 个切点。调整这些酶切位点的数量，主要通过( )

(a)体内突变(b)完全酶切后连接

(c)部分酶切(d)先用甲基化酶修饰后再酶切

2. PBluescript Ml3 载体在多克隆位点的两侧引入了T7 和T3 两个噬菌体的启动子，这样

增加了该载体的功能，如：

(a) 可以对插入到多克隆位点的外源片段进行转录分析

(b) 利用这两个启动子的通用引物进行PCR 扩增

(c) 利用通用引物进行序列分析

(d) 利用这两个启动子进行定点突变

上述四种功能中哪一种是不正确的?( )

3. 下面关于细菌人工染色体(BAC)的特征描述，除了( C )外都是正确的。

(a) 通过电激法将大质粒转化大肠杆菌比酵母的转化率提高了10—100 倍

(b) BAC 载体在细菌中以环形超螺旋状态存在，使分离操作起来相对容易

(c) BAC 载体在大肠杆菌宿主保持高拷贝

(d) 克隆到BAC 载体上的外源片段可以直接进行测序以获得末端序列

4. 以黏粒为载体转染受体菌后，平板上生长的菌落会大小不一、生长速度不一的现象，其原因是( )

(a) 营养成分不足

(b) 重组后的质粒复制不稳定

(c) 重组后的黏粒整合到宿主染色体上

(d) 重组体中插入片段的大小不同

5. M13K07 是一种辅助噬菌体DNA,可用它帮助噬菌粒制备单链DNA,这是因为( )

(a) M13K07 能够进行滚环复制，得到大量的单链噬菌体DNA

(b) M13K07 能够提供成熟包装的蛋白

(c) M13K07 提供了成熟包装所需的信号

(d) M13K07 的10 个基因都是正常的

6. 黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体，( )

(a) 它具有COS 位点，因而可进行体外包装

(b) 它具有质粒DNA 的复制特性

(c) 进入受体细胞后，可引起裂解反应

(d) 进入受体细胞后，可引起溶源化反应

7．Mu 噬菌体也是一种转座元件，这种转座元件( )

（a）可引起寄主的突变

（b）可用于细胞内的基因工程

（c）具有转座酶基因

（d）以上说法都正确

8．关于M13 的IGIX,下列说法中哪一项不妥当?( )

(a) 具有正负链的复制起点

(b) 具有噬菌体DNA 被包装的信号

(c) 具有150 个碱基的AT 富集区

(d) 具有八个回文序列，可形成五个发夹环