厌氧菌培养与鉴定技术

ANAEROBIC/HYPOXEMIC WORKSTATION

历史：

所有这些罐子，其培养皿/样本操作均在有氧环境中进行，而仅在培养时才置于厌氧环境中。

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完善的厌氧培养技术始于适当的样本采集和运输。

适当地采集试样，并快速置于

厌氧运输小瓶中

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厌氧罐由于不能提供操作过程的厌氧环境，并且因容量的限制而无法实现灵活的样本厌氧培养，故其应用也越来越受到限制。

一台允许所有操作与培养综合

功能的厌氧工作站使厌氧菌实

验避免了氧气暴露的风险。

因不当的制备或贮存，使培养介质含有氧气或氧化性物质，最终将抑制厌氧菌的生长。

任何时候都应当使用经预还原

处理的厌氧培养介质。

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专性厌氧菌培养最好是在经预还原处理且厌氧灭菌的培养基上（PRAS培养基）。

养肉汤。预还原是指氧气通过

培养基组分物质化学移除。

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以下为常见的主要用于临床标本厌氧菌分离的培养基：

1、布鲁氏菌血琼脂

2、卡那霉素/万古霉素血琼脂（KVLB琼脂）

3、拟杆菌属胆汁七叶甙琼脂（BBE琼脂）

4、苯乙醇琼脂（PEA琼脂）

5、硫乙醇酸钠肉汤

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布鲁氏菌血琼脂：

含有血细胞允许溶血试验，可使特定微生物快速生长

非选择性培养基，所有厌氧菌均能很好生长

同样，疾病预防控制中心的厌

氧菌血琼脂也可被

使用。

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卡那霉素/万古霉素血琼脂（KVLB ）：

革兰氏阴性厌氧杆菌选择性培养基。绝大多数的革兰氏阴性兼性厌氧杆菌被卡那霉素抑制，绝大多数革兰氏阳性菌被万古霉素抑制。

产色厌氧菌（如普雷沃菌属和

卟啉单胞菌属）在KVLB 琼脂

上产生许多色素

。

ELECTROTEK 拟杆菌属胆汁七叶甙琼脂（BBE ）：

绝大多数厌氧菌被庆大霉素和胆汁抑制，只有脆弱拟杆菌群作为唯一的厌氧菌能在此琼脂上快速生长。

当细菌（如脆弱拟杆菌群）分

解七叶甙而生长于此琼脂上

时，将显现深棕色反

应。

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苯乙醇琼脂（PEA ）：

该介质支持绝大多数专性厌氧菌生长且抑制兼性厌氧菌生长（如肠杆菌科），专性厌氧菌可呈弥漫性或过度生长。

有效成分苯乙醇通过干扰DNA 合成来抑制或显著减少革兰氏阴性菌生长，PEA 也能阴止变形杆菌属在琼脂表面迁徒状生

长。

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硫乙醇酸钠肉汤：

仅用于富集培养或样品备份培养。

硫乙醇酸钠肉汤支持专性厌氧菌生长，但常常受到兼性厌氧菌的竞争性抑

制。

其它培养基：

蛋黄琼脂

环丝氨酸/头孢西丁/果糖琼脂（CCFA）

这些培养基被用于特殊情况下的原始培养，如临床建议或怀疑标本革兰氏染色。

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蛋黄琼脂：

如果怀疑梭菌属（如产气荚膜梭菌等），蛋黄琼脂基于微生物卵磷酶和脂肪酶的特性反应来区分厌氧菌种类。

梭菌属各群菌均为革兰氏阳性且能形成芽胞

。

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环丝氨酸/头孢西丁/果糖琼脂（CCFA ）：用于对粪样中很难区分的梭菌属菌进行分离培养。

基础营养包含动物蛋白胨和果糖，再通过头孢西丁和环丝氨酸对于粪样中绝大多数的普通菌进行抑

制。

本部分旨在提供一个快速从标本原始培养物中进行常规的识别与分离方法。本指南将是一个综述或是你习惯鉴定方法的补充，但其并不能取代原鉴定方法，一旦出现矛盾，实际操作还应当遵从原鉴定方法。

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有许多检验科/实验室大量地依赖快速鉴定系统（如AN-IDENT ，RapID-ANA II ）由纯培养物中鉴定常规致病

菌。

如果这些系统使用惯例方法，就是最佳的。但终因其技术的高成本费用，而并不完美。

对于大多数常见致病菌而言，在花费与快速鉴定系统同样的时间使用特殊培养基就已足够进行鉴定。

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根据对常规分离平板上菌落生长的观察，实验者对于每个曲型菌落进行革兰氏染色，染色的结果是各种鉴定方法的起点。

革兰氏染色（或革兰氏细菌染色法）是一项经典的经验方法，它基于细菌细胞壁化学物理性质不同而将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大种类

。

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革兰氏阳性球菌：

分离菌株革兰氏阳性球菌的存在将导致检验者怀疑为消化链球菌属，所有分离菌株（无论革兰氏染色的形态）均需进行耐氧性测试。

消化链球菌是一种厌氧的，无芽胞的，革兰氏阳性球菌。属于人体皮肤与粘膜表面的正常菌群

。

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革兰氏阳性球菌：

革兰氏阳性球菌的进一步鉴定，分离菌株将转种于含有多茴香脑磺酸钠（PSP ）的布鲁氏菌琼脂平板和厌氧血琼脂平板上。

球菌（复数球菌）可用来描述所有拥有球形的细菌，它是细菌三种基本形态之一，另外两种分别是杆菌（棒状）和螺旋菌（螺旋形）

。

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革兰氏阳性杆菌：

革兰氏阳性杆菌可被革兰氏染色形态学进一步区分。

形态学是细菌外观的描述，其包括形状、颜色、聚集模式以及是否存在内部结构

。