PDT诱导细胞凋亡和坏死的研究

用 ４ 物镜 成像 ， ０倍 数值 孔径 （ Ａቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ １２ Ｎ 为 ． ．在本 文 的
实验 条 件 下 ， Ｃ Ｄｃ ｌ ｏｉｙ ｒｎ ０ｅｃｉ ） 用 Ｄ Ｆ（ ｉ ｏ ｄｈ ｄｏ ｕ ｒｓｅｎ 均 ｈｒ ４ ８ｎ 的氩离 子激光 器作 为激 发 光 源 ， ８ ｍ 吸收 滤 光块
选用 Ｂ ５ ０—５ ０ ｏｃ ｓ ３ ２ ８ Ｐ （ ｇ ｍ ） Ｐ０ ５ ．Ｈ ｅｈ ｔ ３ ５ ／ Ｉ １ ／ Ｌ 采
处理 在不 同光 敏 剂 剂 量 下 诱 导 细胞 死 亡 的不 同方
式， 以及触 发不 同死 亡方式 的机制 ．
用 汞灯作 为激 发光 源 ， 发 滤 光块 为 ３ ０～ ８ ｍ， 激 ３ ３０ｎ 采集 滤光块 为 Ｂ ３ ｍ． Ａ ４ ５ｎ
１４ 流式 细胞 术检 测细胞 凋 亡和坏 死 ． 采用 Ａ ｎｘｎＶ— ＩＣＡ ｏ ｔｓ ｅ ｃｉ ｉ试 ｎ ｅｉ ＦＴ ｐ ｐｏｉ Ｄ ｔ ｔ ｎＫｔ ｓ ｅ ｏ
出 内含物 ， 并常 引起 炎症反 应 ． 本 文 主要研 究 在激 光 剂 量 恒 定 的 情 况 下 ， Ｄ ＰＴ
实验 样 品在 Ｚ ｉ ｅ ｓ公 司 Ｌ Ｍ １ Ｅ Ａ 型 激 光 ｓ Ｓ ５０ Ｍ Ｔ 扫描共 聚 焦显微 镜 （ ｅ ｓＪｎ ， ｅｍａｙ 上 检 测 ， Ｚ ｉ ，ｅａ Ｇ ｒ ｎ ） ｓ 采
关键 词 ： 光动力治疗；凋亡 ； 死；活性氧 坏
中 图 分 类 号 ：６ １ Ｑ ３ 文 献 标 志码 ： Ａ ｄｉ１ ．０ ４ ｊｊ ｎ ｎ２ １ ．５ ０ ３ ｏ：０ ６ ５／．ｓ ｕ ．０２ ０ ．２ ｃ
光 动 力 疗 法 （ ｈｔｄ ｎｍｉ ｔｅ ｐ ， Ｄ 已 成 Ｐ ｏ ｙ ａ ｃ ｈ ｒ ｙ Ｐ Ｔ） ｏ ａ
养箱 ．细胞 达到 ７ ％ ～ ５ ０ ８ ％覆 盖率 时可进 行试 验． １２ 光动 力学 治疗 诱导 细胞 死亡 ．
细胞 在正 常培 养条件 下避 光孵 育线 粒体靶 向性 光敏 剂 Ｐｏｏ ｉ ２ ， 用 Ｐ Ｓ清洗 剩 余 的 光 敏 ｈｔｒ ０ｈ 后 ｆｎ Ｂ
剂， 更换 正 常 培 养 基 ， 备 试 验．激 光 照 射参 数 为 ： 准
华南师范大学学报 （自然科 学版 ）
２１ ０ ２年 ５月
Ｍａ ０１ ｖ２ ２
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＯＵＴ Ｃ ＮＡ Ｓ Ｈ ＨＩ ＮＯＲＭＡＬ ＵＮＩ ＶＥＲＳＴ Ｉ Ｙ
第４ ４卷 第 ２期
Ｖｏ ． Ｎｏ． Ｉ４４ ２
（ Ａ Ｕ Ａ Ｃ Ｅ Ｅ Ｅ Ｉ Ｉ Ｎ） Ｎ Ｔ Ｒ Ｌ Ｓ Ｉ ＮＣ Ｄ Ｔ Ｏ
半 导 体 激 光 器 （ ３ ｍ， Ｌ—Ｆ Ａ 一２ ０ —６５ ６５ ｎ Ｎ Ｂ ． ３， ｎ ｉｈ Ｐ ｏ ｎｃ ｏ ｏａ ｏ ， ａ ｃｕ ｅ， Ｌｇ ｔ ｈ ｔ ｉｓＣ ｒ ｒｔ ｎ Ｖ ｎｏ ｖｒ ＷＡ） 照 射 ｏ ｐ ｉ ， 时 间 ３ ， ０Ｓ剂量 为 ５Ｊｃ 光 敏剂 剂量梯 度 为 ５ ０～ ／ｍ ， ．
摘要 ： 利用 光 动 力 疗 法 （ ｈ ｔ ｙ ａ ｃｔｅａｙ Ｐ Ｔ 诱 导 细 胞 凋 亡 和 细 胞 坏 死 ， 细胞 死 亡 方 式 与 Ｐ Ｔ 的 剂 量 有 密切 Ｐ ｏ ｄｎｍｉ ｈｒｐ ， Ｄ ） ｏ 其 Ｄ
相关 ， 较低 的剂量诱 导细胞凋 亡， 较高 的剂量诱导细胞坏死．细胞 凋亡和坏死 的产 生可 能取 决于 Ｐ Ｔ刺 激诱 导对细 Ｄ 胞 内产生活性氧 的速度．研 究结果 对 Ｐ Ｔ细胞层面杀伤机制提供重要依据． Ｄ
激发光 为 ４ ８ｎ ８ ｍ．ＦＴ 的采 集 滤 光块 为 Ｂ １ ＩＣ Ｐ ５５～
培 养 条 件 为 ： ｕｂ ｃｏ ｄｆ ｄ Ｅ ｇｅ ｅ ｉｍ Ｄ ｌｅｃ ’ ｍｏ ｉｅ ａｌＳ ｍ ｄｕ Ｓ ｉ ’ （ ＭＥ 培 养基 含 １ ％胎 牛血清 （ Ｉ Ｃ ｏ Ｔ Ｄ Ｍ） ５ Ｇ Ｂ Ｏ Ｃ ．Ｌ Ｄ，
２ ０ ０． ｍＬ．
１３ 单层 贴壁 细胞 样 品荧光 显微成 像 ．
缺氧与 营养 不 良等均 导致 细胞 坏死 ，坏死 细 胞 的 膜 通透 性增 高 ， 致使 细 胞 肿 胀 ， 胞 器 变形 或 肿 大 ， 细 早 期核 无 明 显 形 态 学 变 化 ， 后 细 胞 破 裂 ， 放 最 释
文章 编 号 ： ００— ４ ３ ２ １ ）２— １３— ４ １０ ５ ６ （０ ２ ０ ０ ０ ０
Ｐ Ｔ诱 导 细 胞 凋 亡 和 坏 死 的 研 究 Ｄ
吴胜男 ， 周非凡
（ 华南师范大学生物光子学研究院激光生命科学研究所 ， 激光生命科学教育部重点实验 室， 东广州 ５０３ ） 广 １６１
１ 材 料 与 方 法
１ １ 细胞 培养 ． 人 肺 腺 癌 细 胞 （ ｕ ｎ ｌｎ ｄｎ ｃｒｉｏ ａ Ｈ ｍａ ｕ ｇ ａ ｅ ｏａｃ ｍ ｎ
ｃｌ ， Ｓ Ｃ—ａ一１ 由暨南 大 学 医学 院药 学 系馈 赠 ． ｅ ｓＡ Ｔ ｌ ）
剂盒 （ ＤＰ ａＭｎｅ ， ａ ｉ ｏ Ａ） Ｂ ｈｒ ｉｇｎ ＳｎＤｅ ，Ｃ ．使用 Ｆ Ｃ — ｇ Ａ Ｓ ｃｎ Ｉ ａｔ Ｉ流式 细胞 仪 （ Ｄ Ｂｏｃ ｎｅ ａ ｏｅ Ａ） ｏ Ｂ ｉ ｉ ｃ，ＳｎＪｓ，Ｃ ． ｓｅ
为治疗肿瘤 的一项常规手段¨ ， Ｊ具有创伤小 、 毒性
低 、 择性 和适用 性 好 、 选 可重 复 治 疗 、 协 同 手术 提 可 高疗效 等多 个优 点 ¨ ．Ｐ Ｔ的作 用基 础 是光 动 力效 Ｊ Ｄ 应 ， 是一 种 由氧分 子参 与 的光敏化 反应 ． 这 近年 研 究发 现 放 、 疗 等多 种 抗 肿瘤 治 疗 的部 化 分 机制 与诱 导 细胞 凋 亡 有 关 ．因此 ， 明凋 亡 的 探 相 关机 制 以及利 用凋 亡机制 对肿 瘤进 行 治疗具 有重 要 意义 ． 期 以来 ， 胞 坏 死 被 认 为 是 因 病 理 而 长 细 产 生 的被动 死亡 ， 物 理 性 或化 学 性 的损 害 因 子及 如