油菜籽中硫苷的测定方法研究
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1 材料与方法
1 .1 主要仪器与试剂 仪器：高效液相色谱仪（日立），紫外检测器。 主要试剂：四丁基溴化铵（分析纯，上海化学
试剂公司总经销）；烯丙基硫苷，硫酸脂酶（均为色
谱纯，美国 SI GMA 化学公司生产）；其它常用试 剂（均为分析纯）；水（为重蒸馏水）。 1 .2 样品预处理
反 相 离 子 对 色 谱 法：精 确 称 取 脱 脂 菜 籽 0 .4000 g 于干燥有刻度试管中，在沸水中干蒸10 mi n 后加入8 ml 沸水提取20 mi n ，冷却后加入内 标物溶液1 ml（烯丙基硫苷，1 mmOl／L ），再加入 0 .5 mOl／L 醋酸铅和醋酸钡混合液1 ml ，摇匀后 水浴上温热，放置稍冷后离心10 mi n 。取上清液 2 .5 ml 加入到 DEAE - 葡聚糖凝胶 A - 25（!5 mm> 100 mm）层析小柱中，待溶液流干后，用约 5 ml 醋 酸 吡 啶 洗 涤，再 用 重 蒸 水 洗 涤。最 后 用 0 .5 mOl／L 硫酸钾溶液4 ml 洗脱，收集洗脱液并 定容到10 ml ，摇匀后用微孔过滤器过滤，滤液供 色谱分析。与此同时进行反相色谱法的样品预处 理，用作对照。
项目
反相离子对色谱法测定结果
1
2
3
4
5
6
反相色谱法测定结果
1
2
3
4
5
6
平均数
62 .31
- 14 .35 35 .31 1 .26 1 .53 62 .57
- 15 .00 36 .29 1 .23 1 .54
标准偏差
7 .46
-
0 .69 1 .31 0 .09 0 .09
7 .64 -
3 .17 1 .54 0 .11 0 .20
A= -4 315 .1 + 104 205 .4 C ，r = 0 .9994 由线性方程显示：该方法最适合的分析范围
是12 . 5 "62 . 5 !mol／L ，其 最 低 检 测 限 为 2 . 5 !mol／L 。 2 .2 .2 两种测定方法的比较 同一样品分别用 反相离子对色谱法和反相色谱法重复分析，结果
硫苷的各种条件因子，得出了使6 种硫苷组分获 得较好分离的最佳色谱条件；并在仅有烯丙基硫 苷作内标的情况下，对各组分进行了定性和定量 分析；该方法免除了硫酸酯酶的脱硫酸根过程，大 大简化了样品处理操作步骤，降低了分析测试费，
参考文献：
［1 ］ 吴谋成. 气相和液相色谱测定油菜籽（饼）中硫代葡 萄糖苷［J ］. 色谱，1988 ，6（6 ）：321 -324 .
1 ：2 - 羟基3 - 丁烯基硫苷；2 ：烯丙基硫苷；3 ：2 - 羟基4 - 戊烯 基硫苷；4 ：3 - 丁烯基硫苷；5 ：4 - 羟基3 - 甲基吲哚硫苷；6 ：4 戊烯基硫苷
附图 油菜籽中硫苷分离的色谱图
2 .2 定性定量分析 2 .2 .1 线性关系 在样品预处理过程中，分别加 入烯丙基硫苷（作内标液，浓度为 1 . 0 mmol／L ） 0 .5 ，1 .0 ，1 .5 ，2 .0 ，2 .5 ml 配成标准系列，分别以 其峰面积（A）和对应浓度（C ）进行回归分析得回 归方程和相关系数。
2002 年第6 期
油菜籽中硫苷的测定方法研究
彭爱娟1 ，梁月丽1 ，李巧枝1 ，郝东波2 ，吴谋成3
（1 郑州牧业工程高等专科学校，郑州 450008 ；2 郑州高新技术开发区；3 华中农业大学）
油菜籽中一般含有10 多种硫苷，而目前常用 测定硫苷的反相色谱法［1 ］难以准确测定其中的 吲哚类硫苷，因为在样品预处理时要用硫酸酯酶 对硫苷脱硫酸根，因此，样品处理要放置过夜，使 硫苷由离 子 型 物 质 转 化 为 醇 类 物 质 后 再 上 机 分 析。另外其操作步骤繁琐，耗时过多。有报道采 用反相离子对色谱法可直接测定十字花科植物中 完整的硫苷［2 ］，这种方法优点在于样品处理不需 要用硫酸酯酶对硫苷脱硫酸根，当日处理的样品 即可上机分析，但对油菜籽中硫苷测定方法尚未 完全建立起来。本实验在此基础上对反相离子对 色谱法测定油菜籽中硫苷的各种色谱条件、定性 定量分析进行了研究。
变异系数
12 .00
-
4 .80 3 .70 7 .10 5 .90 12 .30 - 21 .10 4 .20 8 .90 13 .00
注：表中1 "6 为不同组分速度不稳等有关，有 待进一步探讨。
3 结论 实验研究了反相离子对色谱法测定油菜籽中
也提高 了 分 析 速 度。 该 实 验 建 立 了 一 种 较 为 简 便、快速、准确、实用的测定硫苷的方法，为研究硫 苷组成提供了更有效的分析依据。该方法已应用 于不同色谱仪器型号上，色谱条件基本稳定，但仍 需在操作方面规范、完善。
［2 ］ 李建凡. 十字花科植物中完整硫代葡萄糖苷的分离 和测定［J ］. 中国农业科学，1989 ，22（3 ）：87 -93 .
·38 ·
油菜籽中硫苷的测定方法研究
作者： 作者单位：
刊名： 英文刊名： 年，卷(期)：
彭爱娟， 梁月丽， 李巧枝， 郝东波， 吴谋成 彭爱娟,梁月丽,李巧枝(郑州牧业工程高等专科学校,郑州,450008)， 郝东波(郑州高新 技术开发区)， 吴谋成(华中农业大学)
其皮周围毛层内的静空气层，使隔热性能下降，并可使空 气经翅下、胸腹下流过，增加对流、传导和蒸发散热。非花 墙鸭舍，可通过加大换气扇功率纵向通风，结合喷洒冷水， 效果更好。
物缓解热应激，只能通过日粮中加入营养性药物来缓解。
生产实 践 证 明，在 日 粮 中 加 入 VE（40 "80 mg／kg ）、Vc （0 .02 % ）、VB（0 .1 % 复合 B 族）、电解质平衡剂等可有效
3 .6 加强饲养管理 良好的饲 养 管 理，可 有 效 地 防 止 或 减 轻 热 应 激 的 发
生。肉用种鸭作为种用水禽，不能用非营养性药物（如镇 静药等）来缓解热应激，也不易通过饮水中添加营养性药
［1 ］ 张心如，杜干英. 家禽热应激的影响因素与应对措施 ［J ］. 畜禽业，2001（6 ）：22 -24 .
缓解热应激，增强机体体质。另外，在日粮中加入0 .8 % CaSO4（碎小颗粒）和1 % 生石骨粉，可提高 Ca 的利用率， 缓解热应激。也可减少日粮容积，增加营养物质浓度，防
3 .5 降低饲养密度 如果降温条件有限，可降低平时饲养密度的15 % ，以
调节舍内鸭产热散热，达到减轻热应激的目的。
止生产性能的下降。 参考文献：
［2 ］ 艾国良，单柏舟. 家禽热应激饲养管理缓解方法［J ］. 畜禽业，2001（6 ）：24 -25 .
·37 ·
河南农业科学
通过正交设计实验、对实验结果综合分析，得 出了使6 种硫苷组分获得较好分离的最佳色谱条 件：流动相是含4 .5 mmol／L 四丁溴化铵的0 .02 mol／L 磷酸缓冲液（p ~ = 6 ）和乙腈（90／10 ，v／v ）； 流速 为 1 ml／mi n ；色 谱 柱 为 Y WG - C18 ~37（10 !m，250 mm> 4 mm）；柱温为30 C 。分离结果见 附图。
见附表。
由附表可知，实验组测定硫苷各组分所对应
的标准偏差和变异系数均比对照组小，说明反相
离子对色谱法具有较好的精密度和准确度。
在上述研究的基础上，又选用不同油菜籽样
品进行了测定，均获得满意结果。经验证：不同样
品分别用反相离子对色谱法和反相色谱法测定多
次，其结果基本上相符。有个别相差偏大的原因
附表 两种测定方法的比较（!mol／g ）
河南农业科学 JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES 2002(6)
参考文献(2条) 1.李建凡 十字花科植物中完整硫代葡萄糖苷的分离和测定 1989(03) 2.吴谋成 气相和液相色谱测定油菜籽(饼)中硫代葡萄糖苷 1988(06)
本文链接：/Periodical_hnnykx200206019.aspx
2 结果与分析
2 .1 色谱条件的研究
收稿日期：2001 -11 -12 作者简介：彭爱娟（1963 - ），女，硕士，讲师，主要从事分析测试工作。
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
3 .4 加强通风换气 加大通风强度，促进舍内空气流通，使鸭羽散乱，破坏
1 .1 主要仪器与试剂 仪器：高效液相色谱仪（日立），紫外检测器。 主要试剂：四丁基溴化铵（分析纯，上海化学
试剂公司总经销）；烯丙基硫苷，硫酸脂酶（均为色
谱纯，美国 SI GMA 化学公司生产）；其它常用试 剂（均为分析纯）；水（为重蒸馏水）。 1 .2 样品预处理
反 相 离 子 对 色 谱 法：精 确 称 取 脱 脂 菜 籽 0 .4000 g 于干燥有刻度试管中，在沸水中干蒸10 mi n 后加入8 ml 沸水提取20 mi n ，冷却后加入内 标物溶液1 ml（烯丙基硫苷，1 mmOl／L ），再加入 0 .5 mOl／L 醋酸铅和醋酸钡混合液1 ml ，摇匀后 水浴上温热，放置稍冷后离心10 mi n 。取上清液 2 .5 ml 加入到 DEAE - 葡聚糖凝胶 A - 25（!5 mm> 100 mm）层析小柱中，待溶液流干后，用约 5 ml 醋 酸 吡 啶 洗 涤，再 用 重 蒸 水 洗 涤。最 后 用 0 .5 mOl／L 硫酸钾溶液4 ml 洗脱，收集洗脱液并 定容到10 ml ，摇匀后用微孔过滤器过滤，滤液供 色谱分析。与此同时进行反相色谱法的样品预处 理，用作对照。
项目
反相离子对色谱法测定结果
1
2
3
4
5
6
反相色谱法测定结果
1
2
3
4
5
6
平均数
62 .31
- 14 .35 35 .31 1 .26 1 .53 62 .57
- 15 .00 36 .29 1 .23 1 .54
标准偏差
7 .46
-
0 .69 1 .31 0 .09 0 .09
7 .64 -
3 .17 1 .54 0 .11 0 .20
A= -4 315 .1 + 104 205 .4 C ，r = 0 .9994 由线性方程显示：该方法最适合的分析范围
是12 . 5 "62 . 5 !mol／L ，其 最 低 检 测 限 为 2 . 5 !mol／L 。 2 .2 .2 两种测定方法的比较 同一样品分别用 反相离子对色谱法和反相色谱法重复分析，结果
硫苷的各种条件因子，得出了使6 种硫苷组分获 得较好分离的最佳色谱条件；并在仅有烯丙基硫 苷作内标的情况下，对各组分进行了定性和定量 分析；该方法免除了硫酸酯酶的脱硫酸根过程，大 大简化了样品处理操作步骤，降低了分析测试费，
参考文献：
［1 ］ 吴谋成. 气相和液相色谱测定油菜籽（饼）中硫代葡 萄糖苷［J ］. 色谱，1988 ，6（6 ）：321 -324 .
1 ：2 - 羟基3 - 丁烯基硫苷；2 ：烯丙基硫苷；3 ：2 - 羟基4 - 戊烯 基硫苷；4 ：3 - 丁烯基硫苷；5 ：4 - 羟基3 - 甲基吲哚硫苷；6 ：4 戊烯基硫苷
附图 油菜籽中硫苷分离的色谱图
2 .2 定性定量分析 2 .2 .1 线性关系 在样品预处理过程中，分别加 入烯丙基硫苷（作内标液，浓度为 1 . 0 mmol／L ） 0 .5 ，1 .0 ，1 .5 ，2 .0 ，2 .5 ml 配成标准系列，分别以 其峰面积（A）和对应浓度（C ）进行回归分析得回 归方程和相关系数。
2002 年第6 期
油菜籽中硫苷的测定方法研究
彭爱娟1 ，梁月丽1 ，李巧枝1 ，郝东波2 ，吴谋成3
（1 郑州牧业工程高等专科学校，郑州 450008 ；2 郑州高新技术开发区；3 华中农业大学）
油菜籽中一般含有10 多种硫苷，而目前常用 测定硫苷的反相色谱法［1 ］难以准确测定其中的 吲哚类硫苷，因为在样品预处理时要用硫酸酯酶 对硫苷脱硫酸根，因此，样品处理要放置过夜，使 硫苷由离 子 型 物 质 转 化 为 醇 类 物 质 后 再 上 机 分 析。另外其操作步骤繁琐，耗时过多。有报道采 用反相离子对色谱法可直接测定十字花科植物中 完整的硫苷［2 ］，这种方法优点在于样品处理不需 要用硫酸酯酶对硫苷脱硫酸根，当日处理的样品 即可上机分析，但对油菜籽中硫苷测定方法尚未 完全建立起来。本实验在此基础上对反相离子对 色谱法测定油菜籽中硫苷的各种色谱条件、定性 定量分析进行了研究。
变异系数
12 .00
-
4 .80 3 .70 7 .10 5 .90 12 .30 - 21 .10 4 .20 8 .90 13 .00
注：表中1 "6 为不同组分速度不稳等有关，有 待进一步探讨。
3 结论 实验研究了反相离子对色谱法测定油菜籽中
也提高 了 分 析 速 度。 该 实 验 建 立 了 一 种 较 为 简 便、快速、准确、实用的测定硫苷的方法，为研究硫 苷组成提供了更有效的分析依据。该方法已应用 于不同色谱仪器型号上，色谱条件基本稳定，但仍 需在操作方面规范、完善。
［2 ］ 李建凡. 十字花科植物中完整硫代葡萄糖苷的分离 和测定［J ］. 中国农业科学，1989 ，22（3 ）：87 -93 .
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油菜籽中硫苷的测定方法研究
作者： 作者单位：
刊名： 英文刊名： 年，卷(期)：
彭爱娟， 梁月丽， 李巧枝， 郝东波， 吴谋成 彭爱娟,梁月丽,李巧枝(郑州牧业工程高等专科学校,郑州,450008)， 郝东波(郑州高新 技术开发区)， 吴谋成(华中农业大学)
其皮周围毛层内的静空气层，使隔热性能下降，并可使空 气经翅下、胸腹下流过，增加对流、传导和蒸发散热。非花 墙鸭舍，可通过加大换气扇功率纵向通风，结合喷洒冷水， 效果更好。
物缓解热应激，只能通过日粮中加入营养性药物来缓解。
生产实 践 证 明，在 日 粮 中 加 入 VE（40 "80 mg／kg ）、Vc （0 .02 % ）、VB（0 .1 % 复合 B 族）、电解质平衡剂等可有效
3 .6 加强饲养管理 良好的饲 养 管 理，可 有 效 地 防 止 或 减 轻 热 应 激 的 发
生。肉用种鸭作为种用水禽，不能用非营养性药物（如镇 静药等）来缓解热应激，也不易通过饮水中添加营养性药
［1 ］ 张心如，杜干英. 家禽热应激的影响因素与应对措施 ［J ］. 畜禽业，2001（6 ）：22 -24 .
缓解热应激，增强机体体质。另外，在日粮中加入0 .8 % CaSO4（碎小颗粒）和1 % 生石骨粉，可提高 Ca 的利用率， 缓解热应激。也可减少日粮容积，增加营养物质浓度，防
3 .5 降低饲养密度 如果降温条件有限，可降低平时饲养密度的15 % ，以
调节舍内鸭产热散热，达到减轻热应激的目的。
止生产性能的下降。 参考文献：
［2 ］ 艾国良，单柏舟. 家禽热应激饲养管理缓解方法［J ］. 畜禽业，2001（6 ）：24 -25 .
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河南农业科学
通过正交设计实验、对实验结果综合分析，得 出了使6 种硫苷组分获得较好分离的最佳色谱条 件：流动相是含4 .5 mmol／L 四丁溴化铵的0 .02 mol／L 磷酸缓冲液（p ~ = 6 ）和乙腈（90／10 ，v／v ）； 流速 为 1 ml／mi n ；色 谱 柱 为 Y WG - C18 ~37（10 !m，250 mm> 4 mm）；柱温为30 C 。分离结果见 附图。
见附表。
由附表可知，实验组测定硫苷各组分所对应
的标准偏差和变异系数均比对照组小，说明反相
离子对色谱法具有较好的精密度和准确度。
在上述研究的基础上，又选用不同油菜籽样
品进行了测定，均获得满意结果。经验证：不同样
品分别用反相离子对色谱法和反相色谱法测定多
次，其结果基本上相符。有个别相差偏大的原因
附表 两种测定方法的比较（!mol／g ）
河南农业科学 JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES 2002(6)
参考文献(2条) 1.李建凡 十字花科植物中完整硫代葡萄糖苷的分离和测定 1989(03) 2.吴谋成 气相和液相色谱测定油菜籽(饼)中硫代葡萄糖苷 1988(06)
本文链接：/Periodical_hnnykx200206019.aspx
2 结果与分析
2 .1 色谱条件的研究
收稿日期：2001 -11 -12 作者简介：彭爱娟（1963 - ），女，硕士，讲师，主要从事分析测试工作。
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3 .4 加强通风换气 加大通风强度，促进舍内空气流通，使鸭羽散乱，破坏