水稻单片段代换系SSSL的构建修回稿.

水稻单片段代换系群体的构建
郭晓琴1，2，王岚1，张桂权2*
(1.中州大学，河南郑州450044；2.华南农业大学植物分子育种广东省重点实验室,广东广州510642 )
摘要：为研究水稻QTL的遗传机制，同时对优良水稻品种华粳籼74进行进一步遗传改良，以华粳籼74为受体, 以来源广泛的11个水稻品种为供体, 通过高代回交和微卫星标记辅助选择相结合的方法, 构建了水稻的一个单片段代换系群体。

该群体由59个单片段代换系组成，每个单片段代换系只含有来自一个供体的一个染色体代换片段, 而遗传背景与华粳籼74相同。

这些单片段代换系的代换片段分布在除12号染色体之外的其他11条染色体上, 59个代换片段的长度在0.2～58.5cM，大多数代换片段的长度为0～30cM。

代换片段长度较小的单片段代换系是用于QTL精细定位的优良材料。

关键词：水稻；单片段代换系；微卫星标记；分子标记辅助选择
Development of Single Segment Substitution Lines ( SSSLs ) in Rice (Oryza sativa L. )
GUO Xiao-qin1,2，W ANG Lan1
，ZHANG Gui-quan2*
（1.Zhongzhou University，Zhengzhou 450044，China；2.Guangdong Key Laboratory of Plant Molecular Breeding South China Agricultural University，Guangzhou，510642，China)
Abstract: In order to study the genetic mechanisms of rice QTL and improve genetic traits of Huajingxian 74，a novel population consisted o f 59 sin gle segment substitution lines ( SSSLs ) was developed with Huajingxian 74 as a recipient and eleven varieties as donors through backcrossing and SSR marker-assisted selection ( MAS ). The substituted segments in the SSSLs distributed on eleven rice chromosomes except Chr.12. The estimated length of the substituted segments in SSSLs ranged from 0.2 cM to 58.5 cM, and most of the length of the substituted segments concentrate between 0cM and 30cM.
Key words:rice, single segment substitution line, microsatellite marker; molecular marker-assisted selection
水稻重要的农艺性状大多数是数量性状，分析数量性状的遗传机制对于水稻品种的定向改良具有重要意义。

在常规的初级作图群体中，由于遗传背景和数量性状座位(Quantitative Trait Locus, QTL)上位性互作的影响，QTL作图的准确度和灵敏度并不高[1]。

相对而言，利用经过改良的次级作图群体在相似的遗传背景下对数量性状的QTL进行作图，消除了大部分遗传背景的干扰，从而能够提高作图的准确度和灵敏度[2]。

单片段代换系（single segment substitution lines，SSSL）是采用连续回交和分子标记辅助选择技
术相结合建立的近等基因系。

在每个单片段代换系的基因组内都只有来自供体亲本的一个纯合的染色体片段，而基因组的其余部分与轮回亲本相同，每个SSSL都是受体基因型的一个近等基因系，所有在单片段代换系之间，或与其受体亲本之间的可遗传的变异都与代换片段相联系[2-4]，因此单片段代换系在控制数量性状基因（QTL）的鉴定与定位、功能研究及克隆方面具有重要的利用价值[5-9]。

目前，水稻上建立的多个代换系群[5,10-12]，主要是为了定位某个特定基因或鉴定控制某个特定性状的QTL而建立的，一个受体亲本只有一个供体来源，大多数的代换系含有多个片段，有些覆盖率也不高。

早年建立代换系主要是利用RFLP标记为选择手段，检测过程复杂、花费大、时间长，不利于进行大规模的快速检测。

微卫星标记技术是在RFLP标记之后发展起来的新一代分子标记技术，是一种以PCR（polymerase chain reaction）为基础的共显性标记，多态性高，操作简单，检测快速，数量丰富[13- 17]，目前在水稻中已构建了饱和致密的微卫星标记图谱可供利用[15-16]，为分子标记辅助选择奠定了良好基础。

本研究用生产上正在推广的优良水稻品种华粳籼74为受体亲本，以来自于世界各地区的11个水稻品种（系）为供体，利用回交和微卫星标记相结合的方法建立以华粳籼74为遗传背景的单片段代换系群体，旨在为水稻重要农艺性状的鉴定、定位和克隆奠定基础，同时为华粳籼74的进一步遗传改良提供材料。

1 材料和方法
1.1 亲本材料
本研究选用优良推广品种华粳籼74为受体亲本，选用6个籼稻，5个粳稻共11个水稻品种为供体亲本（表1）。

表1 供试的亲本材料
亲本类别品种名称代号原产地类型
受体亲本华粳籼74 W0 中国籼稻
供体亲本Amol 3 (Sona) W2 伊朗籼稻
供体亲本苏御糯W7 中国粳稻
供体亲本IR64 W8 IRRI 籼稻
供体亲本Basmati 370 W11 巴基斯坦籼稻
供体亲本联鉴33 W14 中国籼稻
供体亲本美国茉莉香稻W15 美国籼稻
供体亲本IRA T 261 W18 尼日利亚粳稻
供体亲本 成龙水晶米 W20 中国 籼稻 供体亲本 Khazar W22 伊朗 粳稻 供体亲本 Lemont W23 美国 粳稻 供体亲本
IAPAR 9
W27
巴西
粳稻
1.2 方法
1.2.1 亲本多态性的检测和微卫星标记检测方法
本实验选用520个微卫星标记对各个供体亲本与华粳籼74之间的多态性进行检测，利用有明显多态性的微卫星标记进行代换片段的检测。

微卫星标记引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成；Tris 、EDTA 和SDS 等购自SIGMA 公司，其余试剂是国产分析纯产品。

PCR 扩增按照Panaud 等[17]的方法进行。

PCR 产物用6％聚丙烯酰胺变性胶电泳。

电泳完毕后，银染成像后记录结果。

1.2.2 水稻单片段代换系的选育与供体残留片段的检测方法
本研究采用回交和分子标记辅助选择相结合的方法建立染色体单片段代换系[18]。

杂交方法采用离体穗杂交技术[19]，杂交和回交都以华粳籼74为母本。

水稻种子为前期选育的含有一个杂合片段或2个杂合片段的BC 5F 1种子，共计92份。

每个材料种植40株，提取10株的叶片DNA 进行分子标记检测。

所选用的标记为早期世代（BC 4F 1）检测到的代换片段上的有多态性的SSR 标记。

每个株系选择10株进行片段检测，选出一批纯合的单片段代换系。

1.2.3 遗传背景中供体残留片段的检测方法
用亲本间有多态的标记对BC 5F 2选到的单片段代换系的候选单株进行遗传背景中供体残留片段的检测。

随后在BC 5F 3对筛选到的单片段代换系做第2次的背景检测。

1.2.4代换片段长度的计算方法 参照水稻微卫星标记图谱上标记间的距离[16,20] ，按照Paterson 等[21]的方法计算代换片段的长度。

如图1所示。

图1 单片段代换系代换片段长度计算的示意图
图中白色区段为受体亲本的遗传背景，黑色区段为已检出的代换片段，阴影区段为重组可能发生的区段。

R 为受体标记基因型，D 为供体标记基因型。

L MAX 为代换片段的最大长度，L MIN 为代换片段的最小长度，L 为代换片段的估计长度。

R 1 D 2 R 2
D 1
2 结果与分析
2.1 供体亲本与华粳籼74之间的多态性
对11个供体亲本与受体亲本华粳籼74之间的微卫星标记多态性进行了检测与分析（表2）。

在水稻的微卫星遗传图谱上，按照等间距的原则，选用了520对SSR进行亲本的多态性筛选。

表2 11个供体亲本与华粳籼74的微卫星标记多态性
供体亲本代号标记
总数
多态
标记数
多态率/%
平均多态标记
间距/ cM1）
Amol 3（Sona）W2 520 179 34.42 8.52
苏御糯W7 520 290 55.77 5.26
IR64 W8 520 186 35.77 8.20
Basmati 370 W11 520 261 50.19 5.84
联鉴33 W14 520 218 41.92 7.00
美国茉莉香稻W15 520 180 34.62 8.47
IRA T 261 W18 520 298 57.31 5.12
成龙水晶米W20 520 160 30.77 9.53
Khazar W22 520 292 56.15 5.22
Lemont W23 520 278 53.46 5.49
IAPAR 9 W27 520 282 54.23 5.41
平均520 239 45.87 6.73
1）按RGP图谱的全基因组的总长度（1528.1cM）/多态标记数来计算
11个供体亲本的平均多态标记数为239个，其中IRA T 261和Khazar与华粳籼74之间的多态率较高，分别为57.31%和56.15%，而成龙水晶米和Amol 3（Sona）较低，分别为30.77%和34.42%。

对照表1中的资料可以看出，多态性高的供体均为粳稻，多态性低的供体均为籼稻，而受体华粳籼74为籼稻。

说明籼粳稻之间的遗传差异大，标记多态率高；籼稻之间的遗传差异小，标记的多态率低。

各供体亲本平均标记距离均在10cM以下，11个供体亲本的平均标记距离为6.73cM，其中最大的为9.53cM，最小的为5.12cM。

2.2 遗传背景中供体亲本的残留片段
将跟踪检测的片段称为目的片段，将遗传背景中供体的其余片段称为残留片段。

分别在BC5F2和BC5F3代进行2次背景检测（表3）。

表3 BC5F2和BC5F3代遗传背景中的残留片段
供体亲本亲本
代号
选用标
记数
PCR 样品总数残留片段样品数残留片段样品率/%*
BC5F2BC5F3BC5F2BC5F3BC5F2BC5F3
Amol 3（Sona）W2 36 180 180 0 0 0 0 苏御糯W7 36 396 180 4 0 1.01 0
IR64 W8 36 108 108 1 2 0.93 1.85 Basmati 370 W11 36 324 324 1 1 0.31 0.31
联鉴33W14 36 144 72 0 0 0 0
美国茉莉香稻W15 36 180 144 1 0 0.56 0
IRAT 261 W18 36 216 144 2 3 0.93 2.08
成龙水晶米W20 36 144 144 0 0 0 0
Khazar W22 36 576 252 8 1 1.39 0.4
Lemont W23 36 360 288 4 0 1.11 0
IAPAR 9 W27 36 792 720 2 2 0.25 0.28
合计396 3420 2556 23 9 0.67 0.35 * 残留片段样品率等于残留片段PCR样品数除以总的背景检测的PCR样品数。

在BC5F2世代进行第一次残留片段检测，选用36个亲本间有多态性的SSR标记，对95个单片段代换系的候选单株进行了背景检测，共完成3420个PCR样品的检测工作，残留片段上的PCR样品数为23个，残留片段样本率为0.67%。

在
BC5F3代对71个BC5F3单片段代换系的候选单株进行背景检测，共完成2556个PCR样品的检测工作，残留片段上的PCR样品数为9个，残留片段样本率为0.35%。

2.3 单片段代换系群体的代换片段
经过微卫星标记的检测、选择及严格的遗传背景残留片段的分析，本实验在BC5F3共选到59个单片段代换系（表4）。

表4 59个单片段代换系的代换片段
编号代换片段染色
体
最短长度
/cM
估计长度
/cM
最长长度
/cM
W02-10-7-6-03-2-3 PSM174--RM32-RM167-RM409-PSM410-R
M202-RM536-PSM412-PSM413-PSM414-PS
M415-RM209-RM229-PSM416--RM21
11 54.6 58.5 62.4
W02-10-7-6-03-2-4 PSM409--PSM410-RM202-RM536-PSM412-
PSM413-PSM414
11 39.3 46.6 53.8
W02-10-7-6-03-5-10 PSM415--RM209-RM229-PSM416--RM21PS
M415-RM209-RM229-PSM416--RM21
11 4.6 7.7 10.7
W02-10-7-6-12-1-2 PSM413--PSM415-RM209-RM229-PSMP416
--PSM365
11 10.7 18.1 25.4
W02-15-1-8-14-5-1
RM195-- RM556-RM 210-
PSM395-RM502-RM447-RM352-RM264--PS
M396
8 39.2 39.9 40.5
W07-07-4-1-3-3-5 PSM139--PSM140-PSM141-PSM436-PSM48
1--PSM142
7 4.6 14.1 23.5
W07-07-4-1-6-2-7 RM125--RM2-PSM146--RM214 7 0.3 4.2 8 W07-11-2-1-3-1-2 PSM416--RM206-RM254-PSM346--PSM346 11 10 17.6 25.1 W07-11-6-4-7-2-5 RM49--RM6--RM530 2 0 3.7 7.4 W07-19-2-1-2-1-3 RM218--RM232-RM7-RM251--RM563 3 0.4 4.3 8.2 W08-16-3-4-146-5-6 PSM301--PSM305--PSM304 3 0 0.4 0.8 W11-06-1-6-4-4-1 PSM374--RM183-RM263-RM526--PSM525 2 21.1 27.8 34.5 W11-06-1-6-4-4-3 PSM374--RM183--RM263 2 0 10.2 20.3 W11-07-2-1-8-2-2 PSM304--RM132-RM569-RM489--RM545 3 17.8 20.3 22.8
W11-07-2-1-8-5-9 RM132--RM569-RM489-RM545-OSR16--PS
M429
3 16.8 25.2 33.6
W11-09-3-9-8-7-1 RM275--RM528-RM30--RM400 6 4.3 13.9 23.5 W11-18-1-6-09-1-6 RM449--RM24--RM09 1 0 11.5 23 W11-18-1-6-09-1-8 RM562--RM449-RM24--RM09 1 4.9 14.1 23.3 W11-18-1-6-16-2-4 R09--RM5--RM488 1 0 3.1 6.2 W14-01-5-6-2-5-7 PSM407--RM228-RM333-RM591--RM590 10 0 4.9 9.8
W14-12-3-6-4-4-3 RM111--RM253-RM350-RM402-RM50--RM
136
6 15.2 23.4 31.6
W15-02-7-6-1-05-7 OSR10--RM286-PSM175-RM332-RM167--R
M120
11 20 25.3 30.5
W15-02-7-6-1-07-2 RM286--PSM175-RM332-RM167--RM120 11 0.5 15.4 30.2
W15-02-7-6-1-10-4 PSM408--OSR0-RM286-PSM175-RM332--R
M167
11 19.8 20.1 20.3
W15-12-3-2-2-3-5 RM589--RM170-RM190-RM587-RM225--R
M217
6 7.5 8.5 9.5
W18-18-7-2-1-30-5 PSM27--PSM13-PSM12-RM84-RM86-RM22
0-RM1-RM283--RM272
1 13.7 18.7 23.6
W22-03-6-1-19-2-6 RM136--RM527-PSM388-RM3-RM541-PSM
136--PSM162
6 17.5 2
7 36.5
W20-10-4-5-6-1-6 RM257--RM288-RM242-RM160-OSR28-RM
201-RM215--RM340
9 13.7 19.4 25
W20-15-1-9-1-4-4 短臂末端--PSM156-RM444--RM2199 3.2 12 20.7 W20-20-4-7-3-1-7 RM222--RM216-PSM163--RM269 10 8.5 25.9 43.3
W22-09-2-10-4-9-4 PSM158--PSM160-PSM161-RM409--PSM40
0-PSM337--RM410
9 22.6 27.4 32.1
W22-12-5-1-18-3-5 RM332--RM167-PSM409-RM120--PSM410 11 10.2 12.9 15.6 W22-12-7-4-16-7-4 RM131--RM127-RM124-RM280--RM559 4 1.1 1.1 1.1 W22-17-4-3-5-3-5 RM470--RM451--RM317 4 0 3.7 7.3 W22-17-4-9-10-2-6 RM218--RM232-RM251-RM282--PSM52 3 11.7 13.9 16
W23-03-8-8-9-5-2 PSM158--PSM159-RM105-PSM161-RM410-
RM257-RM228--RM242
9 33.5 36.3 39.1
W23-07-6-01-04-1-7 RM508--RM589-RM190--RM587 6 1.4 5.2 9
W23-07-6-10-10-3-7 RM50--RM539-RM136-PSM388-RM3-RM54
1-RM162-RM275--PSM431
6 36.5 46.4 56.2
W23-07-6-10-14-4-1 RM217--RM111-RM253-RM50-RM402--RM
539
6 15.2 25.4 35.5
W23-09-4-1-3-1-10 RM135--RM504-RM168-RM186--RM55 3 4.3 6.4 8.5
W23-09-4-6-1-1-5 RM504--RM504-RM186-RM168-RM55-RM1
32-RM520--RM293
3 14.8 16.8 18.7
W27-03-5-1-5-9-1 PSM27--RM24-PSM13-RM428-PSM12-RM8
4-RM86--RM220
1 7.7 13.
2 18.7
W27-03-5-2-4-3-9
短臂末端
--RM462--PSM27-RM24-PSM13-RM428-PS
M12-RM84-RM86--RM220
1 10.7 17.4 24
W27-04-1-2-1-7-4 PSM399--PSM157-PSM158--RM105 9 2.4 10.9 19.3
W27-04-5-9-2-2-2 RM190--RM204-RM225-RM217-RM314-RM
111-RM253--RM217
6 6.2 7.2 8.1
W27-05-4-2-3-4-7 RM44--RM339--RM515 8 0 7.4 14.7 W27-05-4-3-4-2-8 rm502--RM447--PSM352 8 0 3 5.9 W27-05-7-3-4-03-9 短臂末端--RM508-RM589--RM217 6 4.6 10.1 15.5
W27-05-7-3-4-10-4 RM508--RM589-RM190-RM204-RM225--R
M217
6 7.5 10.8 14.1
W27-05-7-5-5-08-9 RM164--RM440-RM161-PSM384-RM188-R
M421--RM26
5 23 28.9 34.8
W27-05-7-5-5-09-7 PSM384--RM188-RM421-RM26-RM274--R
M31
5 15.9 21.4 26.9
W27-05-7-5-5-10-3 RM274--RM31-RM334-PSM385--PSM123 5 2.5 7.6 12.6
W27-08-7-1-2-2-3 RM451--RM317-RM127-RM303-PSM110-PS
M107-PSM382-RM127-RM124-RM280--长
臂末端
4 35.2 35.3 35.3
W27-08-7-1-2-2-7 PSM382--RM127-RM124-RM280--长臂末端 4 1.1 3.9 6.7
W27-14-1-2-7-3-1 OSR23--RM529-PSM369-PSM370-PSM371--
长臂末端
1 20.3 21.6 22.8
W27-14-1-2-7-3-2 PSM423--OSR23-RM529-PSM369-PSM370-
PSM371--长臂末端
1 22.8 26.8 30.8
W27-18-1-2-10-2-3 PSM429--RM7--RM563 3 0 6.2 12.4 W27-18-2-3-7-4-6 PSM136--RM162--RM275 6 0 6.9 13.7 W27-18-5-5-12-4-3 RM467--RM271--RM304 10 0 13.8 27.5
59个不同的代换片段分别来自于11个供体，其中来自供体IAPAR 9的代换片段最多，有18个，而来自其他供体亲本的均在10个以下。

除12号染色体外，59个代换片段分布在
其余11条染色体上，但是在各条染色体的分布不均匀，其中，6号染色体上最多，共有11个；7、2、8号染色体上最少，分别只有2、3、3个（表5）。

表5代换片段在各供体及12条染色体上的分布
染色体
供体亲本代号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 合计
Amol 3（Sona）W2 1 4 5 苏御糯W7 1 1 2 1 5
IR64 W8 1 1 Basmati 370 W11 3 2 2 1 8
联鉴33 W14 1 1 2
美国茉莉香稻W15 1 3 4
IRA T 261 W18 1 1
成龙水晶米W20 2 1 3
Khazar W22 1 2 1 1 1 6
Lemont W23 2 3 1 1 7
IAPAR 9 W27 4 1 2 3 4 2 1 1 18
合计8 3 8 4 3 11 2 3 5 4 9 60
59个代换片段的长度分布在0.2～58.5cM，绝大多数代换片段的长度集中在0～30cM。

代换片段长度较小的单片段代换系是用于QTL精细定位的优良材料。

3. 讨论
本试验以来源广泛的11个水稻品种为供体，一个生产上正在推广的优良品种为受体，通过杂交、回交和MAS相结合的方法构建水稻的单片段代换系群体，有别于传统的构建次级作图群体时往往是用一个供体和一个受体的方法。

因为不同供体往往具有各自不同的特征特性，多个供体可以提供较多的有利基因，所构建的单片段代换系群体可以包含水稻栽培种内较多的基因资源，从而为水稻功能基因的全方位鉴定和利用奠定基础。

水稻育种中的基因资源大都分散在各种类型的水稻品种中，建立单片段代换系是鉴定新基因（QTL）的有效途径[3,8-9]。

由于单片段代换系中供体染色体片段的单一性，使单片段代换系与受体亲本遗传组成上的唯一区别仅局限在目标染色体片段内，这一特性使新基因或QTL的发现与鉴定变得非常简单；单片段代换系内供体染色体片段的单一性，消除了遗传背景及QTL之间互作的干扰，保证了QTL定位的准确性。

此外，与传统的基因效应分析方法相比，单片段代换系更利于进行基因效应分析[22-24]。

利用单片段代换系进行QTL定位的一个前提是尽可能地排除掉影响目标性状的其他片
段。

因此，在建立染色体单片段代换系后进行遗传背景残留片段的检测非常重要。

为了防止小的供体片段的漏检，有必要利用饱和的分子标记连锁图，以鉴定出更可能多的供体片段。

本试验加强了遗传背景残留片段的检测，在BC5F2和BC5F3进行了残留片段的检测，并将检出有残留片段的单株全部淘汰，保证了建立的单片段代换系的准确可靠性。

由大量的单片段代换系组成的单片段代换系文库可以作为一个高水平的育种材料平台，利用单片段代换系文库内带有不同性状的单片段代换系进行聚合育种，可以迅速把不同优良基因聚合到一起，育成符合人们需要的品种。

另外，本试验选用的11个供体亲本来源广泛，而且每个亲本都有个别突出的优良性状，将这些优良性状导入华粳籼74也是对其改良的一种途径。

参考文献:
1.Jeuken M J W, Linshout P. Future perspective of backcross inbred lines for exploitation of wild
germplasm: a case study on Lactuca saligma as a door for quantitative resistance to lettuce downy mildew[J]. Eucarpia Leafy Vegetables. 2003，2：69-74.
2.Howell P M, Marshall D F, Lydiate D J. Towards developing intervarietal substitution lines in
Brassica napus using marker-assisted selection[J]. Genome. 1996，39: 348-358.
3.Lecomte L, Duffé P, Buret M et al. Marker-assisted introgression of five QTLs controlling
fruit quality traits into three tomato lines revealed interactions between QTLs and genetic
backgrounds[J].Theor Appl Genet. 2004，109(3):658-68.
4.Ramsay L D, Jennings D E, Bohuon E J R, et al. The construction of a substitution library of
recombinant backcross lines in Brassica oleracea for the precision mapping of quantitative trait loci[J]. Genome. 1996，39: 558-567.
5.Sobrizal A. Yashimura. 2002. Mapping of genes for slender kernel using Oryza glumaepatula
introgression lines in rice[J]. RGN,2002.
6.Kojima S, Takahashi Y, Kobayashi Y, et al.Hd3a, a rice ortholog of the Arabidopsi s FT gene,
promotes transition to flowering downstream of Hd1 ender short-day condition[J]. Plant Cell Phydiol. 2002，43:1096-1105.
7.Li J M. QTL detection for rice grain quality traits using an interspecific backcross population
derived from cultivated Asian (O. sativa L.) and African (O.glaberrima S.) rice[J]. Genome.
2004，47: 6978-6985.
8. 王军，朱金燕，周勇，等. 基于染色体单片段代换系的水稻粒形QTL定位[J]. 作物学报
2013，39(4): 617-625.
9. 张昌泉，胡冰，朱孔志，等.利用重测序的水稻染色体片段代换系定位控制稻米淀粉黏滞
性谱QTL[J]. 中国水稻科学2013，27(1)：56-54.
10. Monforte A J, Tanksley S D. Development of a set of near isogenic and backcross recombinant
inbred lines containing most of the Lycopersicon hirsutum genome in a L. esculentum genetic background: A tool for gene mapping and gene discovery[J]. Genome. 2000，43: 803-813.
11.Hao W, Zhu M Z, Gao J P et al. Identification of Quantitative Trait Loci for Rice Quality in a
Population of Chromosome Segment Substitution Lines[J]. Journal of Integrative Plant Biology 2009，51(5)：500–512.
12.Kubo T, Aida Y, Nakamura K et al. Reciprocal chromosome segment substitution series
derived from Japonica and Indica cross of rice (Oryza sativa L.) [J] . Breeding Science.
2002，52: 319-325
13.Tanksley S D, Medina-Filho H, Rike C M. Use of naturally-occurring enzyme variation to
detect and map genes controlling quantitative traits in an interspecific backcross o ftomato[J].
Heredity. 1982，49: 11-25.
14.Akagi H, Nakamara A, Yokozeki-Misono Y, et al. Positional cloning of the rice Rf-1 gene, a
restorer of BT-type cytoplasmic male sterility that encode a mitochondria-targeting PPR
protein[J]. Thore Appl Genet. 2004，108: 1449-1457.
15. S R, Temnykh S, Lukashova A et al. Microsatellite markers in rice: abundance, diversity, and
applications[C]. Rice Genetics IV. New Delhi (India ): Science Publishers, (IRRI SP1): 2001，117-135.
16.McCounch S R, Teytwlman L, Xu Y B, et al. Development and mapping of 2240 new SSR
markers for rice ( Oryza Sativa L. ) [J]. DNA Research. 2002，9: 199-207.
17.Panaud O, Chen X, McCouch S R. 1996. Panaud O, Chen X, McCouch S R. 1996. Development of microsatellite markers and characterization of simple sequence length polymorphism ( SSLP ) in rice ( O. sativa L. ). Mol. Gen. Genet. 252: 597-607.
18.何风华，席章营，曾瑞珍，等. 利用高代回交和分子标记辅助选择建立水稻单片段代换系
[J]. 遗传学报. 2005，32 ( 8) : 825~ 831.
19.广东省农业科学院水稻生态研究室. 水稻离体穗杂交和培养的试验简报[J]. 植物学报.
1977，19（4）: 306-308.
20.黄朝锋. 水稻PSM标记的发展及抗虫基因的分子定位[D]. 广州：华南农业大学，2003.。