综合训练 抗生素效价的微生物学测定ppt课件

液，经过检定后，测得抑菌圈直径等结果如表
表 抑菌圈测量结果
碟号
1 2 3 4 ∑
UH（mm）
24.0 24.0 24.5 24.0 96.5
UL（mm）
18.5 18.0 18.0 18.0 72.5 24.5 24.5 24.5 24.5 98.0
SH（mm）
18.5 18.0 18.0 18.0 72.5
注意：为了减少误差，一般做 4 个 培养皿，然后计算出每个数值 4 皿的 平均值，最后代入公式，计算出待检 品的效价。
（五）实训结果
（六）思考题 ▲ 抗生素效价测定为什么不用玻璃皿盖 而用陶瓦盖? ▲ 抗生素的效价测定，除了微生物方法 外还有哪些方法?
3．标准溶液的配制 精确称取一定量的罗红霉素标准品，用pH 8.0 缓冲液溶解并稀释至1000U／ml作为原液，再 以ph8.0缓冲液(无菌)稀释至10U／ml和5U／ ml两个浓度，供测定时作对照使用。 4．待测供试品溶液的配制 确定供试品溶液(或发酵液离心后的上清液)的 估计效价，准确吸取供试品溶液，以pH8.0缓 冲液(无菌)稀释至10U／ml (估计值)和5U／ ml(估计值)两个浓度，备用。
综合训练 抗生素效价的微生物 学测定
（一）实训目的
1．熟悉用管碟法进行抗生素效价 生物测定的实验原理； 2．掌握二剂量法测定生物效价的 实验方法。
（二）实训Байду номын сангаас理
物理、 化学法 微生物法
简便、快速，要 求药品纯度高 直接反映抗生素疗效， 灵敏度高。常用
效价测 定方法
抗生素效价的微生物学测定法指的是利用抗生素对某种微生 物具有抗菌性能的特点来测定抗生素含量的方法。 有稀释法、比浊法和琼脂扩散法 3 大类。 管碟法是琼脂扩散法中最常用的一种方法。在管碟法中又有一 剂量法、二剂量法和三剂量法。本实训采用二剂量法。 二剂量法是利用抗生素在琼脂培养基中的扩散、渗透作用，将 已知效价的标准品与未知效价的待检品均做同样倍数的稀释，取 高、低两种浓度的抗生素稀释液，在相同条件下分别加到含有敏 感试验菌的琼脂培养基平板表面的牛津杯(小不锈钢管)内，经培养 后，由于抗生素的抑菌作用，在抗生素扩散的有效范围内会出现 透明的抑菌圈。通过比较标准品和待检品的抑菌圈大小，就可计
SL（mm）
代入计算公式，得： θ =log-1{[(∑UH+∑UL)-(∑SH+∑SL)]／[(∑SH+∑UH)(∑SL+∑UL)]}﹡I logθ ={[(96.5+72.5)-(98.0+72.5)]／[(98.0+96.5)(72.5+72.5)]}﹡log4/1 = -0.012 θ =0.97 供试品效价(U／ml)= θ ﹡估计效价=0.97﹡1000=970.00(U／ml) 其中：SH—标准品的高剂量稀释液的抑菌圈直径； SL—标准品的低剂量稀释液的抑菌圈直径； UH—待检品的高剂量稀释液的抑菌圈直径； UL—待检品的低剂量稀释液的抑菌圈直径； θ —相对效价(待检品与标准品效价之比)； Ps—标准品效价； Pu—待检品效价。
• 牛津杯(小不锈钢管)、培养皿、无菌吸管、镊子、 陶瓦盖、游标卡尺、容量瓶、蒸馏水、移液管等。
（四）操作步骤
1．试验菌的培养 在琼脂培养基上接种枯草芽孢杆菌培养传代一 次后，再移种至营养肉汤培养基中，35-37℃ 培养16～18h，取出备用。 2．配制1％的pH8.0缓冲溶液 于100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，转 入试剂瓶中灭菌备用。
7．生物效价测定(二剂量法)
加小钢管→加药液→换陶瓦盖→测量抑 菌圈直径→ 据测量结果计算抗生素效价。
测量抑菌圈直径：
游标卡尺
抑菌圈
8．效价计算实例 设有一个罗红霉素检品，估计效价为1000U／ml， 将检品稀释成10U／ml和5U／ml两种高低剂量 的待测液。将已知效价为1000U／ml的标准品也 配成10U／ml和5U／ml两种高、低剂量的标准
算出待检品的效价 。
（三）材料和用具
• 枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501]菌悬液 。
• 罗红霉素标准品高浓度溶液(10U／ml)、罗红霉素 标准品低浓度溶液(5U／m1)、罗红霉素供试品高 浓度溶液(估计浓度为10U／m1)、罗红霉素供试品 低浓度溶液(估计浓度为5U／m1)、pH8.0缓冲液 。
5．枯草芽孢杆菌菌悬液的制备 取培养好的实验菌枯草芽孢杆菌斜面 培养物，临用时，用生理盐水或肉汤培养 基将菌苔洗下备用。
6．混菌平板的制备 取灭过菌的平皿4个，在培养皿底部划分成四个 区，并于各平皿底交叉做“SH”“SL”“UH’“ UL” 四个标记，然后以20ml大口移液管于每个平皿中加 入融化了的底层培养基20ml，使其在皿底均匀摊平， 放置水平台面上使之凝固，作为底层。用2ml无菌移 液管吸取一定量的枯草芽孢杆菌菌悬液，加入到 50℃保温的100ml琼脂培养基中，轻轻振摇混匀。以 5ml大口移液管取5ml含供试菌培养基分别加入到每 个已凝固的底层培养基上面，使其摊布均匀作为上 层，放置水平台面上，凝固待用。