红霉素高产菌株的选育
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种子摇 瓶 ： ３ ０ ℃， ２ ２ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ ， ４ ８ ｈ； 发 酵摇 瓶 ： ３ ０ ℃，
２ ２０ｒ ／ ｍｉ ｎ， ７ｄ。
５ ３ ２ ８ ｕ ／ ｍｌ 提高 ２ ９ ． １ ％； 并且 在 １ ０ ｔ发 酵 罐 上 进 行 验
证， 平均 发 酵效价 ７ ０ １ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比原 生 产 水 平 ５ ６ ５ ２ ｕ ／ ｍｌ 提高 ２ ４． １ ％。
１ ４ （ ３ ） ： １ ８ ７
Ａ： Ｍ一 ０】 一 ２７； Ｂ： Ｍ一 ０２ — ８ ４； Ｃ： Ｍ一 ０ ３ — ５ ９； Ｄ： Ｍ一 ０ ４— １ １ ３； Ｅ： ０— １ １ — ２ ６
［ ２ ］Ｘｉ ｏ ｎ ｇ Ｚ Ｇ， Ｃ ｈ ｅ ｎ Ｇ Ｑ，Ｙｕ ｎ ａ Ｊ Ｌ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｓ ｏ ｎ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ
硫 氨 酸 突 变 株 的 方 法 选 育 了红 霉 素 高产 菌 株 。熊 宗 贵
表 １ 摇 瓶筛 选 结果
参 考 文 献
ｌ １ ］Ｚ ｏ ｕ Ｍ Ｙ， Ｚ ｈ ｕ ｗ Ｍ ，Ｙｕ Ｘ ｕ ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｃ ｕ ｈ ｕ ｒ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ
（ １安 阳 大 学 ， 安阳 ４ ５ ５ ０ ０ ０ ）
（ １ Ａ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ａ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ ４ ５ ５ ０ ０ ０ ）
（ ２河南平 原 制 药厂 ， 安 阳４ ５ ５ ０ ０ ０ ）
（ ２ Ｐ ｉ ｎ ｇ ｙ ｕ ａ ｎ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｈｅ ｎ ａ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ， Ａｎ ｙ ａ ｎ ｇ ４ ５ ５ ０ ０ ０ ）
红霉 素 高产 菌株 的选 育
Ｂｒ ｅ ｅ ｄｉ ｎｇ ｏ ｆ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ｈｉ ｇ ｈ－ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ａｉ ｎｓ
张金 国 王 敏 高宏 军 张 国 强 Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｊ ｉ ｎ — ｇ ｕ ｏ ， Ｗａ ｎ ｇ Ｍｉ ｎ ， Ｇａ ｏ Ｈｏ ｎ ｇ — ｉ ｕ ｎ ａ ｎ ｄ Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｇｕ ｏ － ｑ ｉ ａ ｎ ｇ 。
上 连 续 ６批 验 证 ， 平 均 发酵 效 价 ７ ０ １ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比原 生 产
可提高红霉 素的产率 ， 但 浓 度 过 高 又 会 产 生 反馈 抑 制 ， 影 响红 霉 素 合 成 ， 因 此 筛 选 耐 丙 酸 盐 的 突 变 株 可 以 提 高红霉素产量 。异亮 氨酸 、 缬 氨 酸 和 蛋 氨 酸 分 解 代 谢 都能生成丙酰 Ｃ ｏ Ａ＿ ４ Ｊ ， 筛 选 抗 这 类 氨 基 酸 和 其 结 构 类
后分别涂 布 到含 有 ４种 不 同结 构类 似 物 （ 以Ｓ １ 、 Ｓ ２ 、
Ｓ ３ 、 Ｓ ４表 示 ） 的平 板 分 离 培 养 基 上 ， ３ ６ ℃恒 温 培养 ７ ｄ 。 挑选生长快 、 孢 子 丰满和 变异 明显 的单 菌落 ， 接斜 面 、 进摇瓶初筛 ， 初 筛 获 得 的 高 效 价 菌 株 再 进 行 二 级 摇 瓶 复筛 。 １ ． ５ 培 养 条 件
ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈｒ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ｍｕ ｔ ａ ｎｔ ｏ ｆ
Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｓ ｅ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｅ ｕ ｓ １ ～２ ５［ Ｊ ］ ．Ｃ ／ ｉ ｆ ｎ Ｊ Ａｎ ｔ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ， Ｊ ９ ８ ９ ，
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１ ８ ２
红霉 素 高产 菌 株 的选 育
张 金 国等
上 连 续 ６批 验 证 ， 结果 见表 ２ 。
２ ． ４ 讨 论
等 采 用 抗 丙 醇 和 抗 红 霉 素 的 方 法 筛 选 得 到 了 红 霉 素 高 产 变 株 。在 红 霉 素 生 物 合 成 过 程 中 ， 红 霉 内 酯 的
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 出发 菌株
２ 结 果 与 讨 论
红霉 素链霉菌 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｓ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｅ ｕ ｓ ） ０ — １ １ — ２ ６ 。
１ ． ２ 培 养 基
２ ． １ 筛 选 过 程 红 霉链 霉 菌 ０ １ — １ １ — ２ ６经 ０ ． ５ ％ Ｌ ｉ ａ 和 紫 外 线 诱
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中国抗 生 素 杂志 ２ ０ ０ ３年 ３月第 ２ ８卷 第 ３期
， ＞ ＞ ， ＞ ＞
１ ８１
ｌ 研究简报 ５
卜 一二 ｃ ０ （ ｃ ｃ ｃ ｃ ０
文章 编号 ： １ ０ ０１ — ８ ６ ８ ９ （ ２ ０ ０ ３ ） ０ｕＸ Ｙ， Ｘｉ ｏ ｎ ｇＺＧ，ＨｕＺＺ． Ｔｅ ｃｈ ｎ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｐ ｒ ｃ ￣ｕ ｃ — ｔ ｉ ｏ ｎ［ Ｍ］ ．Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ ：Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ａｌ ｃ Ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｒ ｙ Ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ， １ ９ ８ ５ ： ３ ５ ７
收稿 日期 ： ２ ０ ０ ２ — ０ ９ — １ ８
将 筛 选 后 效 价 最 高 的 Ｍ一 ０ ３ — ５ ９菌 株 在 １ ０ ｔ 发 酵 罐
作者简 介 ： 张金 国 ， 男。 生于 １ ９ ５ ５ 年， 副教 授 。本文 参加第 二 次全 国抗生 素产生 菌遗 传育种 与生 物合 成学术 研讨 会 交流 。
获 得 Ｍ一 ０ ３ ． ５ ９菌 株 ， 摇 瓶效 价 ６ ８ ７ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比起 始 菌 株
射（ 功率 １ ５ Ｗ、 距离 ３ ０ ｃ ｍ、 时间 ３ ０ ｓ ） 。 １ ． ４ 定 向筛 选 抗 结构 类 似 物 突 变株 将 Ｌ ｉ Ｃ Ｉ 和 ＵＶ 诱 变 处 理后 的孢 子 悬 液 ， 适 当 稀 释
１ １ ３共 ４株 突 变 株 。
１ ． ３ ． １ 氯 化 锂 处 理 将 出 发 菌 株 孢 子 置 于 ０ ． ５ ％ Ｌ ｉ ＣＩ 溶液 中 ， 制成孢 子悬 液 （ 孢 子浓度 １ ０ 个 ／ ｍｌ 左
２ ． ２ 定 向筛 选 结 果 将 上 述 获 得 的 ４株 不 同 的 新 变 株 经摇 瓶 初 筛 复 筛
摘要 ： 以红 霉 素链 霉菌 ０ － １ １ － ２ ６为 出发菌 株 ， 经Ｌ ｉ Ｃ １ 和 紫外线 复合 诱 变处 理 ， 再 用含 有 ４种 不 同 结 构类
似物 的 培养 基定 向筛 选 ， 获 得 ４株 突 变 株 ， 其 中 Ｍ一 ０ ３ — ５ ９摇 瓶 效 价 ６ ８ ７ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比起 始 菌 株 （ ５ ３ ２ ８ ｕ ／ ｍ１ ） 提 高 ２ ９． １ ％， 在 １ ０ ｔ 发酵罐 上 连续 ６批 验 证 ， 平 均发酵 效价 ７ ０ １ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比原 生 产水 平 （ ５ ６ ５ ２ ｕ ／ ｍ１ ） 提高 ２ ４． １ ％， 并且 质 检全 部合 格 ， 对生 产实 际具 有 重要 意义 。 关 键 词 ： 红 霉 素 ； 红霉 素链 霉菌 ； 诱 变育 种 ； 定 向筛 选
菌 种 曾有 报 道 。 如 张 筱 玉 等 … １利 用 抗 结 构 类 似 物 乙
我们根据 上述考虑 ， 应用 Ｌ ｉ Ｃ １ 与 ＵＶ 复 合 诱 变 处 理， 提 高 了诱 变 效 率 。 在 此 基 础 上 ， 采 用 定 向筛 选 的 方 法， 以多 种 结 构 类 似 物 为 筛 选 剂 ， 经过 大 量筛 选 ， 获 得 红霉 素 高 产 菌 株 Ｍ． ０ ３ ． ５ ９ ， 收 到 了 较 理 想 的效 果 。
斜 面培 养 基 、 分离培养基 、 种 子 培 养 基 和发 酵 培 养 基 均参见文 献… １。
１ ． ３ 诱 变 处理
变 ３ ０ ｓ 后 的突 变 株 在 含 Ｓ ｌ 、 Ｓ ２ 、 Ｓ ３ 、 Ｓ ４四 种 化 合 物 培 养 基 上 筛 选 分别 获 得 Ｍ一 ０ １ — ２ ７ 、 Ｍ一 ０ ２ — ８ ４、 Ｍ一 ０ ３ — ５ ９ 、 Ｍ一 ０ ４ —
结果见表 １ 。 ２ ． ３ １ ０ ｔ 发 酵罐 验 证 结 果
右） ， ３ ６ ℃恒 温培养 ４ ８ ｈ 。
１ ． ３ ． ２ 紫 外 线诱 变 处 理 取 Ｌ ｉ ＣＩ 处 理 过 的孢 子 悬 液 １ ０ ｍｌ 于直径９ ｃ ｍ定 量 培 养 皿 中 ， 磁 力 搅拌 ， 紫 外 线 照
中 图 分 类 号 ：Ｒ ９ ７ ８ ． １ ５ 文 献标 识码 ： Ａ
近年来 ， 由于 红 霉 素 及 其 衍 生 物 的 广 泛 使 用 ， 导致 红 霉 素 的需 求 量 大 幅 增 加 。 然 而 国 内大 多企 业 红 霉 素 发 酵水 平 不 高 ， 一直在 ６ ０ ０ ０ ｕ ／ ｍｌ 左 右徘 徊 ， 与 国 外 相 比存 在 较 大 差 距 。笔 者 通 过 对 红 霉 素 链 霉 菌 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ — ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｓ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｅ ｕ ｓ ） 生 产 菌种 分 离 纯 化得 到 ０ — １ １ — ２ ６菌 株， 经 Ｌ ｉ ａ 和 ＵＶ 诱 变 处 理 后 ， 采用定 向筛选 的方法 ，
［ ４ ］ Ｗａ ｎ ｇ Ｘ Ｃ ．Ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ［ Ｍ］ ．Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ ： Ｔｓ ｉ ｎ ｇ ｈ ｕ ａ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
Ｐｒ ｅ ｓ ｓ ， ２ ０ ０１ ： ３ ４ ８
（ 上接第 １ ３ ０页 ）
Ｐｒ ｏ ｔ ｏ ｐｌ ａ ｓ ｔ ｓ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐｅ ｎｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｎ ｐｒ ｏ ｄｕｃ ｉ ｎｇ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎｓ
似 物 的 突 变株 ， 也 可 能 获得 红 霉 素 高 产 菌 株 。
水平 ５ ６ ５ ２ ｕ ／ ｍｌ 提高 ２ ４ ． １ ％， 产 品质 检 全 部 合 格 ， 因 此
对 生 产 实 际具 有 重 要 意 义 。
应 用 ＵＶ诱 变 和抗 结 构类 似 物 的方 法 选 育 红 霉 素
碳 架 来 源 于丙 酸 盐 和 丙 酰 Ｃ ｏ Ａ［ ３ ］ ， 增 加 丙 酸 盐 的 浓 度
本 实 验 所 得 的 ４株 新 变 株 摇 瓶 效 价 均 比对 照 组 有
较大 提 高 ， 其 中 Ｍ． ０ ３ ． ５ ９菌 株 高 达 ６ ８ ７ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比 出 发 菌株 ０ ． １ １ ． ２ ６高 ２ ９ ． １ ％ 。Ｍ． ０ ３ ． ５ ９菌 株 在 １ ０ ｔ发 酵 罐
ｍａ ｎ ｉ ｐ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｓ ｅ ｒ ３ ｒ ｔ ｈ ｒ ｅ ｕ ｓ［ Ｊ ］ ．Ｊ Ｓ ｈ ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ ｆ ２
表２ Ｍ一 ０ ３ — ５ ９在 ｌ Ｏ ｔ 发酵 罐上 验证 结果
Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ， １ ９ ８ ５ ， ２ （ ４ ） ： ２ ９ ５
２ ２０ｒ ／ ｍｉ ｎ， ７ｄ。
５ ３ ２ ８ ｕ ／ ｍｌ 提高 ２ ９ ． １ ％； 并且 在 １ ０ ｔ发 酵 罐 上 进 行 验
证， 平均 发 酵效价 ７ ０ １ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比原 生 产 水 平 ５ ６ ５ ２ ｕ ／ ｍｌ 提高 ２ ４． １ ％。
１ ４ （ ３ ） ： １ ８ ７
Ａ： Ｍ一 ０】 一 ２７； Ｂ： Ｍ一 ０２ — ８ ４； Ｃ： Ｍ一 ０ ３ — ５ ９； Ｄ： Ｍ一 ０ ４— １ １ ３； Ｅ： ０— １ １ — ２ ６
［ ２ ］Ｘｉ ｏ ｎ ｇ Ｚ Ｇ， Ｃ ｈ ｅ ｎ Ｇ Ｑ，Ｙｕ ｎ ａ Ｊ Ｌ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｓ ｏ ｎ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ
硫 氨 酸 突 变 株 的 方 法 选 育 了红 霉 素 高产 菌 株 。熊 宗 贵
表 １ 摇 瓶筛 选 结果
参 考 文 献
ｌ １ ］Ｚ ｏ ｕ Ｍ Ｙ， Ｚ ｈ ｕ ｗ Ｍ ，Ｙｕ Ｘ ｕ ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｃ ｕ ｈ ｕ ｒ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ
（ １安 阳 大 学 ， 安阳 ４ ５ ５ ０ ０ ０ ）
（ １ Ａ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ａ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ ４ ５ ５ ０ ０ ０ ）
（ ２河南平 原 制 药厂 ， 安 阳４ ５ ５ ０ ０ ０ ）
（ ２ Ｐ ｉ ｎ ｇ ｙ ｕ ａ ｎ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｈｅ ｎ ａ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ， Ａｎ ｙ ａ ｎ ｇ ４ ５ ５ ０ ０ ０ ）
红霉 素 高产 菌株 的选 育
Ｂｒ ｅ ｅ ｄｉ ｎｇ ｏ ｆ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ｈｉ ｇ ｈ－ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ａｉ ｎｓ
张金 国 王 敏 高宏 军 张 国 强 Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｊ ｉ ｎ — ｇ ｕ ｏ ， Ｗａ ｎ ｇ Ｍｉ ｎ ， Ｇａ ｏ Ｈｏ ｎ ｇ — ｉ ｕ ｎ ａ ｎ ｄ Ｚ ｈ ａ ｎ ｇ Ｇｕ ｏ － ｑ ｉ ａ ｎ ｇ 。
上 连 续 ６批 验 证 ， 平 均 发酵 效 价 ７ ０ １ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比原 生 产
可提高红霉 素的产率 ， 但 浓 度 过 高 又 会 产 生 反馈 抑 制 ， 影 响红 霉 素 合 成 ， 因 此 筛 选 耐 丙 酸 盐 的 突 变 株 可 以 提 高红霉素产量 。异亮 氨酸 、 缬 氨 酸 和 蛋 氨 酸 分 解 代 谢 都能生成丙酰 Ｃ ｏ Ａ＿ ４ Ｊ ， 筛 选 抗 这 类 氨 基 酸 和 其 结 构 类
后分别涂 布 到含 有 ４种 不 同结 构类 似 物 （ 以Ｓ １ 、 Ｓ ２ 、
Ｓ ３ 、 Ｓ ４表 示 ） 的平 板 分 离 培 养 基 上 ， ３ ６ ℃恒 温 培养 ７ ｄ 。 挑选生长快 、 孢 子 丰满和 变异 明显 的单 菌落 ， 接斜 面 、 进摇瓶初筛 ， 初 筛 获 得 的 高 效 价 菌 株 再 进 行 二 级 摇 瓶 复筛 。 １ ． ５ 培 养 条 件
ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｓ ａ ｎ ｄ ｓ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｈ ｉ ｇ ｈ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈｒ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｉ ｎ ｇ ｍｕ ｔ ａ ｎｔ ｏ ｆ
Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｓ ｅ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｅ ｕ ｓ １ ～２ ５［ Ｊ ］ ．Ｃ ／ ｉ ｆ ｎ Ｊ Ａｎ ｔ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ， Ｊ ９ ８ ９ ，
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红霉 素 高产 菌 株 的选 育
张 金 国等
上 连 续 ６批 验 证 ， 结果 见表 ２ 。
２ ． ４ 讨 论
等 采 用 抗 丙 醇 和 抗 红 霉 素 的 方 法 筛 选 得 到 了 红 霉 素 高 产 变 株 。在 红 霉 素 生 物 合 成 过 程 中 ， 红 霉 内 酯 的
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 出发 菌株
２ 结 果 与 讨 论
红霉 素链霉菌 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｓ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｅ ｕ ｓ ） ０ — １ １ — ２ ６ 。
１ ． ２ 培 养 基
２ ． １ 筛 选 过 程 红 霉链 霉 菌 ０ １ — １ １ — ２ ６经 ０ ． ５ ％ Ｌ ｉ ａ 和 紫 外 线 诱
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中国抗 生 素 杂志 ２ ０ ０ ３年 ３月第 ２ ８卷 第 ３期
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ｌ 研究简报 ５
卜 一二 ｃ ０ （ ｃ ｃ ｃ ｃ ０
文章 编号 ： １ ０ ０１ — ８ ６ ８ ９ （ ２ ０ ０ ３ ） ０ｕＸ Ｙ， Ｘｉ ｏ ｎ ｇＺＧ，ＨｕＺＺ． Ｔｅ ｃｈ ｎ ｉ ｃ ｓ ｏ ｆ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｐ ｒ ｃ ￣ｕ ｃ — ｔ ｉ ｏ ｎ［ Ｍ］ ．Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ ：Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ａｌ ｃ Ｉ ｎ ｄ ｕ ｓ ｔ ｒ ｙ Ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ， １ ９ ８ ５ ： ３ ５ ７
收稿 日期 ： ２ ０ ０ ２ — ０ ９ — １ ８
将 筛 选 后 效 价 最 高 的 Ｍ一 ０ ３ — ５ ９菌 株 在 １ ０ ｔ 发 酵 罐
作者简 介 ： 张金 国 ， 男。 生于 １ ９ ５ ５ 年， 副教 授 。本文 参加第 二 次全 国抗生 素产生 菌遗 传育种 与生 物合 成学术 研讨 会 交流 。
获 得 Ｍ一 ０ ３ ． ５ ９菌 株 ， 摇 瓶效 价 ６ ８ ７ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比起 始 菌 株
射（ 功率 １ ５ Ｗ、 距离 ３ ０ ｃ ｍ、 时间 ３ ０ ｓ ） 。 １ ． ４ 定 向筛 选 抗 结构 类 似 物 突 变株 将 Ｌ ｉ Ｃ Ｉ 和 ＵＶ 诱 变 处 理后 的孢 子 悬 液 ， 适 当 稀 释
１ １ ３共 ４株 突 变 株 。
１ ． ３ ． １ 氯 化 锂 处 理 将 出 发 菌 株 孢 子 置 于 ０ ． ５ ％ Ｌ ｉ ＣＩ 溶液 中 ， 制成孢 子悬 液 （ 孢 子浓度 １ ０ 个 ／ ｍｌ 左
２ ． ２ 定 向筛 选 结 果 将 上 述 获 得 的 ４株 不 同 的 新 变 株 经摇 瓶 初 筛 复 筛
摘要 ： 以红 霉 素链 霉菌 ０ － １ １ － ２ ６为 出发菌 株 ， 经Ｌ ｉ Ｃ １ 和 紫外线 复合 诱 变处 理 ， 再 用含 有 ４种 不 同 结 构类
似物 的 培养 基定 向筛 选 ， 获 得 ４株 突 变 株 ， 其 中 Ｍ一 ０ ３ — ５ ９摇 瓶 效 价 ６ ８ ７ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比起 始 菌 株 （ ５ ３ ２ ８ ｕ ／ ｍ１ ） 提 高 ２ ９． １ ％， 在 １ ０ ｔ 发酵罐 上 连续 ６批 验 证 ， 平 均发酵 效价 ７ ０ １ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比原 生 产水 平 （ ５ ６ ５ ２ ｕ ／ ｍ１ ） 提高 ２ ４． １ ％， 并且 质 检全 部合 格 ， 对生 产实 际具 有 重要 意义 。 关 键 词 ： 红 霉 素 ； 红霉 素链 霉菌 ； 诱 变育 种 ； 定 向筛 选
菌 种 曾有 报 道 。 如 张 筱 玉 等 … １利 用 抗 结 构 类 似 物 乙
我们根据 上述考虑 ， 应用 Ｌ ｉ Ｃ １ 与 ＵＶ 复 合 诱 变 处 理， 提 高 了诱 变 效 率 。 在 此 基 础 上 ， 采 用 定 向筛 选 的 方 法， 以多 种 结 构 类 似 物 为 筛 选 剂 ， 经过 大 量筛 选 ， 获 得 红霉 素 高 产 菌 株 Ｍ． ０ ３ ． ５ ９ ， 收 到 了 较 理 想 的效 果 。
斜 面培 养 基 、 分离培养基 、 种 子 培 养 基 和发 酵 培 养 基 均参见文 献… １。
１ ． ３ 诱 变 处理
变 ３ ０ ｓ 后 的突 变 株 在 含 Ｓ ｌ 、 Ｓ ２ 、 Ｓ ３ 、 Ｓ ４四 种 化 合 物 培 养 基 上 筛 选 分别 获 得 Ｍ一 ０ １ — ２ ７ 、 Ｍ一 ０ ２ — ８ ４、 Ｍ一 ０ ３ — ５ ９ 、 Ｍ一 ０ ４ —
结果见表 １ 。 ２ ． ３ １ ０ ｔ 发 酵罐 验 证 结 果
右） ， ３ ６ ℃恒 温培养 ４ ８ ｈ 。
１ ． ３ ． ２ 紫 外 线诱 变 处 理 取 Ｌ ｉ ＣＩ 处 理 过 的孢 子 悬 液 １ ０ ｍｌ 于直径９ ｃ ｍ定 量 培 养 皿 中 ， 磁 力 搅拌 ， 紫 外 线 照
中 图 分 类 号 ：Ｒ ９ ７ ８ ． １ ５ 文 献标 识码 ： Ａ
近年来 ， 由于 红 霉 素 及 其 衍 生 物 的 广 泛 使 用 ， 导致 红 霉 素 的需 求 量 大 幅 增 加 。 然 而 国 内大 多企 业 红 霉 素 发 酵水 平 不 高 ， 一直在 ６ ０ ０ ０ ｕ ／ ｍｌ 左 右徘 徊 ， 与 国 外 相 比存 在 较 大 差 距 。笔 者 通 过 对 红 霉 素 链 霉 菌 （ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ — ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｓ ｅ ｒ ｙ ｔ ｈ ｒ ｅ ｕ ｓ ） 生 产 菌种 分 离 纯 化得 到 ０ — １ １ — ２ ６菌 株， 经 Ｌ ｉ ａ 和 ＵＶ 诱 变 处 理 后 ， 采用定 向筛选 的方法 ，
［ ４ ］ Ｗａ ｎ ｇ Ｘ Ｃ ．Ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ［ Ｍ］ ．Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ ： Ｔｓ ｉ ｎ ｇ ｈ ｕ ａ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
Ｐｒ ｅ ｓ ｓ ， ２ ０ ０１ ： ３ ４ ８
（ 上接第 １ ３ ０页 ）
Ｐｒ ｏ ｔ ｏ ｐｌ ａ ｓ ｔ ｓ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｐｅ ｎｉ ｃ ｉ ｌ ｌ ｉ ｎ ｐｒ ｏ ｄｕｃ ｉ ｎｇ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎｓ
似 物 的 突 变株 ， 也 可 能 获得 红 霉 素 高 产 菌 株 。
水平 ５ ６ ５ ２ ｕ ／ ｍｌ 提高 ２ ４ ． １ ％， 产 品质 检 全 部 合 格 ， 因 此
对 生 产 实 际具 有 重 要 意 义 。
应 用 ＵＶ诱 变 和抗 结 构类 似 物 的方 法 选 育 红 霉 素
碳 架 来 源 于丙 酸 盐 和 丙 酰 Ｃ ｏ Ａ［ ３ ］ ， 增 加 丙 酸 盐 的 浓 度
本 实 验 所 得 的 ４株 新 变 株 摇 瓶 效 价 均 比对 照 组 有
较大 提 高 ， 其 中 Ｍ． ０ ３ ． ５ ９菌 株 高 达 ６ ８ ７ ６ ｕ ／ ｍｌ ， 比 出 发 菌株 ０ ． １ １ ． ２ ６高 ２ ９ ． １ ％ 。Ｍ． ０ ３ ． ５ ９菌 株 在 １ ０ ｔ发 酵 罐
ｍａ ｎ ｉ ｐ ｕ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｓ ｔ ｒ ｅ ｐ ｔ ｏ ｍｙ ｃ ｅ ｓ ｅ ｒ ３ ｒ ｔ ｈ ｒ ｅ ｕ ｓ［ Ｊ ］ ．Ｊ Ｓ ｈ ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ ｆ ２
表２ Ｍ一 ０ ３ — ５ ９在 ｌ Ｏ ｔ 发酵 罐上 验证 结果
Ｐ ｈ ａ ｒ ｍ， １ ９ ８ ５ ， ２ （ ４ ） ： ２ ９ ５