氯霉素及分析方法

1 绪论

1.1 引言

随着社会经济的快速发展和人民生活水平的提高，动物源性食品在人们生活中所占比例越来越大，部分不法养殖户为追求经济效益最大化，不同程度的在饲料中添喂人用抗生素，使畜禽肉品中抗生素残留严重，成为的食品安全的重要问题之一。各国政府严格限制食品中各种有害成分，特别是抗生素、农药残留等。

食品安全检测是保障食品安全的基础，是监督管理的重要手段。为了有效地保障食品安全，就必须对食品安全中的各类样品进行准确地分析测定。目前食品安全检验部门通常采用气相色谱、液相色谱等分析仪器。然而使用这些仪器进行分析测定前，必须把样品制成溶液。

由于食品样品具有被测物浓度低、组分复杂、干扰物质多、易受环境影响而变化等特点，因此要获得数据准确、重现性好的分析结果，样品预处理是重要环节。样品预处理已成为分析化学领域中一个重要的分支，传统的样品预处理方法有液-液萃取、索氏提取、层析、蒸馏、吸附、离心、过滤等几十种。这些方法一般要使用大量的有机溶剂，而且处理时间长、操作步骤复杂，容易导致样品损失和玷污，产生较大误差。因此，迫切需要探索高准确度、快速、简单、不使用或少使用有机溶剂的样品预处理方法，发展较快的有固相萃取、固相微萃取等。

固相萃取技术以其高效性、高选择性、高自动化程度以及低耗性等特点被广泛地应用在生物医学、食品分析、环境分析等领域[1]，其关键是优良的固相萃取材料的制备。因此制备选择性高的固相萃取材料已为研究的热点。

1.2 氯霉素样品预处理及检测方法

1.2.1 氯霉素类抗生素来源及危害

我国是一个养殖大国，近年来养殖业飞速发展。由于集约化的高密度养殖、珍贵品种引进、使用催生长激素、环境污染等因素导致了养殖环境的恶化和畜禽疾病增加，又由于畜禽疾病防治体系的不健全和欠缺用药指导和规范管理，在养

殖业中滥用抗生素现象严重。比如不遵守休药期、超剂量使用、超范围使用违反国家法规规定等等，从而造成动物源食品中的抗生素的残留。这部分残留抗生素就转移到了人们体内，这会使人产生对抗生素的抗性，从而影响以后用药的效果。

CAP广泛用于各种传染性疾病的治疗，通过抑制细菌蛋白质合成而发挥抑菌作用，对大多数革兰氏阳性和阴性菌有效，对革兰氏阳性菌作用性较强，特别是对伤寒副伤寒杆菌作用最强。但CAP对人体存在严重的毒副作用，主要是抑制骨髓造血功能，引起粒细胞和血小板减少以及再生障碍性贫血；除此以外对消化系统神经系统也有严重的毒性反应，可引起视神经炎、急性中毒性表皮松懈症、角膜瘫痕、皮疹等不良反应，对新生儿、早产儿、老年人以及肝肾功能不全的病人影响更大[2]。近年有儿童服用CAP和老年人使用CAP眼膏导致死亡事件的报道。CAP的应用已有近50年的历史，但由于上述毒副作用使CAP成为第一个被禁止用于可食用动物的抗生素。

CAP在动物性食品中的残留严重威胁着人类健康，因此CAP残留问题已引起国际组织和许多国家及地区有关部门的高度重视。欧盟均在法规中规定CAP 残留限量标准为“零容许量”[3]，即不得检出。美国仅允许CAP用于非食用动物，FDA规定的CAP检出限为0.3 ng/ml，而且目前正在研究应用更灵敏的检测方法[4]。我国农业部已将CAP从2000年版的《中国兽药典》中删除，作为禁用药品。在2002年底的农业部第235号公告《动物源性食品中兽药最高残留限量》中明确规定CAP 在动物性食品中不得检出，对于用酶联免疫（ELISA）和高效液相色谱分析法（HPLC）检测时要求其检测限量为1 ng/mL。

1.2.2 样品预处理方法

1.2.2.1 固体样品预处理方法

固体样品的预处理方法通常有索氏提取、超声萃取、微波辅助萃取等，近几年发展了一种新的绿色预处理技术—亚临界水萃取。

1）索氏提取

索氏提取（Soxhlet Extraction，SOX）利用虹吸原理，保持提取溶剂与提取样品充分反应，因而消除了振荡提取中的传质不平衡，其设备花费低、提取样品范围广、且易于操作，迄今仍被广泛应用。但索氏提取技术需要较长提取时间

( >18h)，受提取物干扰影响较大，提取过程需要消耗大量溶剂，大量的提取溶剂不仅花费高而且对环境造成新的污染，因而此技术不宜于批量处理样品。

2）超声萃取

超声波是一种弹性机械振动波，它的强烈振动产生高速度、强烈的空化效应，从而引起的剧烈机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应和热效应等，加速被萃取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，从而缩短了萃取时间，提高了萃取效率。超声萃取（Ultrasonic Extraction）设备简单，技术成熟，对被萃取物基本上没有选择性差异，可作为一种通用型的萃取方法。

Aleixo等[5]将超声萃取技术用于食品中铅和镉的萃取。他们将待测样品粉碎后加入适量硝酸，超声处理5～10min后离心，并用原子吸收进行了分析。实验结果表明条件优化后的超声萃取对蔬菜和动物组织中铅、镉的回收率可达89%～105%。超声萃取具有快速、价廉、高效的特点，与传统的索氏萃取相比，耗时短，溶剂用量少，设备简单，操作容易。但是超声萃取过程中超声波有可能破坏某些分析物，且仪器保养要求高。

3）微波辅助萃取

微波辅助萃取（Microwave-assisted Extraction，MAE）是80年代才发展起来的一项新型分离技术，微波是一种频率范围在300-300,000兆赫的电磁波，常用范围为2450兆赫，即微波产生的电场正负讯号每秒钟可以变换24.5亿次。极性分子在微波电场的作用下，以每秒24.5亿次的速率不断改变其正负方向，使分子产生高速的碰撞和摩擦而产生高热，从而加速了两相间的传质过程，升温快速而均匀，使溶剂萃取时间大大缩短。T.H.Hoang等[6]采用MAE技术从各种固体剂中提取有效药物成分，以甲醇-水（75：25，V/V）为萃取溶剂，50 ℃的条件下萃取5 min，得到有效成分的回收率为97.4~101.9%。

4）亚临界水萃取

亚临界水萃取（Subcritical Water Extraction，ScWE）是一种新的绿色样品预处理技术，其设备简单、萃取时间短，通过改变亚临界水温度和压力来改变水的极性、表面张力和粘度，从而可以选择性地萃取样品基体中的不同极性的有机化合物，甚至金属离子。由于采用纯水作萃取剂，不用或很少用有机溶剂，因此它对环境没有污染或污染很少。Yu Yang等[7]研究了用亚临界水萃取工业污染土壤