利用AFLP构建大白菜高密度遗传连锁图谱
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国 各 地 均 有 栽 培 ， 在 整 个 蔬 菜 生 产 中 占 有 很 重 要 的地 位 。 它
１ 材料 与 方 法
１ １ 作 图群 体 ．
２ Ｏ世纪 ９ Ｏ年代 以来 ， 随着对 白菜类遗 传作 图研究 的逐 步深 入， 利用不同材料不 同群体 构建 的遗传 图谱相继 出现 。Ｓ ｎ ｏｇ 等 …以结球 白菜 Ｍｉ ｉ 和 Ｓｒ ｇｂｏｃｌ杂 交的 Ｆ 体为 ｃｌ ｈｉ ｐｉ ｒｃｏｉ ｎ 群 材料构 建了第 １张 白菜类 Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ连锁 图谱 ， 张图谱包 含 了 这 １ ０个连锁群 体 、８ ２０个 标 记 ， 盖基 因组 长度 为 １８ ０ｃ 覆 ５ Ｍ。 Ｃ ｙ 等 以 ｒｐｓｅ ｒｐ ｈｉ ａｅｅｄｃｏｓ的 Ｆ 群体 为材料 ， ２ 构建 了 １张连 锁 图谱 ， 图谱 以 ２ ９个 克 隆 染 色 体 为 对 象 ， 长 度 为 该 ６ 总
王 剑 ， 许 磊 Ｓ ｙ ｎＣ ｏ ， ｏｇＰ ｏＬｍ ，朴钟 云 ，ｕ Ｒ ｕ ｈ ｉ Ｙ ｎ ｙ ｉ 。
（ ． 阳农业大学园艺学院 ， １沈 辽宁沈 阳 １０ ６ ； １ １ １ ２ Ｃ ｌｇ ｆ ｇ ｃｌ ｒ ｎ ｉ ｃｅｃ ，ｈ ｎｎ ｍ Ｎ ｔｎｌＵ ｉ ｒｉ ， ａｊｏ ０ ． ｏｌ ｅｏ ｒ ｕｔ ｅａｄＬｆ ＳｉｎｅＣ ｕ ｇａ ａｉ ａ ｎｖ ｓｙ Ｄ ｅｅｎ３ ５—７４， ｏｅ ） ｅ Ａｉ ｕ ｅ ｏ ｅ ｔ ６ Ｋ ｒａ
１８ ６ｃ 包 含 了 ３ ０个 Ｒ Ｌ ７ Ｍ， ６ Ｆ Ｐ标 记 。Ｍａ ｕ ｏ ｔｍｔ ｓ ｏ等 以结 球 白菜 为 试 材 ， 立 了含 有 ６ 建 ３个 Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ标 记 、 盖 基 因 组 长 度 覆
以花药离体方法培养获得 的抗 根肿病 大 白菜 Ｄ Ｈ系 Ｃ Ｒ Ｓ ｉｋ 为父本 ， ｈｎ ｉ 感病 自交系 ９ Ｋ为母本杂交获得 Ｆ ， 。 ４Ｓ Ｆ 自交
江苏农业科学
２１ ０ ０年第 １ 期
一 ２ ７一
王 剑 ， 磊，ｕＲ ｎ ｈｉ等． 用 Ａ Ｌ 许 ｓ ｙｎＣ ｏ， 利 Ｆ Ｐ构建大 白菜高密度遗传连锁 图谱 ［ ］ Ｊ ．江苏农业科学，０ ０ １ ： — ０ ２ １ （ ） ２ ３ ７
利用 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ构建大 白菜 高密度遗传 连锁 图谱
与抗根肿病基 因 Ｃ ｂ紧密 连锁的 Ａ Ｌ Ｒ Ｆ Ｐ标记转化成 的 Ｓ Ａ Ｃ Ｒ标记构建 了一张包含 ５６个标记位点 、Ｏ个 连锁群 、 盖 ５ ｌ 覆 基 因组长度为 ７ ５ｃ 的连锁 图谱 。该 图谱 中每个连 锁群上 的标记 数在 １ ９ Ｍ ０—８ ３个之 间 ， 均 图距 在 ０ ８ 平 ． ６—４ ３ Ｍ ．４ ｃ 之间 ， 连锁群 长度在 ４ ． ２ Ｍ 之间 。Ｃ ｂ基 因定位 于第 ３连锁群 ９ｃ 的范围内。 ３４～１０ ９ｃ Ｒ Ｍ 关键词 ：Ａ Ｌ ；大 白菜 ； ＦＰ 遗传连锁 图谱 ； 抗根肿病基 因 中 图分 类 号 ：Ｓ３ ．０ ． 文 献 标 志 码 ：Ａ ６４ １３ ６ 文 章 编 号 ：０ ２— ３ ２ ２ １ ） １ ０ ２ ０ １０ １０ （０ ０ ０ — ０ ７— ４ 大 白菜 ［ ｒｓｃ ａａＬ ｓ．ｐｋ ｅｉ Ｌｕ．）Ｏｓｏ ］ Ｂ ａ ｉ ｒ ．ｓ ｓａ ｐ ｐ ｅｉ ｓ ｎ ｓ（ ｏ ｒ ｌ ｎ ｓ 是芸薹属植物 中最重要的叶菜类作 物之一 ， 原产于我国 ， 在全
成 ， 长 度 为 １１２ｃ 总 ８ Ｍ。 本 研 究 以大 白菜 根 肿 病 抗 性 材 料 Ｃ ｈｎ ｉ Ｈ 系 和 感 Ｒ Ｓ ｉｋ Ｄ
条件 采用 Ｐａ 等 的方法 ， ｉｏ 扩增产物 利用 ７ 变性聚丙烯 酰 ％
胺 凝 胶 电泳 后 银 染 法 染 色 ， 染 方 法 采 用 Ｂｏｅｒ 司 提供 的 银 ｉ ｅ公 ｎ 银 染 试 剂 盒 的步 骤 。
６个 由 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ标 记转 化 成 的根 肿病 抗 性 基 因 Ｃ ｂ连锁 Ｒ ＳＡ Ｃ Ｒ标记应用于大 白菜遗传连锁图谱的构建。
１４ Ａ Ｌ ． Ｆ Ｐ标 记 的记 录 和 命 名
获得 Ｆ ， ：随机选取 １８个 Ｆ 植株作 为作 图群体 。 ３ ：
１ ２ 基 因组 总 Ｄ Ａ提 取 ． Ｎ
亲本及构 图 群 体 的 Ｄ Ａ 提 取 采用 修 改 的 Ｐｅｒ 的 Ｎ ｉｒ ｅ等
方 法 。 １３ Ａ Ｌ ． Ｆ Ｐ分 析
ＡＬ Ｆ Ｐ采 用 Ｖ ｓ 的 方 法 。双 亲 及 构 图群 体 Ｄ Ａ利 用 ｏ等 Ｎ ２种 限制 性 内切 酶 ￡ Ｉ Ｔｕ 和 ｒ９ Ｉ同 时进 行 酶 切 。Ｐ Ｒ反应 Ｃ
摘要：以大 白菜根肿病抗性材料 ｃ ｈ ｋ Ｄ ＲＳ ｉ ｉ Ｈ系和感 病性材料大 白菜 自交系 ９ Ｋ杂交 Ｆ 的 １８ 单株作为构 ｎ ４ｓ ２ ３个 建遗传 图谱 的群体 。利用 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ技术通过 ４ ５对引物筛选共获得 ８５个 Ａ Ｌ ３ Ｆ Ｐ标记 ， 应用其 中 ６ ８个 Ａ Ｌ ０ Ｆ Ｐ标记和 ６个
Βιβλιοθήκη Baidu
为 ７５ｃ 的连锁 图谱 。张鲁 刚等 以芜菁和结球 白菜 杂交 ３ Ｍ 获得的 Ｆ 群体 ， ２ 构建 了我国第 １张白菜 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ连锁 图谱 。于 拴仓等 以大 白菜 重组 自交 系为作 图群 体 ， 构建 了包 含 ２６ ５ 个 Ａ Ｌ 标记 和 ８ ＦＰ ７个 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ标记 的连锁 图谱 。王美 等 利 用大 白菜 Ｄ 群 体 构 建 了 １张 包 含 ３ ６个 标 记 、 长 度 Ｈ ４ 总 ８ ９ １ｃ 的连锁 图谱 。 ｈｉ …以大 白菜 的双单倍 体为分离 ０ ． Ｍ Ｃｏ等 群体 ， 综合利用 Ａ Ｌ 、 Ａ Ｄ、Ｔ 、Ｓ Ｆ Ｐ Ｒ Ｐ Ｓ Ｓ Ｓ Ｒ标 记技术 构建 了芸薹 种基 因组计划的框架遗传连锁图谱 ， 图谱 由 ｌ 该 Ｏ个连锁群构
１ 材料 与 方 法
１ １ 作 图群 体 ．
２ Ｏ世纪 ９ Ｏ年代 以来 ， 随着对 白菜类遗 传作 图研究 的逐 步深 入， 利用不同材料不 同群体 构建 的遗传 图谱相继 出现 。Ｓ ｎ ｏｇ 等 …以结球 白菜 Ｍｉ ｉ 和 Ｓｒ ｇｂｏｃｌ杂 交的 Ｆ 体为 ｃｌ ｈｉ ｐｉ ｒｃｏｉ ｎ 群 材料构 建了第 １张 白菜类 Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ连锁 图谱 ， 张图谱包 含 了 这 １ ０个连锁群 体 、８ ２０个 标 记 ， 盖基 因组 长度 为 １８ ０ｃ 覆 ５ Ｍ。 Ｃ ｙ 等 以 ｒｐｓｅ ｒｐ ｈｉ ａｅｅｄｃｏｓ的 Ｆ 群体 为材料 ， ２ 构建 了 １张连 锁 图谱 ， 图谱 以 ２ ９个 克 隆 染 色 体 为 对 象 ， 长 度 为 该 ６ 总
王 剑 ， 许 磊 Ｓ ｙ ｎＣ ｏ ， ｏｇＰ ｏＬｍ ，朴钟 云 ，ｕ Ｒ ｕ ｈ ｉ Ｙ ｎ ｙ ｉ 。
（ ． 阳农业大学园艺学院 ， １沈 辽宁沈 阳 １０ ６ ； １ １ １ ２ Ｃ ｌｇ ｆ ｇ ｃｌ ｒ ｎ ｉ ｃｅｃ ，ｈ ｎｎ ｍ Ｎ ｔｎｌＵ ｉ ｒｉ ， ａｊｏ ０ ． ｏｌ ｅｏ ｒ ｕｔ ｅａｄＬｆ ＳｉｎｅＣ ｕ ｇａ ａｉ ａ ｎｖ ｓｙ Ｄ ｅｅｎ３ ５—７４， ｏｅ ） ｅ Ａｉ ｕ ｅ ｏ ｅ ｔ ６ Ｋ ｒａ
１８ ６ｃ 包 含 了 ３ ０个 Ｒ Ｌ ７ Ｍ， ６ Ｆ Ｐ标 记 。Ｍａ ｕ ｏ ｔｍｔ ｓ ｏ等 以结 球 白菜 为 试 材 ， 立 了含 有 ６ 建 ３个 Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ标 记 、 盖 基 因 组 长 度 覆
以花药离体方法培养获得 的抗 根肿病 大 白菜 Ｄ Ｈ系 Ｃ Ｒ Ｓ ｉｋ 为父本 ， ｈｎ ｉ 感病 自交系 ９ Ｋ为母本杂交获得 Ｆ ， 。 ４Ｓ Ｆ 自交
江苏农业科学
２１ ０ ０年第 １ 期
一 ２ ７一
王 剑 ， 磊，ｕＲ ｎ ｈｉ等． 用 Ａ Ｌ 许 ｓ ｙｎＣ ｏ， 利 Ｆ Ｐ构建大 白菜高密度遗传连锁 图谱 ［ ］ Ｊ ．江苏农业科学，０ ０ １ ： — ０ ２ １ （ ） ２ ３ ７
利用 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ构建大 白菜 高密度遗传 连锁 图谱
与抗根肿病基 因 Ｃ ｂ紧密 连锁的 Ａ Ｌ Ｒ Ｆ Ｐ标记转化成 的 Ｓ Ａ Ｃ Ｒ标记构建 了一张包含 ５６个标记位点 、Ｏ个 连锁群 、 盖 ５ ｌ 覆 基 因组长度为 ７ ５ｃ 的连锁 图谱 。该 图谱 中每个连 锁群上 的标记 数在 １ ９ Ｍ ０—８ ３个之 间 ， 均 图距 在 ０ ８ 平 ． ６—４ ３ Ｍ ．４ ｃ 之间 ， 连锁群 长度在 ４ ． ２ Ｍ 之间 。Ｃ ｂ基 因定位 于第 ３连锁群 ９ｃ 的范围内。 ３４～１０ ９ｃ Ｒ Ｍ 关键词 ：Ａ Ｌ ；大 白菜 ； ＦＰ 遗传连锁 图谱 ； 抗根肿病基 因 中 图分 类 号 ：Ｓ３ ．０ ． 文 献 标 志 码 ：Ａ ６４ １３ ６ 文 章 编 号 ：０ ２— ３ ２ ２ １ ） １ ０ ２ ０ １０ １０ （０ ０ ０ — ０ ７— ４ 大 白菜 ［ ｒｓｃ ａａＬ ｓ．ｐｋ ｅｉ Ｌｕ．）Ｏｓｏ ］ Ｂ ａ ｉ ｒ ．ｓ ｓａ ｐ ｐ ｅｉ ｓ ｎ ｓ（ ｏ ｒ ｌ ｎ ｓ 是芸薹属植物 中最重要的叶菜类作 物之一 ， 原产于我国 ， 在全
成 ， 长 度 为 １１２ｃ 总 ８ Ｍ。 本 研 究 以大 白菜 根 肿 病 抗 性 材 料 Ｃ ｈｎ ｉ Ｈ 系 和 感 Ｒ Ｓ ｉｋ Ｄ
条件 采用 Ｐａ 等 的方法 ， ｉｏ 扩增产物 利用 ７ 变性聚丙烯 酰 ％
胺 凝 胶 电泳 后 银 染 法 染 色 ， 染 方 法 采 用 Ｂｏｅｒ 司 提供 的 银 ｉ ｅ公 ｎ 银 染 试 剂 盒 的步 骤 。
６个 由 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ标 记转 化 成 的根 肿病 抗 性 基 因 Ｃ ｂ连锁 Ｒ ＳＡ Ｃ Ｒ标记应用于大 白菜遗传连锁图谱的构建。
１４ Ａ Ｌ ． Ｆ Ｐ标 记 的记 录 和 命 名
获得 Ｆ ， ：随机选取 １８个 Ｆ 植株作 为作 图群体 。 ３ ：
１ ２ 基 因组 总 Ｄ Ａ提 取 ． Ｎ
亲本及构 图 群 体 的 Ｄ Ａ 提 取 采用 修 改 的 Ｐｅｒ 的 Ｎ ｉｒ ｅ等
方 法 。 １３ Ａ Ｌ ． Ｆ Ｐ分 析
ＡＬ Ｆ Ｐ采 用 Ｖ ｓ 的 方 法 。双 亲 及 构 图群 体 Ｄ Ａ利 用 ｏ等 Ｎ ２种 限制 性 内切 酶 ￡ Ｉ Ｔｕ 和 ｒ９ Ｉ同 时进 行 酶 切 。Ｐ Ｒ反应 Ｃ
摘要：以大 白菜根肿病抗性材料 ｃ ｈ ｋ Ｄ ＲＳ ｉ ｉ Ｈ系和感 病性材料大 白菜 自交系 ９ Ｋ杂交 Ｆ 的 １８ 单株作为构 ｎ ４ｓ ２ ３个 建遗传 图谱 的群体 。利用 Ａ Ｌ Ｆ Ｐ技术通过 ４ ５对引物筛选共获得 ８５个 Ａ Ｌ ３ Ｆ Ｐ标记 ， 应用其 中 ６ ８个 Ａ Ｌ ０ Ｆ Ｐ标记和 ６个
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为 ７５ｃ 的连锁 图谱 。张鲁 刚等 以芜菁和结球 白菜 杂交 ３ Ｍ 获得的 Ｆ 群体 ， ２ 构建 了我国第 １张白菜 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ连锁 图谱 。于 拴仓等 以大 白菜 重组 自交 系为作 图群 体 ， 构建 了包 含 ２６ ５ 个 Ａ Ｌ 标记 和 ８ ＦＰ ７个 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ标记 的连锁 图谱 。王美 等 利 用大 白菜 Ｄ 群 体 构 建 了 １张 包 含 ３ ６个 标 记 、 长 度 Ｈ ４ 总 ８ ９ １ｃ 的连锁 图谱 。 ｈｉ …以大 白菜 的双单倍 体为分离 ０ ． Ｍ Ｃｏ等 群体 ， 综合利用 Ａ Ｌ 、 Ａ Ｄ、Ｔ 、Ｓ Ｆ Ｐ Ｒ Ｐ Ｓ Ｓ Ｓ Ｒ标 记技术 构建 了芸薹 种基 因组计划的框架遗传连锁图谱 ， 图谱 由 ｌ 该 Ｏ个连锁群构