病毒性肝炎标志物检测

抗原组成(四)-- Pre-S抗原
位于HBV的外衣壳上，有两种
刺激机体产生抗Pre-S1和抗Pre-S2，能阻断 HBV与肝细胞受体结合，从而起到抵抗病 毒的作用 抗Pre-S1和抗Pre-S2的出现，表示病情好转， 趋向痊愈
传染源
患者
潜伏期 急性期 慢性期
无症状HBsAg携带者
病毒性肝炎标志物检测
病毒性肝炎- 背景
A
病毒性肝炎
Hepatitis Virus
E
NANB
肠道传播
B
D
C
F, TTV ? 其它
肠道外传播
病毒性肝炎类型
A
传染源 粪便
B
血液/
C
D
E
粪便
血液/ 血液/ 血源性物质/ 血源性物质/ 血源性物质/ 体液 体液 体液 经皮肤/ 经粘膜 是 dsDNA 经皮肤/ 经粘膜 是 ssRNA 经皮肤/ 经粘膜 是 ssRNA
肝合成白蛋白、脂蛋白、凝血因子、纤溶因子、 各种转运蛋白等，肝脏受损时，这些蛋白下降 γ球蛋白（非肝脏合成）在肝实质细胞受 损、间质细胞增生时，球蛋白生成增加
肝功能
1.代谢功能： 1) 蛋白质、脂肪的同化、储存、异化等 2) 核酸代谢、维生素的活化和储藏 3) 胆红素、胆酸的生成分泌、排泄功能 如对胆红素的排泄 2.分泌、排泄功能：如对胆红素的排泄 3.生物转化功能：氧化、还原、水解、结 合
A
60-80 g/L
40-50 g/L
G
A/G
20-30 g/L
1.5-2.5 : 1
临床意义
1. 总蛋白增高 1）血液浓缩：见于重度腹泻、呕吐、高热、 休克等 2）蛋白质合成：主要是G，如多发性骨髓 瘤、肝硬化、淋巴瘤 总蛋白降低
1）血液稀释，各种原因所致的水盐潴留
2）各种原因的A降低
临床意义
抗原组成(一)--HBsAg
位于病毒表面，是一种糖蛋白
4种亚型(adr,adw,ayr,ayw)
欧美国家: adw 我国汉族: adr 我国少数民族: ayw
判断HBV感染的指标之一
刺激机体产生保护性抗体即抗-HBs
抗原组成(二)-- HBcAg
位于Dane颗粒核心部分和肝细胞核内，在 血清中不易检出游离的HBcAg 主要成分是蛋白质 刺激机体产生抗-HBc(非保护性抗体) 在乙肝急性期、恢复期和HBsAg携带者中 常可检出抗-HBc 抗-HBc IgM常提示病毒处于复制状态
2、白蛋白降低 1) 合成不足：常见肝脏损害(慢性肝病 时,A下降 比急性肝炎明显;失代偿期肝硬化低于代偿期肝硬 化） 2) 原料不足：长期饥饿、腹泻、消化道肿瘤和 消化不良等 3)去路增加 丢失过多：肾炎、肾病综合征、大量胸腹水 严重烧伤和失血消耗过多：甲亢、糖尿病、恶性肿 瘤等 白蛋白增高 ：少见，脱水致血液浓缩
加重时 Α、α1-G、α2-G、β-G 均降低
γ-G升高
临床意义
2）肝硬化 Α、α1-G、α2-G、 β-G 均降低 γ-G 升高 3）肝癌 Α 降低
α1-G、α2-G、γ-G升高
偶见甲胎蛋白带出现
血清前蛋白测定
定 义：
PAB(prealbumin)是一种载体蛋白,在电泳图谱 上位于白蛋白前方看到一条染色很浅的区带，这 就是前白蛋白 前白蛋白在肝脏合成，其半寿期短（约2天),比 白蛋白更能早期反映肝脏损害情况，为肝细胞损 害早期灵敏的指标
实验室检查的目的
了 解：
肝脏有无损伤及损伤的程度 监测肝功能状态 协助病毒性肝炎和肝癌的诊断 评价肝脏的储备功能 其他
一）血清总蛋白、白蛋白、球蛋白 A/G比值测定
1）血清总蛋白（TP，serum total protein）
是血清所含各种蛋白的总称,包括血清A和G，各 占60%和40% 2）白蛋白（A，albulin)为血液中主要蛋白质。由 肝脏合成，其半衰期为15-19天
VII、IX、XI
明显减少
缺乏
2) 血浆凝血酶原时间（PT）延长 I、II、V、VII、X
3) 活化的部分凝血活酶时间（APTT）延长
XII、XI、IX、VIII、X、V、II 等缺乏
胆红素代谢功能检查
胆红素种类
1)未结合胆红素（间接胆红素）:即UCB，指 游离胆红素和胆红素-白蛋白统称未结合胆 红素
参考值
总胆红素 结合胆红素 非结合胆红素 1.7-17.1 umol/L 0-6.8 umol/L 1.7-10.28 umol/L
临床意义
1）总胆红素判断有无黄疸及黄疸的程度
隐性黄疸 17.1-34.2 umol/L
轻度黄疸
中度黄疸
34.2-171
171-342
umol/L
umol/L
重度黄疸
临床意义
（2）慢性肝炎和脂肪肝 : 轻度上升（100-200U）或正常
（3）肝硬化、肝癌 : 轻度上升（100-200U）或正常
2、γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）
1）γ-G活性 肾 > 胰 >肝 2）在肝γ-GT广泛分布于肝细胞毛细胆管
侧和整个胆管系统，在胆汁淤滞时,肝 内γ-GT合成亢进，肝癌可合成γ- GT 3）参考值 男 女 11-50U/L 7-30U/L
3）球蛋白 (G，globulin)：为血清总蛋白中除去 白蛋白以外的蛋白质,是多种蛋白质的混合物，包 括：免疫球蛋白和补体、各种糖蛋白、脂蛋白、 金属结合蛋白和酶 球蛋白主要是由单核-吞噬细胞系统合成,与机体 免疫有关
4）A/G比值：> 1 ，如<1 称A/G比值倒臵
参 考 值
TP
3) GOT现名天门冬氨酸氨基转移酶（AST）。 此酶在心肌含量最高，肝脏为第三，在肝 损害时，其漏出量也较ALT低
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
临床意义
（1）急性病毒性肝炎转氨酶阳性率80-100%
A、在发病前，ALT与AST即有升高，最高值 >500U,随病情好转逐渐下降至正常 B、病情恶化，转氨酶反下降，是肝细胞广 泛坏死的表现 C、在急性肝炎的恢复期，如转氨酶在100U 左右波动或再上升,提示急性转为慢性
病原学诊断(一)--抗原抗体检测
项目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗HBe、抗-HBc以及抗-HBc IgM 方法
ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay， 最常用，定性) 发光免疫分析(定量) 反相间接血凝试验(少用)
ELISA的基本原理
溶血性黄疸 阻塞性黄疸 肝性黄疸
正常人及三种黄疸的胆红素代谢检查结果
血清胆红素（umol/L） STB CB UCB 正常人1.7-17.1 0-6.8 1.7-10.2
（-）
CB/ STB
20%
尿 尿胆原 胆红素
（-） 弱阳性
溶血性 肝性 阻塞性
性 明显 中度 明显
明显 中度
<20% > 20，<50% >60
2)结合胆红素或直接胆红素:即CB,指胆红素 葡萄糖醛酯或其硫酸酯称结合胆红素 3)总胆红素（STB):为非结合胆红素和结合胆 红素的总量
UCB和CB的特点和理化性质
UCB
结构特点
CB
游离胆红素 与葡萄糖醛酸结合 或胆红素-白蛋白 585 间接反应 易，有毒性
分子量 重氮反应 透过生物膜 水溶性
直接反应 不易
PAB的意义
急性肝炎:PAB无下降
慢性肝炎、肝硬化、肝癌、重症肝炎: PAB平均 下降 >50%
慢性肝炎PAB的监测 PAB持续降低：肝硬化
PAB升高：预后较好 PAB持续降低:预后较差 肝移植病人的监测：反映移植肝的合成功能
凝血功能检查
肝脏严重受损时，肝脏合成凝血因子功能下 降，故凝血时间延长 1) 凝血时间（CT）延长
明显
（-） （++） 强阳
血清酶学检查
1、血清转氨酶测定
1）转氨酶：是将α氨基酸的氨基转移到α-酮
酸的酮基上的一种酶
用于肝功能检查的主要是谷氨基丙酮酸转移酶
（GPT）和谷氨酸草酰乙酸转移酶（GOT）
2) GPT经WHO命名为丙氨酸氨基转移酶(ALT),存
在于肝细胞胞浆中，因肝内该酶活性较血清 约高100倍，故只要有1%肝细胞坏死,即可使 血清中的ALT增高1倍,因此,它是最敏感的肝 功能检测指标之一
肝癌标志物的检查
在肝细胞癌时,由于肝细胞功能异常，产 生出一些与肝细胞癌密切相关的蛋白质, 称为肝癌的肿瘤标志物，对肝癌的诊断 有重要意义
意义
1）肝癌 A、肝内阻塞 肝癌细胞产生 B、阳性率>95% 2）阻塞性黄疸:γ-GT（上升幅度与黄疸程度平 肝癌合成 胆汁淤滞 γ-GT
行）
意义
3)急性肝炎:中度升高 ， < 200U 若恢复期，γ-GT为唯一升高的酶,提示 肝炎未愈 4)慢性肝炎、肝硬化：若持续升高，为病 情不稳定或恶化趋势，若逐渐下降，为 病情趋向非活动性 5)酒精性肝损害：AST、 ALT γ-GT （中度） >1000U 6)急性酒精性肝炎：γ-GT （轻度），
血清学检测的临床意义
HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 临床意义
+ + + -
+ + +
+ + -
+ + -
+ + + + -
急性或慢性感染(大三阳)
乙肝后期或慢性感染(小三阳) 潜伏期或急性乙肝早期 痊愈或恢复期,有免疫力 痊愈,有免疫力 疫苗接种或曾经感染过,有免疫力
蛋白质代谢功能的检查
>342
umol/L
临床意义
2）根据黄疸程度判断黄疸原因
（总胆红素水平） 完全阻塞性黄疸 不完全阻塞性黄疸 >342 umol/L
171-342 umol/L
肝性黄疸
溶血性黄疸
17.1-171 umol/L
<85.5 umol/L
临床意义
3）根据STB、CB及UCB判断黄疸类型
STB + UCB STB + CB STB + CB + UCB
当A/G< 1时，称A/G比值倒臵
（二）血清蛋白电泳
原 理：
在碱性环境中,血清蛋白均带阴电荷，在 电场中向阳极泳动，因各蛋白等电点和分 子量各异，分子量小，阴电荷多者泳动快， 分子量大，阴电荷少者泳动慢，电泳后从 阳极开始，依次为Α、α1-G、α2-G、β-G 及γ-G五个区带，此种检查法称血清蛋白 电泳
抗原组成(三)-- HBeAg
位于HBV的核心,是一种可溶性蛋白抗原 HBeAg和Dane颗粒出现相平行，且与DNA多聚 酶在血中的消长动态相符合 血中HBeAg的出现可作为HBV复制及血清有感染 性的指标 刺激机体产生抗-HBe 抗-HBe能与受染肝细胞表面的e抗原结合,通过补 体介导破坏受染的肝细胞,抗-HBe的出现是预后 良好的征象
正常血清蛋白电泳图
参 考 值
Α
α1-G α2-G β -G γ-G
0.61-0.71
0.03-0.04 0.06-0.10 0.07-0.11 0.09-0.18
(醋酸纤维膜电泳法）
临床意义
肝受损时，Α、α1-G、α2-G、β-G 均降低
自身抗原刺激淋巴系统γ-G升高
1）肝炎
急性（轻症）无变化
传播途径 慢性感染
粪-口 否
粪- 口 否 ssRNA
基因组类型 ssRNA
Hepatitis B Virus
乙型肝炎的病原体
在全世界广泛流行，估计全球半数以上人 口已被HBV感染过，5%的人口为HBV慢性 感染 中国：乙肝高发区，人群HBsAg的检出率 达9.8%
Hepatitis B Virus
各种体液中HBV的浓度
高 中等 低/不能检出
血液 血清 伤口渗出物
精液 阴道分泌物 唾液
尿 粪便 汗液 泪液
乳汁
HBV 传播途径
血源性传播 输血、注射、外科和牙科手术、针刺等 剃刀、牙刷和蚊虫叮咬等 母婴垂直传播 宫内传播 分娩时微小皮损处传播 产后母婴密切接触 性传播
临床意义
3、球蛋白增高 1）感染、免疫反应，如TB、疟疾和血吸虫等
2）多发性骨髓瘤
3）自身免疫性疾病,如SLE、风湿热、类风湿
性关节炎等 球蛋白降低 ： 合成降低,如肾上腺皮质功能亢进,先天性免 疫缺陷
临床意义
4、 A/G比值
A/G比值反映A、G浓度变化的关系 正常值1.5-2.5/1 肝功损害严重时，A下降，G上升，使A/G比值变化
利用抗原和抗体特异性结合 主要的试剂
固相抗原或抗体 酶标记的抗原或抗体 酶的底物
病原学诊断(二)—核酸检测
核酸杂交
探针
PCR
引物
HBsAg – 感染的标志 Anti-HBs – 既往感染/接种疫苗
Anti-HBc IgM – 急性感染标志
Anti-HBc IgG – 既往或慢性感染 HBeAg – 急性病毒复制，有传染性 Anti-HBe –病毒不再复制 HBV-DNA – 急性病毒复制，比 HBeAg 更准 确；主要用于监测治疗反应