干细胞
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第13章 干细胞应用
本节课主要内容
1-干细胞的定义与应用 2-干细胞的分类及特点 3-干细胞分离与体外培养 4-干细胞的诱导分化 5-有关伦理学与技术方面的讨论 6-最新进展
本节课关键问题
干细胞特点与分离培养
一 定义与应用
（一）定义 干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。
2疾病治疗
细胞疗法 通过肝细胞移植对心脏病、帕金森、糖尿病、脊椎损伤 等疾病的治疗有重大价值。 例子1：心脏病 例子2：糖尿病 是一种慢性疾病，它是因先天性或后来体内胰腺分泌胰 岛素缺乏，或因胰岛素功能失调所至。这种功能失调导 致血中葡萄糖浓度增高，从而危及体内诸多系统，特别 对血管系统和神经系统影响最大。 糖尿病有两种主要类型，其中的甲型糖尿病过去称之为 胰岛素依赖性糖尿病，此种病人其胰脏不能正常地生产 十分重要的胰岛素。必须通过注射胰岛素来控制血糖含 量，通常情况下患者一天最少需要注射四次。除了甲型 糖尿病，还有乙型糖尿病。
（二）成体干细胞分离培养
1.定义：成体干细胞是指存在于一种已经分化 组织中的未分化细胞，这种细胞能够自我更新 并且能够特化形成组成该类型组织的细胞。 成年动物的许多组织和器官，比如表皮和造血 系统，具有修复和再生的能力。成体干细胞在 其中起着关键的作用。 成年个体组织中的成体干细胞在正常情况下大 多处于休眠状态，在病理状态或在外因诱导下 可以表现出不同程度的再生和更新能力。
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3.分离自胚胎瘤细胞 胚胎瘤细胞（embryonic carcinoma cell）是 可以形成畸胎瘤的细胞。分离自胚胎瘤细胞的 干细胞称为EC细胞。
干细胞培养方法 1 体外培养方法
从胚胎内细胞团分离培养胚胎干细胞步骤包括内细胞 团获得、原代培养、传代培养、干细胞鉴定几个步骤。 （1）细胞团获得 （2）原代与传代培养 在合适的培养条件下，这些胚胎干细胞进行分裂自 我更新形成细胞团，有的则停止分裂而进行分化：骨 细胞、腺细胞、心肌细胞和神经细胞等。 胚胎干细胞的一个特性就是它能在保留未分化能力 的同时进行无限的分裂和自我更新
（二）特征
1 自我更新特征 自我更新是指干细胞具有分裂和自我复制能力，子代 细胞维持干细胞的原始特征。干细胞的自我更新可通 过对称分裂和不对称分裂两种形式进行。 （1）对称分裂（symmetric division）是指一个干细 胞分裂产生的两个子细胞全是干细胞。 （2）不对称分裂（asymmetric division）是指一个干 细胞分裂成一个干细胞和一个短暂增殖细胞，称之为 祖细胞（progenitor cell），存在于胎儿或成年组织中， 是部分特化的细胞，可以分化成功能细胞。祖细胞分 裂形成的是两个专一功能的子细胞，不具备自我复制 的能力。
干细胞标记物 是位于细胞表面可以有选择性地结合和粘附信号分子 的受体蛋白。 根据不同的干细胞的标记物可以鉴定不同的干细胞， 结合荧光标记、流式细胞仪可以实现干细胞的分离 （图13.4）。 例如：胚胎干细胞为未分化细胞，能表达早期胚胎细 胞的阶段特异性胚胎抗原（Stage-specific embryonic antigen,SSEA）。灵长类ES细胞表达SSEA-3、 SSEA-4及高分子糖蛋白TRA-1-60、TRA-1-81等。原 始生殖细胞源的人类胚胎干细胞还表达SSEA-1、 SSEA-3,SSEA-4表达量有所下降。
3基因治疗
干细胞是基因治疗的较理想的靶细胞，因为它 可以自我复制更新，治疗基因通过它带入人体 中，能够持久地发挥作用。而不必担心想分化 的细胞那样，在细胞更新中可能丢失治疗基因。 通过胚胎干细胞和基因治疗技术，可以矫正缺 陷基因。例如，如果发现早期胚胎有某种基因 缺陷而会患基因缺陷病，可以收集部分或全部 胚胎干细胞，通过基因工程技术将正常的基因 替代干细胞中的缺陷基因，再将修复后的胚胎 干细胞嵌入胚胎中，经过九月怀胎将会出生一 个健康婴儿。
结果： 细胞体外培养呈“巢状”生长，可以持续传代； AKP染色oct4、ssea-1等特异性抗体免疫反应均阳性 （将细胞标记绿色荧光蛋白（GFP），起到示踪作用） 裸鼠皮下注射的细胞发育生长为包含各胚层细胞成分 的畸胎瘤。 结论： 从小鼠ICM所分离的细胞为小鼠胚胎干细胞。
人类：1998年
2007年4月11日：英国《泰晤士报》在头版报 道了用干细胞技术治疗糖尿病取得了重大突破。 临床试验证明，采用干细胞治疗手段的糖尿病 患者体内可以生产胰岛素，他们可以停止体外 注射人胰岛素。患有胰岛素依赖的糖尿病患者 在注射了自体干细胞之后摆脱了对人造胰岛素 的依赖。 糖尿病 http://bbs.tnbzy.com/thread-26157-1-1.html
脐带血库
脐带血移植效果优于骨髓：其干细胞含量更多， 且较有可塑性，即使不是完全吻合，也可以移 植到病患体内，而骨髓移植就需要完全吻合。 2007年医学顶尖杂志《Pediatrics》刊文： 2004年美国一个三岁女孩突患急性淋巴细胞性 白血病。她以出生时保存的自体脐带血造血干 细胞进行了移植救治。这一案例成为儿童白血 病自体脐带血成功移植的全球首例。
胚胎干细胞分化潜能评价
（1）体外分化实验 将获得的胚胎干细胞制成悬浮液 培养在铺有明胶的培养皿中，一段时间后部分细胞贴 壁生长，分化成神经、肌肉、软骨等不同组织细胞； 同时一部分不贴壁的细胞悬浮生长，先生成“简单类 胚体”，进一步培养成囊状胚体。 （2）体内分化实验 将一定量的胚胎干细胞注射进同 源动物皮下，讲过一段时间后，注射皮下有组织瘤生 成。手术取瘤，常规制片后观察，一般是含有三个胚 层的畸胎瘤。 （3）嵌合体形成 将胚胎干细胞通过聚集法或者注射 法与受体胚胎结合，并且将胚胎移植进同期化代孕母 受体，各自表达自己的基因型，最终得到嵌合体动物。
（1）有饲养层培养法： 主要应用小鼠胚胎原代成纤维细胞（PMEF） 和SIM小鼠成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐乌苯 甘亚系STO细胞作为饲养层细胞。（P283） PMEF和SIM都能分泌促进胚胎干细胞增生和抑 制胚胎干细胞自主分化的因子---白血病抑制因 子（LIF）。 白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor,LIF）一种天然细胞因子，因可以抑制白 血病细胞系M1的生长和分化而得名。
干细胞生物学被1999年美国《科学》推举为二 十一世纪最重要的十项科学领域之首。 据美国《生活科学》网站报道，该网站日前评 选出未来将改变人类生活的十大科技，分别为： 克隆、基因疗法和、或干细胞 PBC、 ICBC、 CCB、 ABC? 干细胞银行：印度 http://v.youku.com/v_show/id_XODE4NTkwM TI=.html
自1995年起，全世界有40多个国家设立了各 种性质的脐带血血库达116家，非血缘关系脐 带血干细胞的移植及应用超过10000例，自体 或血缘关系脐带血干细胞的成功移植案例也逐 年上升。 在我国，共有4家（北京、天津、上海、广 东），实现非血缘或学院关系脐带血干细胞移 植成功近400例，尚未有自体脐带血干细胞应 用的成功病例。
2 增值特征 （1）增值的缓慢性 一般情况下，干细胞处 于休眠或缓慢增值状态。缓慢增殖还可以减少 基因发生突变的可能性。 （2）增值的自稳性 也称自我维持，是指干 细胞会自我更新维持自身数目的恒定，主要是 通过不对称分裂来实现。
3 分化特征 （1）单能干细胞（Monopotent stem cell）是只能分 化为单一类型细胞的干细胞。例如表皮的基质细胞 （即表皮干细胞）只能分化产生角化表皮细胞。 （2）多能干细胞（Multipotent stem cell）是能够形 成两种或两种以上类型细胞的干细胞。例如骨髓造血 干细胞就是典型的多能干细胞，可以分化成红细胞、 巨噬细胞、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）、巨核 细胞（发育成血小板）、淋巴细胞（至少6种以上的淋 巴细胞）等多种类型细胞。 （3）全能干细胞（Almighty stem cell）是具有无限 分化潜能的干细胞。例如胚胎干细胞。
（3）胚胎干细胞的鉴定
碱性磷酸酶（Alkaline phosphatases,AKP） 活性 未分化的胚胎干细胞中含有丰富的碱 性磷酸酶，活性很高；而已经分化的胚胎干细 胞中碱性磷酸酶呈现弱阳性或阴性。 端粒酶（Telomerase）活性 端粒酶是增加 染色体末端端粒序列、维持端粒长度的一种核 糖蛋白。端粒酶有助于维持端粒长度，胚胎干 细胞有着高水平的端粒酶活性，并具有长的端 粒（图13.3）。
（2）无饲养层培养法： 是利用各种能分泌抑制分化因子的细胞制备条 件培养基，或者在基础培养基加入重组的LIF 等细胞因子制备成条件培养基。保证胚胎干细 胞增殖的同时维持未分化的二倍体状态。 除LIF外，细胞因子还有： 碱性成纤维生长因子（Basic fibroblast growth factorb,FGF）是一种与肝素结合的多肽类丝 裂原（mitogen），是一重要的细胞增殖与分 化调节剂。有研究发现无血清培养基中添加人 的碱性成纤维生长因子（bFGF）利于保持胚 胎干细胞的未分化状态。
（三）应用 1 组织或细胞修复
干细胞最激动人心的潜在应用是用来修复甚至 替换丧失功能的组织和器官，因为它具有发育 分化为所有类型组织细胞的能力。 任何涉及丧失正常细胞的疾病都可以通过移植 由胚胎干细胞分化而来的特异组织细胞来治疗。 角膜移植 日本报道： http://v.youku.com/v_show/id_XMjE5NTAwM zl=html
（二）成体干细胞
来自成体的具有分裂和分化潜能的细胞。 骨髓、脂肪、肌肉、脐带血、血液中均已发现 具有多向分化潜能的干细胞。 血液中每100万个只有一个干细胞。每1×105 骨髓单个核细胞中有2-5个骨髓干细胞。
三 干细胞分离与培养
(一)胚胎干细胞分离培养 胚胎干细胞来源 1.分离自胚胎内细胞团 从早期胚胎内细胞团（inner cell mass,ICM） 分离是获得胚胎干细胞的主要途径。ES细胞 一般是指该途径分离到的胚胎干细胞。 1981年，埃文斯(Evans)和考夫曼（Kaufman） 建立了未分化的小鼠胚胎干细胞系。 2007年诺贝尔生理学和医学奖。
目前NIH（美国健康研究院National institutes of Health）注册的共26株。 1998年美国：Thomson小组从4个体外受精培 养至囊胚的内细胞团进行体外培养、传代得到 5个人类ES细胞系。 2002年10月我国：我国首株人类胚胎干细胞 系由中山大学附属第二医院建立。
二分类与特点
不同的干细胞具有不同的分化潜能。 从所具有的分化功能上讲，干细胞可分为单能 干细胞、多能干细胞与全能干细胞。 全能干细胞从理论上可以分化成所有组织与器 官。 从来源上讲，干细胞包括成体干细胞和胚胎干 细胞。
（一）胚胎干细胞
胚胎干细胞简称ES（Embryo Stem）细胞， 是一种全能干细胞，它是从着床前胚胎内细胞 团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的 一种全能细胞系，可以分化成任何一种组织类 型的细胞。
2.分离自原始生殖细胞 从原始生殖细胞分离的干细胞称为胚胎生殖 细胞（Embryonic germ cell,EGG）,简称EG 细胞。 通过获取原始生殖细胞移动到的相应组织就 可以获得原始生殖细胞。具体时间根据不同 动物而异，例如：小鼠取12.5天的胎儿生殖 嵴；人取5-9周龄的胎儿背肠系膜或者生殖嵴。
例子：胚胎干细胞分离与细胞系的建立： 小鼠；1981年 1）4.5天的囊胚 2）分离囊胚的内细胞团 3）在条件培养液及小鼠胚胎成纤维细胞做铺 层下细胞扩增传代，定细胞 4）裸鼠皮下注射的细胞发育生长为包含各胚 层细胞成分的畸胎瘤。
具体过程：
1.分离小鼠小鼠囊胚的内细胞团（ICM）细胞 2.在条件培养液及小鼠胚胎成纤维细胞（MEF） 做铺层下，细胞扩增传代 3.碱性磷酸酶（AKP）染色及oct4、ssea-1等 特异性抗体鉴定细胞 4.并将细胞注射至裸鼠皮下观察细胞在动物体 内的生长变化。
本节课主要内容
1-干细胞的定义与应用 2-干细胞的分类及特点 3-干细胞分离与体外培养 4-干细胞的诱导分化 5-有关伦理学与技术方面的讨论 6-最新进展
本节课关键问题
干细胞特点与分离培养
一 定义与应用
（一）定义 干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。
2疾病治疗
细胞疗法 通过肝细胞移植对心脏病、帕金森、糖尿病、脊椎损伤 等疾病的治疗有重大价值。 例子1：心脏病 例子2：糖尿病 是一种慢性疾病，它是因先天性或后来体内胰腺分泌胰 岛素缺乏，或因胰岛素功能失调所至。这种功能失调导 致血中葡萄糖浓度增高，从而危及体内诸多系统，特别 对血管系统和神经系统影响最大。 糖尿病有两种主要类型，其中的甲型糖尿病过去称之为 胰岛素依赖性糖尿病，此种病人其胰脏不能正常地生产 十分重要的胰岛素。必须通过注射胰岛素来控制血糖含 量，通常情况下患者一天最少需要注射四次。除了甲型 糖尿病，还有乙型糖尿病。
（二）成体干细胞分离培养
1.定义：成体干细胞是指存在于一种已经分化 组织中的未分化细胞，这种细胞能够自我更新 并且能够特化形成组成该类型组织的细胞。 成年动物的许多组织和器官，比如表皮和造血 系统，具有修复和再生的能力。成体干细胞在 其中起着关键的作用。 成年个体组织中的成体干细胞在正常情况下大 多处于休眠状态，在病理状态或在外因诱导下 可以表现出不同程度的再生和更新能力。
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3.分离自胚胎瘤细胞 胚胎瘤细胞（embryonic carcinoma cell）是 可以形成畸胎瘤的细胞。分离自胚胎瘤细胞的 干细胞称为EC细胞。
干细胞培养方法 1 体外培养方法
从胚胎内细胞团分离培养胚胎干细胞步骤包括内细胞 团获得、原代培养、传代培养、干细胞鉴定几个步骤。 （1）细胞团获得 （2）原代与传代培养 在合适的培养条件下，这些胚胎干细胞进行分裂自 我更新形成细胞团，有的则停止分裂而进行分化：骨 细胞、腺细胞、心肌细胞和神经细胞等。 胚胎干细胞的一个特性就是它能在保留未分化能力 的同时进行无限的分裂和自我更新
（二）特征
1 自我更新特征 自我更新是指干细胞具有分裂和自我复制能力，子代 细胞维持干细胞的原始特征。干细胞的自我更新可通 过对称分裂和不对称分裂两种形式进行。 （1）对称分裂（symmetric division）是指一个干细 胞分裂产生的两个子细胞全是干细胞。 （2）不对称分裂（asymmetric division）是指一个干 细胞分裂成一个干细胞和一个短暂增殖细胞，称之为 祖细胞（progenitor cell），存在于胎儿或成年组织中， 是部分特化的细胞，可以分化成功能细胞。祖细胞分 裂形成的是两个专一功能的子细胞，不具备自我复制 的能力。
干细胞标记物 是位于细胞表面可以有选择性地结合和粘附信号分子 的受体蛋白。 根据不同的干细胞的标记物可以鉴定不同的干细胞， 结合荧光标记、流式细胞仪可以实现干细胞的分离 （图13.4）。 例如：胚胎干细胞为未分化细胞，能表达早期胚胎细 胞的阶段特异性胚胎抗原（Stage-specific embryonic antigen,SSEA）。灵长类ES细胞表达SSEA-3、 SSEA-4及高分子糖蛋白TRA-1-60、TRA-1-81等。原 始生殖细胞源的人类胚胎干细胞还表达SSEA-1、 SSEA-3,SSEA-4表达量有所下降。
3基因治疗
干细胞是基因治疗的较理想的靶细胞，因为它 可以自我复制更新，治疗基因通过它带入人体 中，能够持久地发挥作用。而不必担心想分化 的细胞那样，在细胞更新中可能丢失治疗基因。 通过胚胎干细胞和基因治疗技术，可以矫正缺 陷基因。例如，如果发现早期胚胎有某种基因 缺陷而会患基因缺陷病，可以收集部分或全部 胚胎干细胞，通过基因工程技术将正常的基因 替代干细胞中的缺陷基因，再将修复后的胚胎 干细胞嵌入胚胎中，经过九月怀胎将会出生一 个健康婴儿。
结果： 细胞体外培养呈“巢状”生长，可以持续传代； AKP染色oct4、ssea-1等特异性抗体免疫反应均阳性 （将细胞标记绿色荧光蛋白（GFP），起到示踪作用） 裸鼠皮下注射的细胞发育生长为包含各胚层细胞成分 的畸胎瘤。 结论： 从小鼠ICM所分离的细胞为小鼠胚胎干细胞。
人类：1998年
2007年4月11日：英国《泰晤士报》在头版报 道了用干细胞技术治疗糖尿病取得了重大突破。 临床试验证明，采用干细胞治疗手段的糖尿病 患者体内可以生产胰岛素，他们可以停止体外 注射人胰岛素。患有胰岛素依赖的糖尿病患者 在注射了自体干细胞之后摆脱了对人造胰岛素 的依赖。 糖尿病 http://bbs.tnbzy.com/thread-26157-1-1.html
脐带血库
脐带血移植效果优于骨髓：其干细胞含量更多， 且较有可塑性，即使不是完全吻合，也可以移 植到病患体内，而骨髓移植就需要完全吻合。 2007年医学顶尖杂志《Pediatrics》刊文： 2004年美国一个三岁女孩突患急性淋巴细胞性 白血病。她以出生时保存的自体脐带血造血干 细胞进行了移植救治。这一案例成为儿童白血 病自体脐带血成功移植的全球首例。
胚胎干细胞分化潜能评价
（1）体外分化实验 将获得的胚胎干细胞制成悬浮液 培养在铺有明胶的培养皿中，一段时间后部分细胞贴 壁生长，分化成神经、肌肉、软骨等不同组织细胞； 同时一部分不贴壁的细胞悬浮生长，先生成“简单类 胚体”，进一步培养成囊状胚体。 （2）体内分化实验 将一定量的胚胎干细胞注射进同 源动物皮下，讲过一段时间后，注射皮下有组织瘤生 成。手术取瘤，常规制片后观察，一般是含有三个胚 层的畸胎瘤。 （3）嵌合体形成 将胚胎干细胞通过聚集法或者注射 法与受体胚胎结合，并且将胚胎移植进同期化代孕母 受体，各自表达自己的基因型，最终得到嵌合体动物。
（1）有饲养层培养法： 主要应用小鼠胚胎原代成纤维细胞（PMEF） 和SIM小鼠成纤维细胞耐硫代鸟嘌呤和耐乌苯 甘亚系STO细胞作为饲养层细胞。（P283） PMEF和SIM都能分泌促进胚胎干细胞增生和抑 制胚胎干细胞自主分化的因子---白血病抑制因 子（LIF）。 白血病抑制因子（Leukemia inhibitory factor,LIF）一种天然细胞因子，因可以抑制白 血病细胞系M1的生长和分化而得名。
干细胞生物学被1999年美国《科学》推举为二 十一世纪最重要的十项科学领域之首。 据美国《生活科学》网站报道，该网站日前评 选出未来将改变人类生活的十大科技，分别为： 克隆、基因疗法和、或干细胞 PBC、 ICBC、 CCB、 ABC? 干细胞银行：印度 http://v.youku.com/v_show/id_XODE4NTkwM TI=.html
自1995年起，全世界有40多个国家设立了各 种性质的脐带血血库达116家，非血缘关系脐 带血干细胞的移植及应用超过10000例，自体 或血缘关系脐带血干细胞的成功移植案例也逐 年上升。 在我国，共有4家（北京、天津、上海、广 东），实现非血缘或学院关系脐带血干细胞移 植成功近400例，尚未有自体脐带血干细胞应 用的成功病例。
2 增值特征 （1）增值的缓慢性 一般情况下，干细胞处 于休眠或缓慢增值状态。缓慢增殖还可以减少 基因发生突变的可能性。 （2）增值的自稳性 也称自我维持，是指干 细胞会自我更新维持自身数目的恒定，主要是 通过不对称分裂来实现。
3 分化特征 （1）单能干细胞（Monopotent stem cell）是只能分 化为单一类型细胞的干细胞。例如表皮的基质细胞 （即表皮干细胞）只能分化产生角化表皮细胞。 （2）多能干细胞（Multipotent stem cell）是能够形 成两种或两种以上类型细胞的干细胞。例如骨髓造血 干细胞就是典型的多能干细胞，可以分化成红细胞、 巨噬细胞、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）、巨核 细胞（发育成血小板）、淋巴细胞（至少6种以上的淋 巴细胞）等多种类型细胞。 （3）全能干细胞（Almighty stem cell）是具有无限 分化潜能的干细胞。例如胚胎干细胞。
（3）胚胎干细胞的鉴定
碱性磷酸酶（Alkaline phosphatases,AKP） 活性 未分化的胚胎干细胞中含有丰富的碱 性磷酸酶，活性很高；而已经分化的胚胎干细 胞中碱性磷酸酶呈现弱阳性或阴性。 端粒酶（Telomerase）活性 端粒酶是增加 染色体末端端粒序列、维持端粒长度的一种核 糖蛋白。端粒酶有助于维持端粒长度，胚胎干 细胞有着高水平的端粒酶活性，并具有长的端 粒（图13.3）。
（2）无饲养层培养法： 是利用各种能分泌抑制分化因子的细胞制备条 件培养基，或者在基础培养基加入重组的LIF 等细胞因子制备成条件培养基。保证胚胎干细 胞增殖的同时维持未分化的二倍体状态。 除LIF外，细胞因子还有： 碱性成纤维生长因子（Basic fibroblast growth factorb,FGF）是一种与肝素结合的多肽类丝 裂原（mitogen），是一重要的细胞增殖与分 化调节剂。有研究发现无血清培养基中添加人 的碱性成纤维生长因子（bFGF）利于保持胚 胎干细胞的未分化状态。
（三）应用 1 组织或细胞修复
干细胞最激动人心的潜在应用是用来修复甚至 替换丧失功能的组织和器官，因为它具有发育 分化为所有类型组织细胞的能力。 任何涉及丧失正常细胞的疾病都可以通过移植 由胚胎干细胞分化而来的特异组织细胞来治疗。 角膜移植 日本报道： http://v.youku.com/v_show/id_XMjE5NTAwM zl=html
（二）成体干细胞
来自成体的具有分裂和分化潜能的细胞。 骨髓、脂肪、肌肉、脐带血、血液中均已发现 具有多向分化潜能的干细胞。 血液中每100万个只有一个干细胞。每1×105 骨髓单个核细胞中有2-5个骨髓干细胞。
三 干细胞分离与培养
(一)胚胎干细胞分离培养 胚胎干细胞来源 1.分离自胚胎内细胞团 从早期胚胎内细胞团（inner cell mass,ICM） 分离是获得胚胎干细胞的主要途径。ES细胞 一般是指该途径分离到的胚胎干细胞。 1981年，埃文斯(Evans)和考夫曼（Kaufman） 建立了未分化的小鼠胚胎干细胞系。 2007年诺贝尔生理学和医学奖。
目前NIH（美国健康研究院National institutes of Health）注册的共26株。 1998年美国：Thomson小组从4个体外受精培 养至囊胚的内细胞团进行体外培养、传代得到 5个人类ES细胞系。 2002年10月我国：我国首株人类胚胎干细胞 系由中山大学附属第二医院建立。
二分类与特点
不同的干细胞具有不同的分化潜能。 从所具有的分化功能上讲，干细胞可分为单能 干细胞、多能干细胞与全能干细胞。 全能干细胞从理论上可以分化成所有组织与器 官。 从来源上讲，干细胞包括成体干细胞和胚胎干 细胞。
（一）胚胎干细胞
胚胎干细胞简称ES（Embryo Stem）细胞， 是一种全能干细胞，它是从着床前胚胎内细胞 团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的 一种全能细胞系，可以分化成任何一种组织类 型的细胞。
2.分离自原始生殖细胞 从原始生殖细胞分离的干细胞称为胚胎生殖 细胞（Embryonic germ cell,EGG）,简称EG 细胞。 通过获取原始生殖细胞移动到的相应组织就 可以获得原始生殖细胞。具体时间根据不同 动物而异，例如：小鼠取12.5天的胎儿生殖 嵴；人取5-9周龄的胎儿背肠系膜或者生殖嵴。
例子：胚胎干细胞分离与细胞系的建立： 小鼠；1981年 1）4.5天的囊胚 2）分离囊胚的内细胞团 3）在条件培养液及小鼠胚胎成纤维细胞做铺 层下细胞扩增传代，定细胞 4）裸鼠皮下注射的细胞发育生长为包含各胚 层细胞成分的畸胎瘤。
具体过程：
1.分离小鼠小鼠囊胚的内细胞团（ICM）细胞 2.在条件培养液及小鼠胚胎成纤维细胞（MEF） 做铺层下，细胞扩增传代 3.碱性磷酸酶（AKP）染色及oct4、ssea-1等 特异性抗体鉴定细胞 4.并将细胞注射至裸鼠皮下观察细胞在动物体 内的生长变化。