过氧化尿素消毒液的杀菌性能及毒性实验研究

过氧化尿素消毒液的杀菌性能及毒性实验研究

张志成　张晓玲

【摘要】　目的　研究过氧化尿素的杀菌性能及其毒性。方法　依据卫生部消毒技术规范进行实验。结果　过氧化尿素为过氧化氢类消毒剂,当过氧化氢含量为30g/L时,作用20min,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的杀灭对数值>5.0;含量为40g/L时,作用80min,对枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭对数值>5.0。常温下存储比较稳定。过氧化尿素消毒液对小白鼠急性经口毒性试验,LD50为5840mg/ kg・bw,属实际无毒级。对大白兔皮肤无刺激性。在292～2920mg/kg・bw剂量范围内对小鼠骨髓嗜多染红细胞未发现微核作用。结论　过氧化尿素具有良好的消毒效果,能有效杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草杆菌黑色变种芽胞,动物实验结果属实际无毒级。对皮肤无刺激性。

【关键词】　过氧化尿素　金黄色葡萄球菌　大肠杆菌　枯草杆菌黑色变种芽胞

过氧化尿素,又称过氧化碳酰胺、过碳酰胺[1],化学式为CO(N H2)2・H2O2是过氧化氢与碳酰胺的加合物,兼具尿素及过氧化氢的性质,其水溶液中有效消毒成份为过氧化氢, p H2.7,过氧化氢含量228.2g/L,并缓慢释放出活性氧。本研究旨在对过氧化尿素的消毒效果及其毒性进行试验研究,为过氧化尿素在消毒领域的应用提供基础实验数据。

1　实验方法

1.1　菌悬液制备　取大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌

(A TCC6538)24h新鲜培养物和枯草杆菌黑色变种(A TCC9 732)芽孢悬液,用含3%牛血清白蛋白胰蛋白胨生理盐水配制试验浓度的菌悬液备用。

作者单位:陕西省疾病预防控制中心(西安)

邮 编　710054 收稿日期　2006-09-301.2　中和剂鉴定试验　以金黄色葡萄球菌和枯草杆菌黑色变种芽孢为代表,设计6组试验[2],按悬液定量法进行试验。试验重复3次。

1.3　悬液定量杀菌试验　首先将过氧化尿素(阳性对照为PBS)置于20℃水浴恒温。取0.5ml菌悬液加入0.5ml有机干扰物混匀,加入4ml消毒液,作用至预定时间,取0.5ml加入到4.5ml中和剂试管内,中和作用10min。振打试管80次,取样接种作活菌计数。连同阳性对照一并置于37℃培养48h,计数活菌数并计算杀灭对数值。试验重复3次。

1.4　稳定性试验　将过氧化尿素原液装入塑料瓶内,密封避光保存于25℃,3个月,于保存前后分别测定过氧化氢含量,比较储存前后的变化。

1.5　毒性试验

1.5.1　急性经口毒性试验　取体重18～22g昆明种20只

大脑发育;维生素、矿物质、各种酶含量充足,能满足婴儿生长的需要,因此母乳是婴儿得天独厚的食品[2-3]。本文纯母乳喂养婴儿的生长发育、体重增长率要远超过较低比例母乳喂养儿,到4个月时体重增长率达112.8%,而低比例(<20%)母乳喂养儿体重增长率为各组中最低,仅94.2%,提示母乳喂养比例越低,生长发育就越差。母乳中含体液免疫成分有1gA、IgM、Ig G、sIgA含量也较高,在呼吸道和消化道发挥免疫防御作用,母乳中含大量免疫活性细胞,包括吞噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞,在抗感染方面有重要意义;乳铁蛋白阻碍细菌代谢和繁殖、双岐因子能促进肠道双岐杆菌生长、低聚糖促进肠道乳酸杆菌生长、并可封闭粘膜细胞上的细菌受体,在预防肠道感染中起重要作用;人乳中的C3、C4、抗葡萄球菌因子、抗病毒因子、乳过氧化氢酸等均起一定抗感染作用,溶菌酶能直接杀伤细菌[2-3]。意大利Pisacane氏经256例对照研究分析后于1992年报告母乳喂养能有效预防6个月以内婴儿的泌尿系感染[4]。本文不同比例母乳喂养婴儿以纯母乳喂养组发病率最低,其余各组发病率均因母乳喂养比例减少而依次递增,均有高度显著性差异,表明母乳喂养具有显著的预防感染作用。国内有人从心理学角度研究后认为母乳不仅提供小儿丰富的营养,而且促进母子间的亲善关系,有利于儿童身心健康[5]。国外在母乳对新生儿代谢方面进行了深入的研究,发现经母乳喂养的新生儿肝糖原贮存量逐渐增多,初乳中的酶明显影响碳水化合物代谢,人乳喂养儿血清总胆固醇和低密度脂蛋白高,并发现喂鲜母乳者粪便中脂肪、碳水化合物排出较喂库存浓缩母乳的婴儿为高,因而建议对未成熟儿采用浓缩母乳喂养有利于婴儿对蛋白质和能量的需要,还有人发现母乳喂养儿蛋白质代谢更新周期快,并认为母乳喂养新生儿只要保证热卡供应,不会出现负氮平衡[5]。母乳的以上这些独特作用是人类自身进化的结果,是任何其他乳类、代乳品所无法替代的,因此应该提倡、推广、支持、促进和保护母乳喂养,为实现《2001～2010年福建省儿童发展纲要》4个月婴儿母乳喂养率达85%以上而努力。

参　考　文　献

[1]　世界卫生组织联合国儿童基金会合编,中华人民共和国卫生部

妇幼卫生司译.母乳喂养培训教材[M].北京医科大学中国协和医科大学联合出版社

[2]　冯国银,董玉瑛,卢晶清,等.妇幼保健学[M].济南;山东科学技

术出版社,1990:294-296

[3]　金汉珍,黄德珉,官希吉.实用新生儿学[M].第3版.北京人民

卫生出版社,2003:75-86

[4]　Pisacane A,et al.Breast-feeding and urinary tract infection

[J].J Podiatrics,1992:20(1):87

[5]　金星期,吴虹,许积德.母乳喂养和人工喂养儿气质比较的初步

探讨[J].实用儿科临床杂志,1994,9(3):160

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齐齐哈尔医学院学报2006年第27卷第15期

小白鼠,雌雄各半,随即分成5组。染毒前,禁食过夜,不限制饮水。设250、625、1250、1875和3750mg/kg・bw5个剂量组。采用一次性经口灌胃给药,按0.1ml/10g体重给予染毒量。染毒后,观察小白鼠的中毒表现和死亡情况,按概率单位-对数图解法求出半数致死量(LD50)。

1.5.2　一次性完整皮肤刺激试验　取体重

2.5～2.7kg健康成年皮肤完好的新西兰白兔3只,试验前24h,剪去背部脊柱两侧的毛,不得损伤皮肤。去毛范围,左、右各约3cm×3 cm。24h后将0.5ml过氧化尿素消毒液直接滴于面积为2.5 cm×2.5cm的一侧去毛完整皮肤上,然后用一层无刺激塑料膜覆盖,再用无刺激胶布固定。另一侧去毛皮肤作为空白对照。敷贴时间为4h。试验结束后,用温水除去残留受试物。分别于去除受试物后1h、24h和48h观察皮肤局部反应,进行刺激反应评分。

1.5.3　小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验　选用体重为25～30g的小鼠50只,随机分5组,每组10只,雌雄各半,受试物设3个剂量组,每个剂量组用10只动物,雌雄各半。另设阴性(蒸馏水)和阳性对照组(环磷酰胺40mg/kg・bw)。剂量组取受试物的1/2LD50、1/5LD50、1/20LD50剂量,按0.2ml/ 10g・bw的灌胃量,经口灌胃30h染毒法,即两次染毒间隔24h,第二次染毒后6h用颈椎脱臼法处死动物,取股骨骨髓制片。镜检计数1000个嗜多染红细胞(PCE)中的微核PCE 数,统计结果,卡方检验。并计数200个PCE,同时记数所见到的成熟红细胞(NCE)。以PCE/NCE比值判断有无对骨髓抑制作用。

2　结果

2.1　中和剂鉴定试验结果　鉴定试验结果证明,用1.0%吐温80+1.0%卵磷脂+1.0%硫代硫酸钠的PBS液能有效中和过氧化尿素原液对金黄色葡萄球菌的作用,中和剂对培养基和细菌无不良影响。用2.0%吐温80+2.0%卵磷脂+ 2.0%硫代硫酸钠的PBS能有效中和过氧化尿素原液对枯草杆菌黑色变种芽孢的作用,中和剂对培养基和细菌芽胞无不良影响。2.2　杀菌效果　试验结果表明,过氧化尿素中过氧化氢含量为20g/L作用20min,对大肠杆菌平均杀灭对数值均> 5.00。含量为30g/L作用20min,对金黄色葡萄球菌平均杀灭对数值均>5.00。40g/L时对悬液内枯草杆菌黑色变种芽孢作用80min,杀灭对数值>5.00(表1)。

表1　过氧化尿素对细菌繁殖体及细菌芽胞的杀灭效果

菌种名称

浓度

(g/L)

作用时间

(min)

平均杀灭对数值

大肠杆菌 2010 4.77(4.53～5.04)

20>5.00

30>5.00

金黄色葡萄球菌 3010 3.61(2.93～4.41)

20 5.70(5.47～6.14)

30>5.00

枯草杆菌黑色变种芽孢4040 2.90(2.32～3.64)

80 5.84(5.45～6.61)

120>5.00

注:对照组平均菌落数对数值,大肠杆菌为7.53(7.08～7.81),金黄色葡萄球菌为7.52(7.35～7.67),枯草杆菌黑色变种芽孢为7.61(7.35～7.88)。

2.3　稳定性试验结果　测定结果表明,将过氧化尿素原液装入塑料瓶内,密封避光保存于25℃,3个月,测得保存前过氧化氢含量为228.2g/L,储存后为224.5g/L,储存3个月后有效成份下降率为1.62%。

2.4　毒性试验　急性经口毒性试验结果表明,过氧化尿素消毒液对小白鼠急性经口毒性试验,LD50为5840mg/kg・bw,属实际无毒级。一次性完整皮肤刺激试验结果表明,过氧化尿素消毒液对白兔皮肤无刺激性。

小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果,各组雌雄鼠骨髓PCE/NCE比值均大于0.1,对骨髓无明显抑制作用(见表2)。经χ2分析,各剂量组微核率与溶剂对照组间差异均无显著性(P<0.01),结果表明过氧化尿素消毒液在292～2920mg/kg ・bw剂量范围内对小鼠骨髓嗜多染红细胞未发现微核作用。

表2　过氧化尿素消毒液对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果

组别剂量(mg/kg・bw)动物数(只)含微核PCE数微核率(x±s)PCE/NCE(x±s)雌性　高剂量　292057 1.40±0.49 1.28±0.24 中剂量　116857 1.40±1.02 1.33±0.24 低剂量　29256 1.20±0.75 1.29±0.23 溶液对照055 1.00±0.89 1.21±0.10 阳性对照405104 2.80±3.310.92±0.16雄性　高剂量　292056 1.20±0.75 1.22±0.14 中剂量　116857 1.40±1.02 1.32±0.19 低剂量　29255 1.00±0.63 1.24±0.15 溶液对照057 1.40±0.80 1.26±0.18 阳性对照40512424.80±2.48 1.02±0.19 注:实验中各组受检嗜多染红细胞数(PCE)均为5000;NCE表示成熟红细胞。溶液对照:蒸馏水;阳性对照:环磷酰胺。

3　讨论

过氧化尿素为过氧化氢类消毒剂,本研究结果表明,过氧化尿素具有良好的消毒效果,有效成份过氧化氢含量为30g/ L时,能有效杀灭细菌繁殖体。含量为40g/L时,能有效杀灭细菌芽胞。过氧化尿素消毒液对小白鼠急性经口毒性试验,LD50为5840mg/kg・bw,属实际无毒级。对白兔皮肤无刺激性。在292～2920mg/kg・bw剂量范围内对小鼠骨髓嗜多染红细胞未发现微核作用。使用安全,无毒性。在常温避光条件下存储性能稳定。

参　考　文　献

[1]　王鸿显,任保增,刘英,等.湿法生产过碳酰胺原料配比的理论分

析和实验研究[J].化学通报,2002,65(1):97-101

[2]　卫生部卫生法制与监督司.消毒技术规范[M].北京:中华人民

共和国卫生部,2002:15-150

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・Journal of Qiqihar Medical College,2006,Vol.27,No.15