地塞米松磷酸钠注射液中杂质研究

地塞米松磷酸钠注射液中杂质I研究

曹筱琛1，贾飞2，陶巧凤12*（1.浙江工业大学药学院，杭州 310014；2.浙江省食品药品检验研究院，杭州 310004）

摘要：目的对地塞米松磷酸钠注射液中的杂质I进行研究。方法 通过考察辅料与地塞米松磷酸钠相互作用，研究杂质I的产生机理；采用HPLC-QTOF-MS联用技术鉴定杂质I；制备和纯化获得杂质I，并对其结构进行确证。结果杂质I为主成分与抗氧剂亚硫酸氢钠在高温下的加成产物。结论本研究结果对地塞米松磷酸钠注射液的工艺改进以及质量控制具有指导作用。

关键词地塞米松磷酸钠注射液；有关物质；杂质I；高效液相色谱-质谱联用；制备色谱；核磁共振；质量控制

Characterization of Impurity I in

Dexamethasone Sodium Phosphate

Injection

CAO Xiaochen1, JIA Fei2, TAO Qiaofeng1 2* (1.College of Pharmaceutical Science, ZheJiang University of Technology, Hangzhou 310014,China; ZheJiang Institute for Food and Drug Control, HangZhou 310004, China)

ABSTRACT OBJECTIVES To study on the impurity I in dexamethasone sodium phosphate injection. METHODS The interaction between drug and excipient was investigated to identify the cause of raising impurity I,and HPLC-QTOF-MS was adopted to identificate the

structure of impurity I,the impury I was synthesized and separated by prep-HPLC, and its structure was proved.RESULTS The impurity I is the adduct of dexamethasone sodium phosphate and antioxidant sodium bisulfite.CONCLUSION The study offers guidances for improving the manufacturing process and the quality control of dexamethasone sodium phosphate injection.

K EY WORDS dexamethasone sodium phosphate injection;related substance;impurity I;HPLC-MS;prep-HPLC;NMR;quality control 地塞米松磷酸钠(16a-甲基-11β,17a,21-三羟基-9a-氟孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮-21-磷酸酯二钠盐）为肾上腺皮质激素类药物，具有抗炎、抗内毒素、抑制免疫、抗休克及增强应激反应等药理作用，临床用于自身免疫性疾病、过敏、炎症、哮喘及皮肤科等多种疾病治疗[1]。地塞米松磷酸钠注射液为地塞米松磷酸钠的灭菌水溶液，国内外药典均有收载，中国药典2010年版二部[2]增订了原料药和注射液有关物质检查，采用 HPLC 法对注射液中地塞米松、杂质I和其他杂质进行控制，但未明确杂质I的结构信息。国内此品种有几十家生产企业，市售产品有关物质差异很大，杂质I最大量超出限度数倍，目前尚未见关于地塞米松磷酸钠注射液中杂质I研究的报道, 本文研究地塞米松磷酸钠注射液中杂质I的存在情况、产生机理、制备并确证其结

作者简介：曹筱琛，女，在读硕士研究生研究方向：药品质量分析与控制通讯作者：陶巧凤，女，主任药师, 研究方向：

药物分析Tel: (0571)86459402, E-mail:************.cn

构，为地塞米松磷酸钠注射液的质量控制和标准修订提高、工艺改进提供依据。

1 仪器和试药

岛津LC20-AT高效液相色谱仪，Agilent 1290高效液相色谱仪，Agilent 6538Q-TOF质谱仪，岛津LC-20AP制备液相色谱仪，Varian Mercury核磁共振波谱仪，Sartorius MC5电子天平，旋转蒸发仪(型号：R-215，瑞士BUCHI公司)，紫外可见分光光度计(UV2550型，日本岛津公司)。

甲醇(色谱纯，Merck 公司) ,乙酸铵(色谱纯，SIGMA-ALDRICH 公司)，乙酸(色谱纯，SIGMA-ALDRICH公司)，氢氧化钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)，Milli-Q纯化水(Millipore, Bedford, USA)，地塞米松磷酸钠对照品（中国药品生物制品检定所, 批号：100016 -200914），地塞米松对照品（中国药品生物制品检定所,批号：0129-9702），地塞米松磷酸钠原料药（浙江仙琚制药股份有限公司提供），地塞米松磷酸钠注射液（市售）。

2 实验条件

2.1 液相色谱

液相色谱柱: Agilent -C18(4.6 mm×150 mm,5μm)；柱温:40℃；检测波长:254nm；流速: 1.0 mL·min-1;进样量: 20μL。流动相A为甲醇-水-乙酸盐缓冲液（35:35:30），流动相B为甲醇-乙酸盐缓冲液（70:30）（乙酸盐缓冲液：乙酸铵0.77g，加水1000mL，溶解后用乙酸调节pH至4.0）

梯度洗脱：

10%B(0min-3.5min),10%-40%B(3.5min-23.5min),40%-95%B(23.5min-34.5min),95%B(34.5min-59.5min),95%-10%B(34.5min-59.5min)]。

2.2质谱

离子源为ESI，质量分析器为四极杆飞行时间, 正离子检测模式, 离子扫描范围 m/z 100～1000，离子源前进样分流比为3:1。离子源参数:毛细管电压 3.5kV，喷雾电45psig，脱溶剂气(N2)流量为10 mL·min-1，干燥气温度 350 ℃，碎裂电压120 V，碰撞能量 15 eV。

3 液相色谱法考察有关物质

3.1 色谱条件选择

本文参照美国药典[3]地塞米松磷酸钠<色谱纯度>项下液相色谱条件进行HPLC和HPLC-MS分析，将流动相中乙酸盐缓冲液浓度从100mmol/L降低至10mmol/L以减小乙酸铵的抑制效应，调整后的液相色谱条件见2.1，新液相色谱条件能有效检测杂质I和地塞米松等有关物质，杂质I的相对保留时间约为0.25，与中国药典方法一致。在酸、碱、光、热和氧化等强制降解试验中，主峰和杂质峰分离良好，表明该色谱条件能满足有关物质测定要求。

3.2 有关物质测定

取地塞米松磷酸钠原料药及注射液适量，加流动相制成每1mL 中约含地塞米松磷酸钠0.5mg的溶液，以“ 2.1”项下色谱方法对地塞米松磷酸钠原料药和注射液进行有关物质考察。杂质I在原料药中未发现(图1(A))。市售注射液中主峰前出现一明显杂质峰，其相对