白血病淋巴瘤免疫分型 (2)
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43
Burkitt 淋巴瘤和滤泡淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
44
评估慢性淋巴增殖性疾病(CLD)的抗体
First: CD5、CD19、kappa、lamda
CD3、CD20、CD23、CD10、CD45
B-cell：CD22、FMC7、CD11c、CD103、CD138 CD38、CD25、CD79b (约12-15Ab)
CD13/CD33；
结合临床情况，符合原始巨核细胞 的免疫表型。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
31
急性巨核细胞白血病
2019年3月20日星期三6时4分52秒
32
初治急淋分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD7+ and/or CD2+
T-Lineage
2019年3月20日星期三6时4分52秒
9
FACS在血液病诊断中的应用
FACS在白血病MRD检测中的应用
2019年3月20日星期三6时4分52秒
10
2019年3月20日星期三6时4分52秒
11
2019年3月20日星期三6时4分52秒
12
2019年3月20日星期三6时4分52秒
13
2019年3月20日星期三6时4分52秒
血病。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
28
急性单核细胞白血病
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中，可 以看出 R1 为成熟淋巴细胞， R3 为粒系， R4 为红系（ CD36+ 、 GLyA+ ） R5 为原始细胞 区域比例较低。而 R2 所占比例较大，通过 分析得出： 1、 CD45表达较强， SSC较大，为单核系的 特点。 2、 R2表达HLA-DR、CD4和CD14（部分表 达）、CD36、CD38、CD13/CD33； 3、不表达CD8，GLyA。 结合临床情况，符合急性单核细胞白血 病。 2019年3月20日星期三6时4分52秒
多参数流式细胞仪 在白血病/淋巴瘤免疫分型的应用
流式细胞术
流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)
利用 流式细胞仪 对处在快速直线流动状态中的单细胞或 者生物微粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体 加以分选的现代细胞分析技术。
流式细胞仪（Flow Cytometer)
2019年3月20日星期三6时4分52秒
23
急性髓系白血病成熟型
2019年3月20日星期三6时4分52秒
24
急性早幼粒白血病
从左图 CD45和SSC二维散点图中，可以 看出有两群细胞，R1和R2，通过分析原始细
胞R2可以得出：
1、不表达HLA-DR、CD34、CD14、CD36、 GLyA。
2、表达CD13/CD33、MPO、；
2019年3月20日星期三6时4分52秒
34
B原淋巴细胞白血病/淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
35
B原淋巴细胞白血病/淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
36
T原始淋巴细胞白血病/淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
37
T原始淋巴细胞白血病/淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
Early Thymocyte CD2-/+ CD5-/+ Common Thymocyte CD2+ CD5+ Dual CD4+/CD8+ sCD3Mature Thymocyte CD2+ CD5+ CD4+ or CD8+ sCD3+ Early BPrecursor TdT+ CD10clgsig-
2019年3月20日星期三6时4分52秒 15
2019年3月20日星期三6时4分52秒
16
2019年3月20日星期三6时4分52秒
17
2019年3月20日星期三6时4 分52秒
18
初治急白分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD13+ and/orCD117+ and/orCD33+
分析原始细胞R2（92.1）可以得出：
1、不表达CD61、CD36、GLyA。 2 、表达 HLA-DR 、 CD34 和 CD14 （部
分表达）、CD38、CD13/CD33；
3 、弱表达 CD4 ， CD33 表达比 CD13 高。 结合临床情况，符合急性粒单白
血病。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
27
急性白血病
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中， 可以看出有三群细胞， R1~R3 ，通过
分析原始细胞R2（92.1）可以得出：
1、不表达CD61、CD36、GLyA。 2 、表达 HLA-DR 、 CD34 和 CD14 （部
分表达）、CD38、CD13/CD33；
3 、弱表达 CD4 ， CD33 表达比 CD13 高。 结合临床情况，符合急性粒单白
CD7+ and/orCD2+
CD19+
Myeloid Lineage
T-Lineage
B-Lineage
Myeloid, no or minimal maturation
CD34+/CD117+/HLADR+ CD56+ CD15-/+ CD11b-, CD14-
Promyeloid
CD15+/CD117+/CD34-5Βιβλιοθήκη BeforeAfter
*
*
为什么进行设门？
设门（gating）是流式细胞仪分析中 的一种重要技术，只有通过最佳的设门方 式，才能准确地获取和分析。 “设门” 是指在细胞分布图中，根据该 图的细胞群分布选定其中想要分析的特定 细胞群。通过“设门”得到不同的 区域 （Region）。从而对其中的细胞进行单 参数或多参数分析。
集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算
机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一 种新型高科技仪器。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
2
2019年3月20日星期三6时4分52秒
3
FACS的工作原理
2019年3月20日星期三6时4分52秒
4
荧光补偿
2019年3月20日星期三6时4分52秒
Plasma Cell Leukemia/ Myeloma
CD38+ CD2-, CD19-
CD16+ and/or CD56+ CD2+, CD3-
NK LGL
CD19+ Clonal Ig B-Cell Lineage CD5+ CD10+
CD2+ CD3+
T-Cell Lineage
CD5-
B-CLL or Mantle Cell Lymphoma
2019年3月20日星期三6时4分52秒 7
2019年3月20日星期三6时4分52秒
8
正常BM各系细胞比率： 淋巴：20-30%：T：70%，B：20%，NK：10%； 单核：2-6%±；粒细胞：40-60%；有核红：<50%
FCM的主要测定指标：FSC，SSC，FL1，FL2，FL3（FL4） FSC：反应细胞的大小。SSC：反应细胞内颗粒的多少。 FCM设门法： FSC/SSC： 缺点： 不能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开 CD45/SSC：CD45是WBC抗原，RBC、Plt为阴性。 CD45在成熟细胞表达强，幼稚细胞表达弱， 在淋巴、单核及粒细胞表达强度不同。 优点：能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开。特异分析 白血病细胞免疫表型
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/-
HLADRCD11b-, CD14-
HLADR+ CD15+
CD11b+
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61
2019年3月20日星期三6时4分52秒
19
急性未分化白血病（AUL）
CD19+
B-Lineage
Common
Pre-B CD10+ cig+ TdT+ sig-
B
TdT+ CD10+ clgsig-
sCD3CD4CD8-
sig+ CD10+/clg+/TdT-
2019年3月20日星期三6时4分52秒
33
B/髓系MPAL和T/髓系MPAL
异常细胞的 SSC 较小， CD45 弱表达， 似有原淋的特点。此类细胞的免疫 标志： 1 、 表 达 cCD22 、 mCD22 、 CD19 、 CD13、CD33（部分表达）或者表达 cCD3、CD5、CD7、CD20、等。 2、弱表达CD15、MPO。 3 、 不 表 达 CD10 、 CD11c 、 CD14 、 CD42a、CD64等。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
20
急性髓系白血病微分化型
从左图CD45和SSC二维散点图中，可以看出 有两群细胞，R1和R2，R2的CD45表达比淋巴弱，
SSC也小。与单核细胞接近。通过分析可以得出：
1 、不表达 CD5 、 CD7 、 CD10 、 CD19 、 CD14 、 CD36、GLyA。
29
急性单核细胞白血病
2019年3月20日星期三6时4分52秒
30
急性巨核细胞白血病
从左图 CD45 和 SSC二维散点图中， R4 群 的 异 常 细 胞 有 较 大 的 SSC ， 并 且 CD45低。通过分析此类细胞得出： 1 、不表达 CD3 、 CD5 、 CD7 、 CD10 、
CD14 、 CD19 、 CD38 、 CD79a 、 HLADR、MPO、CD15和CD64。 2 、 R2 表 达 CD42a 和 CD61 、 CD34 、
21
急性髓系白血病未分化型
2019年3月20日星期三6时4分52秒
22
急性髓系白血病成熟型
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中，可以看 出有四群细胞，R1~R5，原始细胞R2的CD45表 达比淋巴 R1 弱， SSC 比淋巴细胞大。幼稚或成 熟粒增加。通过分析原始细胞R2可以得出： 1、不表达CD5、CD8、CD61、CD36、GLyA。 2 、表达 HLA-DR 、 CD13/CD33 、 CD34 、 CD38 、 CD7； 3、弱表达CD4； 结合以上情况，符合急性髓系白血病成熟 型。
3 、 增 加 二 线抗 体 ， 可见 CD11a 、 CD11b 、 CD18、CD64表达；而粒系标志CD15和CD65
弱表达或不表达。
结合以上情况，符合急性早幼粒白血病。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
25
急性早幼粒白血病
2019年3月20日星期三6时4分52秒
26
急性粒单白血病
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中， 可以看出有三群细胞， R1~R3 ，通过
2、表达HLA-DR、CD13/CD33、CD34、CD33；
3、弱表达CD38； 由 于 CD33 阳 性 强 度 大 于 CD13 ， CD34 、 HLA-DR、CD38阳性强度低，而髓过氧化物酶阳 性，结合以上情况，提示这部分细胞属于分化较 差的髓系细胞。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
急性未分化型白血病的主要特点： 原始细胞没有髓系分化的形态学特征， 基本不表达任何已知系列的膜标志物。 缺乏 T 或髓系的特异标志，如 cCD3 和 MPO 等；也不表达 B 系特异标志，如 cCD22、CD79a或是CD19等。同时也不 表达巨核细胞、浆细胞和DC的特异标 志 。 只 表 达 HLA-DR 、 CD34 或 CD38 ， TDT也是可阳性的。
CD10-
Follicular Cell Or Burkitt’s Lymphoma
SLVL or Marginal Zone Lymphoma or Hairy Cell Leukemia
2019年3月20日星期三6时4分52秒
MCL：t(11;14)；NCCN要求对所有CLL患者检测t(11;14)或CCND1表达
14
理想的AL免疫分型方案应满足以下几点要求：
①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别； ②鉴别白血病细胞的系列来源； ③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型； ④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型（LAIP）； ⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测； ⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。
38
CLL/SLL和LPL
2019年3月20日星期三6时4分52秒
39
浆细胞淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
40
2019年3月20日星期三6时4分52秒
41
2019年3月20日星期三6时4分52秒
42
慢淋和B淋巴瘤分类
CLL and Non-Hodgkins Lymphoma
Burkitt 淋巴瘤和滤泡淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
44
评估慢性淋巴增殖性疾病(CLD)的抗体
First: CD5、CD19、kappa、lamda
CD3、CD20、CD23、CD10、CD45
B-cell：CD22、FMC7、CD11c、CD103、CD138 CD38、CD25、CD79b (约12-15Ab)
CD13/CD33；
结合临床情况，符合原始巨核细胞 的免疫表型。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
31
急性巨核细胞白血病
2019年3月20日星期三6时4分52秒
32
初治急淋分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD7+ and/or CD2+
T-Lineage
2019年3月20日星期三6时4分52秒
9
FACS在血液病诊断中的应用
FACS在白血病MRD检测中的应用
2019年3月20日星期三6时4分52秒
10
2019年3月20日星期三6时4分52秒
11
2019年3月20日星期三6时4分52秒
12
2019年3月20日星期三6时4分52秒
13
2019年3月20日星期三6时4分52秒
血病。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
28
急性单核细胞白血病
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中，可 以看出 R1 为成熟淋巴细胞， R3 为粒系， R4 为红系（ CD36+ 、 GLyA+ ） R5 为原始细胞 区域比例较低。而 R2 所占比例较大，通过 分析得出： 1、 CD45表达较强， SSC较大，为单核系的 特点。 2、 R2表达HLA-DR、CD4和CD14（部分表 达）、CD36、CD38、CD13/CD33； 3、不表达CD8，GLyA。 结合临床情况，符合急性单核细胞白血 病。 2019年3月20日星期三6时4分52秒
多参数流式细胞仪 在白血病/淋巴瘤免疫分型的应用
流式细胞术
流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)
利用 流式细胞仪 对处在快速直线流动状态中的单细胞或 者生物微粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体 加以分选的现代细胞分析技术。
流式细胞仪（Flow Cytometer)
2019年3月20日星期三6时4分52秒
23
急性髓系白血病成熟型
2019年3月20日星期三6时4分52秒
24
急性早幼粒白血病
从左图 CD45和SSC二维散点图中，可以 看出有两群细胞，R1和R2，通过分析原始细
胞R2可以得出：
1、不表达HLA-DR、CD34、CD14、CD36、 GLyA。
2、表达CD13/CD33、MPO、；
2019年3月20日星期三6时4分52秒
34
B原淋巴细胞白血病/淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
35
B原淋巴细胞白血病/淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
36
T原始淋巴细胞白血病/淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
37
T原始淋巴细胞白血病/淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
Early Thymocyte CD2-/+ CD5-/+ Common Thymocyte CD2+ CD5+ Dual CD4+/CD8+ sCD3Mature Thymocyte CD2+ CD5+ CD4+ or CD8+ sCD3+ Early BPrecursor TdT+ CD10clgsig-
2019年3月20日星期三6时4分52秒 15
2019年3月20日星期三6时4分52秒
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2019年3月20日星期三6时4分52秒
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2019年3月20日星期三6时4 分52秒
18
初治急白分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD13+ and/orCD117+ and/orCD33+
分析原始细胞R2（92.1）可以得出：
1、不表达CD61、CD36、GLyA。 2 、表达 HLA-DR 、 CD34 和 CD14 （部
分表达）、CD38、CD13/CD33；
3 、弱表达 CD4 ， CD33 表达比 CD13 高。 结合临床情况，符合急性粒单白
血病。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
27
急性白血病
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中， 可以看出有三群细胞， R1~R3 ，通过
分析原始细胞R2（92.1）可以得出：
1、不表达CD61、CD36、GLyA。 2 、表达 HLA-DR 、 CD34 和 CD14 （部
分表达）、CD38、CD13/CD33；
3 、弱表达 CD4 ， CD33 表达比 CD13 高。 结合临床情况，符合急性粒单白
CD7+ and/orCD2+
CD19+
Myeloid Lineage
T-Lineage
B-Lineage
Myeloid, no or minimal maturation
CD34+/CD117+/HLADR+ CD56+ CD15-/+ CD11b-, CD14-
Promyeloid
CD15+/CD117+/CD34-5Βιβλιοθήκη BeforeAfter
*
*
为什么进行设门？
设门（gating）是流式细胞仪分析中 的一种重要技术，只有通过最佳的设门方 式，才能准确地获取和分析。 “设门” 是指在细胞分布图中，根据该 图的细胞群分布选定其中想要分析的特定 细胞群。通过“设门”得到不同的 区域 （Region）。从而对其中的细胞进行单 参数或多参数分析。
集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算
机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一 种新型高科技仪器。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
2
2019年3月20日星期三6时4分52秒
3
FACS的工作原理
2019年3月20日星期三6时4分52秒
4
荧光补偿
2019年3月20日星期三6时4分52秒
Plasma Cell Leukemia/ Myeloma
CD38+ CD2-, CD19-
CD16+ and/or CD56+ CD2+, CD3-
NK LGL
CD19+ Clonal Ig B-Cell Lineage CD5+ CD10+
CD2+ CD3+
T-Cell Lineage
CD5-
B-CLL or Mantle Cell Lymphoma
2019年3月20日星期三6时4分52秒 7
2019年3月20日星期三6时4分52秒
8
正常BM各系细胞比率： 淋巴：20-30%：T：70%，B：20%，NK：10%； 单核：2-6%±；粒细胞：40-60%；有核红：<50%
FCM的主要测定指标：FSC，SSC，FL1，FL2，FL3（FL4） FSC：反应细胞的大小。SSC：反应细胞内颗粒的多少。 FCM设门法： FSC/SSC： 缺点： 不能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开 CD45/SSC：CD45是WBC抗原，RBC、Plt为阴性。 CD45在成熟细胞表达强，幼稚细胞表达弱， 在淋巴、单核及粒细胞表达强度不同。 优点：能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开。特异分析 白血病细胞免疫表型
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/-
HLADRCD11b-, CD14-
HLADR+ CD15+
CD11b+
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61
2019年3月20日星期三6时4分52秒
19
急性未分化白血病（AUL）
CD19+
B-Lineage
Common
Pre-B CD10+ cig+ TdT+ sig-
B
TdT+ CD10+ clgsig-
sCD3CD4CD8-
sig+ CD10+/clg+/TdT-
2019年3月20日星期三6时4分52秒
33
B/髓系MPAL和T/髓系MPAL
异常细胞的 SSC 较小， CD45 弱表达， 似有原淋的特点。此类细胞的免疫 标志： 1 、 表 达 cCD22 、 mCD22 、 CD19 、 CD13、CD33（部分表达）或者表达 cCD3、CD5、CD7、CD20、等。 2、弱表达CD15、MPO。 3 、 不 表 达 CD10 、 CD11c 、 CD14 、 CD42a、CD64等。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
20
急性髓系白血病微分化型
从左图CD45和SSC二维散点图中，可以看出 有两群细胞，R1和R2，R2的CD45表达比淋巴弱，
SSC也小。与单核细胞接近。通过分析可以得出：
1 、不表达 CD5 、 CD7 、 CD10 、 CD19 、 CD14 、 CD36、GLyA。
29
急性单核细胞白血病
2019年3月20日星期三6时4分52秒
30
急性巨核细胞白血病
从左图 CD45 和 SSC二维散点图中， R4 群 的 异 常 细 胞 有 较 大 的 SSC ， 并 且 CD45低。通过分析此类细胞得出： 1 、不表达 CD3 、 CD5 、 CD7 、 CD10 、
CD14 、 CD19 、 CD38 、 CD79a 、 HLADR、MPO、CD15和CD64。 2 、 R2 表 达 CD42a 和 CD61 、 CD34 、
21
急性髓系白血病未分化型
2019年3月20日星期三6时4分52秒
22
急性髓系白血病成熟型
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中，可以看 出有四群细胞，R1~R5，原始细胞R2的CD45表 达比淋巴 R1 弱， SSC 比淋巴细胞大。幼稚或成 熟粒增加。通过分析原始细胞R2可以得出： 1、不表达CD5、CD8、CD61、CD36、GLyA。 2 、表达 HLA-DR 、 CD13/CD33 、 CD34 、 CD38 、 CD7； 3、弱表达CD4； 结合以上情况，符合急性髓系白血病成熟 型。
3 、 增 加 二 线抗 体 ， 可见 CD11a 、 CD11b 、 CD18、CD64表达；而粒系标志CD15和CD65
弱表达或不表达。
结合以上情况，符合急性早幼粒白血病。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
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急性早幼粒白血病
2019年3月20日星期三6时4分52秒
26
急性粒单白血病
从左图 CD45 和 SSC 二维散点图中， 可以看出有三群细胞， R1~R3 ，通过
2、表达HLA-DR、CD13/CD33、CD34、CD33；
3、弱表达CD38； 由 于 CD33 阳 性 强 度 大 于 CD13 ， CD34 、 HLA-DR、CD38阳性强度低，而髓过氧化物酶阳 性，结合以上情况，提示这部分细胞属于分化较 差的髓系细胞。
2019年3月20日星期三6时4分52秒
急性未分化型白血病的主要特点： 原始细胞没有髓系分化的形态学特征， 基本不表达任何已知系列的膜标志物。 缺乏 T 或髓系的特异标志，如 cCD3 和 MPO 等；也不表达 B 系特异标志，如 cCD22、CD79a或是CD19等。同时也不 表达巨核细胞、浆细胞和DC的特异标 志 。 只 表 达 HLA-DR 、 CD34 或 CD38 ， TDT也是可阳性的。
CD10-
Follicular Cell Or Burkitt’s Lymphoma
SLVL or Marginal Zone Lymphoma or Hairy Cell Leukemia
2019年3月20日星期三6时4分52秒
MCL：t(11;14)；NCCN要求对所有CLL患者检测t(11;14)或CCND1表达
14
理想的AL免疫分型方案应满足以下几点要求：
①识别白血病细胞，能将其与正常细胞或反应性细胞相区别； ②鉴别白血病细胞的系列来源； ③根据细胞的分化程度对疾病进行亚型分型； ④鉴别用于检测MRD 的白血病相关免疫表型（LAIP）； ⑤帮助判断某些特异分子改变，即基因型检测； ⑥提供预后相关及治疗靶点的免疫标志检测结果。
38
CLL/SLL和LPL
2019年3月20日星期三6时4分52秒
39
浆细胞淋巴瘤
2019年3月20日星期三6时4分52秒
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2019年3月20日星期三6时4分52秒
41
2019年3月20日星期三6时4分52秒
42
慢淋和B淋巴瘤分类
CLL and Non-Hodgkins Lymphoma