毛细管区带电泳法分析不同来源血竭中龙血素 和龙血素

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$] 。测定血竭中的龙血 ’)* + ) 为其 主 要 有 效 成 分[ # ,
素 # 和龙血素 + 对 了 解 中 药 材 的 质 量 具 有 重 要 的 意义。 ’ ’ 目前, 血竭中龙血素 # 和龙血 素 + 的 同 时测 定 以高效液相色谱 法 ( ,-./ ) 为 主[ ! ( ) ]。 与 ,-./ 相 比, 高效毛细 管 电 泳 法 ( ,-/0 ) 具有更高的分离效 率, 更短的分析时 间, 更 灵 敏 的 检 测, 而且样品和试 剂耗量少, 因此被广泛应用于生物、 临床、 环境、 中药 及其制剂等复杂体系的分析中[ #" ( #$ ], 但采用高 效毛 细管电泳法分离 测 定 龙 血 素 # 和 龙 血 素 + 的 研 究 很少见报道。 田 颂 九 等[ #! ]采 用 胶 束 毛 细 管 电 动 色 谱法 ( 102/ ) 对龙血素 # 和龙血素 + 进行了分离 测定, 但方法的分析时间较长 ( $&* )$ 3)* ) 。与 102/ 相比, 毛细管区 带 电 泳 法 ( /40 ) 简 单、 快 速、 重现性好, 但采用 /40 同时分离测 定 血竭 中 龙 血素 # 和 龙 血 素 + 的 研 究 未 见 报 道。 本 文 采 用 高 效 毛 细管区带电泳法 ( ,-/40 ) 在 #+ 3)* 内实 现 了 对 龙 血素 # 和龙血 素 + 的 同 时 分 离 测 定。 该 方 法 不 仅 具有较好的重现性 与 较 高 的 灵 敏 度, 而且与现有文 献报 道 的 同 时 分 离 测 定 龙 血 素 # 和 龙 血 素 + 的
!21%&*4% :< 7’=5##’Q( R"81 1#17SQ"=O"Q1C5C 41SO":( ;@2 ) L"Q SO1 C549#S’81"9C :1S1Q458’S5"8 "L #"9Q15Q58 < ’8: #"9Q15Q58 ? T’C :1F1#"=1: U’C1: "8 SO1 "=S545R1: 7"8:5S5"8C "L SO1 => ,7"43 ="C5S5"8 ’8: 7"8718SQ’S5"8 "L SO1 Q98858G U9LL1Q C"#9S5"8$ D"9Q15Q58 < ’8: #"9Q15Q58 ? T1Q1 C1=3 ’Q’S1: ’8: :1S1Q4581: 1LL17S5F1#( T5SO58 #$ 458 58 ’ Q98858G U9LL1Q C"#9S5"8 "L !" 44"# , D %’ ! ? ) *( ( => -. -* ’:V9CS1: T5SO %’*> C"#9S5"8 ) 7"8S’5858G #". " E ( F , F ) ’71S"85SQ5#1 ,$. " E ( F , F ) 1SO(#181 G#(7"# ’8: #. " E( F , F ) U9S’8"# ,T5SO SO1 ’==#51: F"#S’G1 "L !" A! ,7’=5##’Q( S14=1Q’S9Q1 "L !$ B ,:1S17S5"8 T’F1#18GSO "L !## 84 ,’8: 58V17S5"8 "L $ C ’S % ))( .’$ 0O1 #583 1’Q Q’8G1C L"Q SO1 :1S1Q458’S5"8 "L #"9Q15Q58 < ’8: #"9Q15Q58 ? T1Q1 #. "" / #"" 4G , D ’8: ". $" / #"" 4G , D ,Q1C=17S5F1#($ 0O1 :1S1Q458’S5"8 "L #"9Q15Q58 < ’8: #"9Q15Q58 ? 58 :Q’G"8 ’ C U#"": LQ"4 8’S9Q’# ’8: ’QS5L575’# 58"79#’S5"8 T’C =1QL"Q41: U( SO1 =Q"="C1: 41SO":$ 0O1 Q1#’S5F1 CS’8:’Q: :1F5’S5"8C L"Q SO1 :1S1Q458’S5"8 "L SO1 ST" 7"8CS5S918SC 58 C’4=#1C T1Q1 LQ"4 ". ’ E S" %. * E ,’8: SO1 Q17"F1Q51C Q’8G1: U1ST118 -$. # E ’8: #"$. * E $ 0O1 41SO": 5C C54=#1 ,Q’=5: ’8: ="CC1CC1C O5GO1Q Q1=Q":975U5#5S( ’8: 1LL575187($ +S 7’8 U1 9C1: L"Q SO1 :1S1Q458’S5"8 "L #"9Q15Q58 < ’8: #"9Q15Q58 ? 58 :Q’G"8 ’ C U#"":$ 8$3 9+&/1 :7’=5##’Q( R"81 1#17SQ"=O"Q1C5C( ;@2 ) ;#"9Q15Q58 < ;#"9Q15Q58 ? ;:Q’G"8 ’ C U#"": , , 血竭是一种名 贵 的 中 药 材, 是一些植物如百合 科剑叶龙血树等受到损伤后感染真菌等微生物后产 生的一种代谢产物, 具有广泛的物理活性, 能活血散 瘀、 定痛止血和敛 疮 生 肌 等, 可 以 用 于 跌 打 损 伤、 瘀
( ! ! "#$%%& %’ ($)*+#,& "#+)-#) ,-. /)#$-%&%01 ,23--,- 4-+5)67+81 ,9)1 :,;%6,8%61 %’ <).+#+-,& ($)*+7861 ’%6 =,836,& >)7%36#) ,<+-+7861 %’ ?.3#,8+%- ,93-*+-0 "#$$%! ,($+-, ; & ! 23--,- @-78+838) %’ <+#6%;+%&%01 ,23--,- 4-+5)67+81 ,93-*+-0 "#$$%! ,($+-, )
!" 实验部分
! ! !" 主要仪器与试剂 ’ ’ - 5 #/0 61 178 型 高 效 毛 细 管 电 泳 仪, 配二极 管阵 列 紫 外 检 测 器 ( -7# , 美 国 +(9:3;* /%&$<(’ 公司) , 数据处 理 采 用 !$ 2;’;< 软 件; 未涂层石英毛 细管 ( +, 93 ( 有效长度 +" 93 )- ,+ ! 3 , 河北省永 年锐沣色谱器件有限公司) 。 ’ ’ 龙血素 # 和龙 血 素 + 对 照 品 ( 纯 度 大 于 ). = ) 购自中国药 品 生 物 制 品 检 定 所, 其 结 构 见 图 #。 实 验用其他试剂均为分析纯, 水为高纯水。 ’ ’ 样品 # 和样品 $ 分 别 为 同 一 棵 剑 叶 龙 血 树 (产 地为云南思 茅 ) 的 树 干 和 树 叶 上 天 然 形 成 的 血 竭, 样品 ! 至样品 & 是在该剑叶龙血树的树干上用不 同 &##! 、 ,#$# 和 $&& ) 诱导 真菌 ( 编号分别 为 $&#, 、 后形成的血竭。 ! ! #" 溶液的配制 ’ ’ 标准溶液: 龙血素 # 和龙血素 + 的 标准 品 储 备 液 ( #* " 3> 5 3. ) 均 用 甲 醇 配 制, 于 % ? 下 保 存; 工 作溶液由储备液用甲醇稀释得到。
#$ ] ,-./ 和 102/ 方法[ % ( ) , 相比, 分析时间更短。
图 ! " ( ") 龙血素 # 和 ( $) 龙血素 % 的结构式 &’(! ! " )*+,’-". /012-021+/ 34( " ).321+’1’5 # "56( $ ).321+’1’5 %
’ ’ 电泳运 行 缓 冲 溶 液: 含 #" =( @ 5 @ , 下同) 乙 腈、 + = 乙二醇和 # = 正 丁 醇 的 $" 33%$ 5 . A; $ + % B , 缓 冲溶 液 ( 用 A;B, 溶 液 调 节 C, )* ). ) , 使用前用 "* %+ ! 3 滤膜过滤。 ’ ’ 样品溶液: 将同一棵剑叶龙血树的树干和树叶 上天然形成的血竭以及在该树的树干上用不同真菌 人工诱导形成的血 竭 干 燥 后 粉 碎, 用甲醇水浴回流 约 . D, 然 后减压 蒸馏除 去溶 剂, 得到血 竭浸膏。 称 取干燥后的浸膏约 "* $ > , 用甲醇超声溶解, 过滤, 滤 液用甲醇定容于 $+ 3. 容量瓶中, 得样品溶液, 于% ? 下保存备用。 ! ! $" 78)9 条件与方法 ’ ’ 电 泳 介 质 为 #* $ 节 配 制 的 电 泳 运 行 缓 冲 液, 分 离电压为 $" :E , 柱温为 $+ ? , 检测波长为 $## *3 ; 压力进样 为 ! %%, -; - +* " F 。 为了确 保重现 性, 毛 细管 柱 每 天 在 运 行 前 和 两 次 运 行 间 依 次 用 "* # 3%$ 5 . A;B, 溶液、 重蒸水和运行缓冲溶液分别冲 洗 !、 ! 和 % 3)* 。
杨雪滢 # , , 胡旭芳 # , , 李 , 菲# , , 王兴红 ! , , 曹秋娥 # !
( # $ 云南大学化学科学与工程学院 教育部自然资源药物化学重点实验室, 云南 昆明 ’$""-# ;! $ 云南大学微生物研究所,云南 昆明 ’$""-# ) 摘要: 在系统优化了电解质溶液的 => 、 组成、 浓度及仪器条件的基础上, 建立了一种测定不同来源血竭中龙血素 < 和龙血素 ? 的毛细管区带电泳 ( ;@2 ) 方法。采用 !" A! 的分离电压, !$ B 的毛细管柱温, !## 84 的检测波长以及 ( 用 %’*> 调 节 => 到 -. -* , 含 有 #" E( F , F , $ C 的压力 ( % ))( .’ ) 进样时间, 在 !" 44"# , D 的 %’ ! ? ) * ( 缓 冲 溶 液 下同) 乙腈、 $. " E 乙二醇和 #. " E 正丁醇) 中, 龙血素 < 和 龙 血 素 ? 在 #$ 458 内 得 到 了 有 效 分 离 与 检 测。 方 法 的 线性范围对于龙血素 < 和龙血素 ? 分别为 #. " & #"". " 4G , D 和 ". $ & #"". " 4G , D 。 将 该 方 法 用 于 天 然 血 竭 及 人 工诱导血竭中龙血素 < 和龙血素 ? 的测定, 相对标准偏差在 ". ’ E & %. * E 之间, 加 标 回 收 率 在 -$. # E & #"$. * E 之 间。方法具有简单、 快速、 重现性较好和准确度较高的优点, 可以用于血竭样品中龙血素 < 和龙血素 ? 的测定。 关键词: 毛细管区带电泳; 龙血素 < ; 龙血素 ? ; 血竭 中图分类号: *’$*, , , 文献标识码: < , , , 文章编号: #""" 3*(#% ( !"#! ) "$ 3"$"# 3"’
#$%$&’()*%(+) +, -+.&$(&() ! *)/ -+.&$(&() " () /&*0+) ’ 1 2-++/ 23 4*5(--*&3 6+)$ $-$4%&+57+&$1(1
H<%I J91(58G # ,>K J9L’8G # ,D+ M15 # ,N<%I J58GO"8G ! ,;<* P591 # !
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第 !" 卷
$] 血作痛、 臁 疮 久 不 收 口 等 症[ # , 。血竭主要含黄酮
类、 芳香类、 皂苷类等化学成分, 其中 % !" 羟基 "$ , %"二 甲氧基二氢查耳酮 ( 龙血素 # ,$%&’()’)* # ) 和 % !" 羟 基 "$ , %, & " 三甲 氧 基 二 氢 查 耳 酮 ( 龙 血 素 + ,$%&’()"
曹秋娥, 博士, 教授, 主要研究方向为色谱及分离材料 $ 01# : ( "*(# ) $"%%(!% ,234’5# :617’" + (89$ 1:9$ 78$ ! 通讯联系人: 基金项目: 云南省自然科学基金项目 ( !""* ;)"’’ ) 和云南省科技厅普洱市党政一把手工程项目 ( !"#" <2""$ ) $ 收稿日期: !"## 3#! 3"!
!"#! 年 $ 月 &’( !"#!
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研究论文
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