植物快速繁殖技术实验指导

《植物快速繁殖技术》

实验指导

李国平编

生态与资源工程系

2014年1月8日

目录

前言III

学生实验守则IV

实验一观赏植物种子无菌萌发与试管开花技术1实验二金线莲的快速繁殖技术3

实验三铁皮石斛的快速繁殖技术5

实验四一种植物的组织培养与快速繁殖8

前言

植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。近40年以来，植物组培技术已渗透到植物生理学、病理学、遗传学、药学、育种以及生物化学等各个研究领域，为快速繁育优良品种，培育无毒苗木，进行突变筛选培育，药用植物工厂化生产，种质保存和基因库建立等方面开辟了新途径，成为生物学科中的重要研究技术和手段之一。现如今，植物组织培养技术具有保持花卉优良性状、培育脱毒苗木、保存种质资源等优势，根据这些优势，植物栽培技术也被广泛应用于花卉的种苗繁殖与生产之中。

学生实验守则

一、自觉遵守纪律和各项规章制度，保持室内安静，注意环境卫生，不吸烟、不随地吐痰、不乱扔纸屑杂物，爱护公务。

二、实验过程中应严肃认真，严格遵守操作规程。贵重、精密仪器的使用须在专人指导下进行。

三、爱护实验仪器设备，厉行节约。仪器若有损坏，应如实报告，填写登记表。凡损坏、丢失的仪器设备，均应查清原因，按仪器设备损坏、丢失赔偿制度处理。

四、实验物品不得随意翻动，严禁携出室外。若需借用应办理借物手续。

五、注意实验室安全，易燃易爆品的操作应远离火源。

六、实验结束，由实验指导教师和管理人员检查清点仪器设备，学生应办好交接手续，做好清洁卫生，及时关好水电阀门，保持实验室和仪器的清洁整齐。

实验一观赏植物种子无菌萌发与试管开花技术

一、实验目的

掌握利用种子作为外植体进行快速繁殖的方法；掌握试管花卉的培养技术；了解植物开花的影响因素。

二、实验原理

试管开花是指用组织培养的方法，使植物开花的过程在培养容器中完成。一般情况下，植物必须达到某种成熟阶段时才能开花。自1946年罗士韦在对菟丝子茎尖培养时发现了花器官的形成后，植物组织培养技术已用于植物离体开花的研究。影响试管开花的因素主要有外植体，外源植物激素，营养水平和环境因素等4个方面。通过改变培养基中外源植物激素、营养水平和培养环境条件，可以诱导培养物在试管内开花。

试管花卉作为高新技术与工艺生产相结合的新生物, 不仅在理论研究上有重要作用, 而且可以利用成花决定因素的研究来培养能迅速进入生殖阶段的试管苗或有观赏价值的试管花卉, 并将这一技术直接应用于花卉生产。试管花卉有较大市场前景,

目前可以做成试管花卉的植物有石斛兰、龙角、波露、短叶芦荟、美丽十二卷、鸡冠花、玫瑰、红莲、凤梨、大花蕙兰、狼牙掌、燕尾芦荟、非洲紫罗兰、下城芦荟、金线莲、迎春、六月雪、红叶李、无刺火棘、紫薇、情人草、康乃馨、幸运草、草莓、非洲菊、文心兰等。

三、实验器具与药品

①器材：电子天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱、移液枪、pH计、高压灭菌锅、超净工作台、镊子、酒精灯、棉球、三角瓶、培养皿。

②试剂：MS培养基各种母液、PP333、KT、6-BA、NAA、IAA、蔗糖、琼脂、酒精、升汞。

③以矮生鸡冠花品系的种子为试材。

四、实验内容与操作步骤

1、培养基的配制

①种子萌发培养基：ＭＳ基本培养基

②增殖培养基：MS+NAA 0.1mg·L-1+6-BA 1.0mg·L-1+ 蔗糖20 g·L-1+ 琼脂10 g·L-1

③试管开花诱导培养基：MS+ PP333 0.5mg·L-1+NAA 0.01mg·L-1+ 蔗糖20 g·L-1+ 琼脂10g·L-1

2、种子灭菌

浸泡10 min，先用洗洁精洗净种子，用自来水流水沖洗干净；再用0.1% HgCl

2

最后用无菌水反复冲洗5 遍。在超净工作台上将灭菌后的种子接种到MS 培养基上，每三角瓶接种5-10个外植体。培养室条件为：光照12h·d-1、光照强度1500Lx、温度25～26℃。14d 后统计种子发芽率和污染率。

3、增殖培养

当无菌苗长到约2cm 时，取其中约1cm 芽段，接种到②增殖培养基上，培养26 d 后统计其增殖倍数。

4、开花诱导

将高约２～３ｃｍ的试管苗，转到③试管开花诱导培养基中，培养条件：日温（２５±２）℃，夜温（２０±２）℃，光照强度１５００～3０００ｌｘ，光照时间１２ｈ／ｄ，接种30d后观察统计试管内开花情况。

五、实验结果

观察试验结果，报告种子发芽率和污染率、增殖倍数和试管开花情况。

六、思考题：

什么是试管花卉？有何开发价值？影响试管开花的主要因素有哪些？

实验二金线莲的快速繁殖技术

一、实验目的

掌握利用组织培养方法进行金线莲快速繁殖的技术；了解影响金线莲快速繁殖的各种因素。

二、实验原理

金线莲为兰科开唇兰属花叶开唇兰((Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.)，又名金线兰、金丝草。主要种植于我国福建、台湾、广东等亚热带及热带地区，素有“金草”、“神药”等美称。金线莲喜欢生长在潮湿、阴凉的环境中，温度需要控制在20 ～ 28 ℃之间，喜散射光，最忌阳光直射，对环境的要求比较严格。近年来，由于其药用价值不断被发掘，金线莲人工环境中的量产也逐步实现。特别是在福建、广东等华南地区，应用金线莲组织培养技术生产商品金线莲的模式不断兴起。

野生金线莲自然繁殖是用种子繁殖的，其人工繁育技术难度较大。应用组培繁殖可大大缩短金线莲成苗时间，显著提高培养效率，降低育苗成本，是金线莲种苗生产的重要方法。

三、实验器具与药品

①器材：电子天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱、移液枪、pH计、高压灭菌锅、超净工作台、镊子、酒精灯、棉球、三角瓶、培养皿。

②试剂：MS培养基各种母液、KT、6-BA、NAA、IAA、蔗糖、琼脂、酒精、升汞、香蕉汁、活性炭等。

③金线莲野生种苗或试管苗。

四、实验内容与操作步骤

1、培养基的配制

①茎段诱导培养基：MS + BA 1.5+ NAA 0. 5 + 香蕉汁100 g/L

②继代增殖培养基：12MS + BA 2.0 + NAA 0.3 + 香蕉汁100 g/L + AC 0.2%;

③生根培养基:12MS + IBA + NAA 0.3 + AC 0.2%